Глюкозурія. Визначення глюкози у сечі

Глюкозурія. Визначення глюкози у сечі.

Глюкозурія

Глюкозурія (glucosuria) - поява глюкози в сечі:

фізіологічна (при введенні з їжею великої кількості вуглеводів, після емоційної напруги);
позаниркова (цукровий діабет, цироз печінки, панкреатит, рак підшлункової залози, тиреотоксикоз, синдром Іценка - Кушинга, феохромоцитома, черепно-мозкові травми, інсульти, отруєння оксидом вуглецю, морфіном, хлороформом);
ренальна (хронічні нефрити, нефрози, амілоїдоз, гостра ниркова недостатність, вагітність, відравлення фосфором, деякими лікарськими препаратами).

Для правильної оцінки глюкозурії необхідно дослідити сечу, зібрану за добу, та обчислити добову втрату цукру із сечею.

При нормально функціонуючих нирках глюкозурія проявляється лише у випадках, коли збільшується концентрація цукру на крові, тобто. при гіперглікемії. Так званий нирковий ріг глюкози - концентрація глюкози в крові, вище якої відзначається глюкозурія (7,8-8 ммоль/л). Концентрація глюкози у крові зазвичай не перевищує 4,6–6,6 ммоль/л (0,8–1,2 г/л).

Рідше спостерігається ниркова (ренальна) глюкозурія, пов'язана з порушенням реабсорбції глюкози в канальцях, коли з'являється глюкозурія при нормальній концентрації цукру в крові.

Визначення глюкози у сечі

Якісні проби

Більшість якісних проб, застосовуваних визначення глюкози в сечі, грунтується на редукційних властивостях альдегідної групи глюкози. Як окислювач використовують яку-небудь сіль, що легко редукується, що дає при відновленні забарвлене з'єднання. До таких способів відносять пробу Фелінга, Гайнеса, Ніландера, Бенедикта, глюкозооксидазну пробу.

Глюкозооксидазна(нотатинова) проба

В основі методу лежить окиснення глюкози ферментом глюкозооксидазою (нотатином). Перекис водню, що утворюється при цьому, розщеплюється іншим ферментом (пероксидазою) і окислює барвник-індикатор (похідне бензидину), змінюючи його забарвлення. Для визначення глюкози в сечі індикаторний папірець «Глюкотест» занурюють у випробувану сечу на 1–2 секунди так, щоб нанесена на папірець жовта смуга повністю змочилася. Через 2 хвилини орієнтовно визначають концентрацію глюкози в сечі шляхом порівняння інтенсивності забарвлення кольорової смуги з кольоровою шкалою, що є в стандартному наборі. Необхідно пам'ятати, що при дуже високій глюкозурії (понад 2%) інтенсивність забарвлення кольорової смуги не змінюється. Індикаторний папір слід зберігати у щільно закритому пеналі, у темному прохолодному місці (але не в холодильнику!).

Проба Гайнеса

Реакція заснована на властивості глюкози відновлювати гідрат окису міді у лужному середовищі (синього кольору) у гідрат закису міді (жовтого кольору), а потім у закис міді (червоного кольору). Щоб з гідрату оксиду міді при нагріванні не утворився чорний осад міді, до реактиву додають гліцерин, гідроксильні групи якого зв'язують гідрат оксиду міді.

Реактив Гайнеса готують так:

1) 13,3 г х. ч. кристалічного сульфату міді (CuSO4 · 5H2O) розчиняють у 400 мл води; 2) 50 г їдкого натру розчиняють у 400 мл води; 3) 15 г ч. або ч. д. а. гліцерину розводять у 200 мл води. Змішують 2-й та 1-й розчини і відразу доливають 3-й. Реактив стійкий.

Пробу проводять у такому порядку: до 3-4 мл реактиву додають 8-12 крапель сечі до появи блакитного забарвлення. Змішують і нагрівають верхню частину пробірки до початку кипіння над полум'ям газового пальника або спиртування. Нижня частинапробірки є контролем. За наявності глюкози в сечі спостерігається ясний перехід кольору з блідо-блакитного до жовтого.

Проба Гайнеса є надійною, тому що при великому розведенні сечі (8–12 крапель сечі та 3–4 мл реактиву) відновлююча дія інших редукуючих речовин сечі (сечова кислота, індикан, креатин, жовчні пігменти), а також деяких лікарських речовин (ацетилсаліцилова кислота) , кофеїн, ПАСК) виражено слабо. Наявність великої кількості білка в сечі заважає правильній оцінці редукційних проб, тому бажано попередньо видалити його, підкисивши сечу кількома краплями оцтової кислоти, нагрівання до кипіння і відфільтрувавши.

Кількісні методи

Колориметричний метод визначення глюкози в сечі за Альтгаузеном

Принцип способу: при нагріванні глюкози з лугом утворюється кольорова реакція. Техніка визначення: До 4 мл сечі доливають 1 мл 10% їдкого натру і кип'ятять 1 хв. Через 10 хв після кип'ятіння колір рідини порівнюють із кольоровою шкалою, на якій біля кожної пофарбованої смуги вказано відсоток вмісту глюкози. Найкраще користуватися шкалою, приготовленою за допомогою реактивів. Для цього беруть 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 і 4,0% розчини глюкози, обробляють їх так само, як і пробу сечі, що досліджується, і щільно закривають пробками. Колір цих розчинів не змінюється приблизно 10 днів.

Метод Альтгаузена дає орієнтовні результати і тому можна користуватися за відсутності поляриметра. Винятковою простотою виконання відрізняється модифікований метод Альтгаузена, який вимагає дефіцитних реактивів і займає мало часу.

Принцип модифікованого методу Альтгаузена: при нагріванні сечі, що містить глюкозу, з розчином їдкого лугу змінюється колір вмісту пробірки.

Таблиця 9.Приготування розведень для побудови калібрувального графіка визначення глюкози в сечі за модифікованим методом Альтгаузена

4 мл досліджуваної сечі змішують з 1 мл 10% розчину їдкого натру і ставлять у киплячу водяну лазню на 3 хв. Через 10 хв пробу колориметрують на ФЕКу із зеленим світлофільтром у кюветі з робочою шириною 5 мм. Як контроль беруть воду. Кількість цукру в сечі знаходять по калібрувальній кривій, для побудови якої готують 8% стандартний розчин глюкози, з якого потім необхідно приготувати на прозорій сечі з низькою відносною щільністю 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0% розчини глюкози за схемою, наведеною в табл. 9: з кожного розведення беруть по 4 мл розчину, додають по 1 мл 10% розчину їдкого натру та обробляють як дослідні проби. Визначають оптичну щільність у кожному відповідному розведенні та будують графік. Для зручності роботи з графіку становлять таблицю. Слід пам'ятати, що сечу перед визначенням глюкози слід перемішати і при високих концентраціях глюкози в пробі (4–5 %) її необхідно розвести.

Кольорова реакція з ортотолуїдином

Заснована на тому, що глюкоза при нагріванні з реактивом ортотолуїдин дає забарвлену сполуку, ступінь забарвлення якої пропорційна концентрації. Для проведення проби готують ортотолуїдиновий реактив (94 мл крижаної оцтової кислоти розчиняють 0,15 г тіомочевини і додають 6 мл ортотолуїдину) і стандартний розчин глюкози. Сечу розводять у 2-10 разів залежно від характеру якісної проби. 0,1 мл розведеної сечі змішують з 4,5 мл ортотолуїдинового реактиву, поміщають на 8 хв у киплячу водяну баню, після чого відразу охолоджують до нормальної (кімнатної) температури. Отриманий кольоровий розчин колориметруютьна ФЕК при довжині хвилі 590-650 нм (помаранчевий або червоний світлофільтр) проти контролю, який ставлять також, але замість сечі беруть стандартний розчин глюкози. Наявність білка в сечі не заважає визначення глюкози даним методом, тому він є кращим.

Поляриметричний спосіб визначення глюкози у сечі

Поляриметричний спосіб дозволяє визначити відсоток глюкози у сечі за допомогою так званого сахариметра. Принцип визначення ґрунтується на тому, що глюкоза, що знаходиться в розчині, обертає площину поляризованого світла пропорційно вмісту глюкози в розчині. Перед визначенням необхідно відзначити препарати тетрацикліну, що екскретуються із сечею та спотворюють результати за рахунок додаткової оптичної активності. Для дослідження сечу необхідно звільнити від білка та профільтрувати. Якщо сеча після фільтрування залишається каламутною, використовують адсорбент. Трубку поляриметра заповнюють просвітленою сечею, накривають шліфованим скельцем, щільно загвинчують, витирають насухо і поміщають в апарат. За інтенсивністю затемнення правої половини поля зору поляриметр визначають кут відхилення поляризованого променя, що виражається в градусах шкали приладу. Кут відхилення 1° відповідає 1% глюкози (при довжині трубки 18,94 см).

Цей метод на сьогоднішній день використовується рідко, оскільки має ряд недоліків: суб'єктивний (індивідуальне сприйняття освітлення), досить трудомісткий і дає неточні результати, якщо не досягнуто повної прозорості сечі.

Чи живий Христос? Чи Христос воскрес із мертвих?Дослідники вивчають факти