Сутність реакцій імунітету
ДЕРЖАВНА БЮДЖЕТНА ОСВІТАЛЬНА УСТАНОВА ВИЩОЇ ПРОФЕСІЙНОЇ ОСВІТИ
«П'ЯТИГОРСЬКА ДЕРЖАВНА ФАРМАЦЕВТИЧНА АКАДЕМІЯ»
МІНІСТЕРСТВА ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я І СОЦІАЛЬНОГО РОЗВИТКУ Укаїни
КАФЕДРА БІОЛОГІЧНОЇ ХІМІЇ І МІКРОБІОЛОГІЇ
Реакції імунітету
Методичні вказівки для самостійної позааудиторної роботи студентів очної форми навчання з дисципліни С2.Б.12 – мікробіологія
П'ятигорськ 2012
УДК 576. 8. 097 (076.5)
ББК 52.6 я 73
Д 68
Рецензент: ст. викл. кав. біохімії та мікробіології к.б.н. Н.В. Постнікова
Д 68 Реакції імунітету: методичні вказівки для самостійної позааудиторної роботи студентів заочної форми навчання дисципліни С2.Б.12 – мікробіологія / О.Г. Доркіна. - П'ятигорськ: П'ятигорська ДФА. 2012. - 28 с.
Методичні вказівки для самостійної позааудиторної роботи студентів з мікробіології «Реакції імунітету» складено відповідно до Прикладної програми з мікробіології, затвердженої відповідно до ФГОСТ-3 ВПО для студентів заочної форми навчання. Матеріал вказівок містить опис механізмів, особливостей та методів постановки основних імунодіагностичних реакцій. Доступна форма викладу матеріалу у поєднанні з малюнками та таблицями допоможе студентам у засвоєнні матеріалу, написанні питань контрольної роботи та вирішенні завдань та вправ з даного розділу.
УДК 576. 8. 097 (076.5)
Допущено до внутрішньовузівського видання
проф. _____________________ В.В. Гацан
Протокол № 516 від « » 2012 р.
Ó П'ятигорська державна фармацевтична академія, 2012
Зміст
1. Сутністьреакцій імунітету ……………………………………….4
2. Отримання діагностичних сироваток ………. 5
3. Реакція аглютинації, її різновиди, способи постановки, застосування ……………………………………………………………..6
4. Реакція преципітації, її різновиди, способи постановки, застосування ……………………………………………………………11
6. Реакція зв'язування комплементу …………………………………..15
7. Реакції з міченими компонентами……………………………….19
8. Імуноферментний аналіз (ІФА). Схеми постановки реакції визначення антигену і антитіла …………………………………. 22
9. Радіоімунний аналіз (РІА) та імуноблотинг ………………. 25
10. Реакція нейтралізації токсину антитоксином і реакція нейтралізації вірусів ………………………………………………26
ВСТУП
Мета розділу.
Вивчити механізми, особливості та методи постановки різних імунодіагностичних реакцій.
Навчально-цільові питання.
Сутність реакцій імунітету. Отримання діагностичних сироваток. Реакція аглютинації та її різновиду; реакція преципітації та її різновиду (реакція кільцепреципітації, реакції преципітацій у гелі, імуноелектрофорез); реакції лізису (реакція гемолізу та бактеріолізу; реакція зв'язування комплементу. Реакції імунітету з міченими компонентами: РІФ, ІФА, РІА, імуноблотинг. Реакція нейтралізації токсину антитоксином та реакція нейтралізації вірусів
Сутність реакцій імунітету.
Реакції імунітету - це реакції між антигеном та антитілом або між антигеном та сенсибілізованими лімфоцитами, які відбуваються в живому організмі та можуть бути відтворені в лабораторних умовах.
У реакціях імунітету, які ми вивчаємо, як антитіло обов'язково бере участь сироватка хворої людини або імунної тварини, тому вониназиваються серологічними (від лат. Serum - сироватка).
Серологічні реакції використовуються у двох випадках:
1) виявлення антитіл в сироватці до певного антигену, тобто. для серологічної діагностики інфекційного захворювання;
2) для ідентифікації антигенів мікроорганізмів за допомогою відомих антитіл (імуна діагностична сироватка), тобто. для серологічної ідентифікації (серотипування) мікроорганізмів, ін антигенів.
При цьому невідомий компонент визначають за відомим. Наприклад, у першому випадку для виявлення антитіл у сироватці хворого беруть відому лабораторну культуру мікроба або діагностикум (завись убитих мікробів певного виду, приготовлена у виробничих умовах). Якщо сироватка хворого реагує з певним антигеном, отже в ній є відповідні антитіла, і можна думати, що даний мікроб є збудником хвороби у хворого, що обстежується.
У другому випадку для визначення антигену (родової, видової та типової приналежності мікроорганізму) потрібно його випробувати в реакції з відомою імунною сироваткою, яка містить антитіла до відомого антигену (мікроорганізму). Позитивний результат реакції говорить про те, що виділений мікроб ідентичний тому, яким імунізували тварину для отримання імунної сироватки.
Загальні закономірності серологічних реакцій:
1. Реакції ставляться in vitro.
2. Виявляються при імунологічній відповідності (гомологічності) антигену та антитіла, в оптимальних температурних умовах та рН середовища.
3. Протікають у дві фази (специфічна та неспецифічна).
Специфічна фаза характеризується поєднанням активного центру антитіла з детермінантною групою антигену. Комплекс антиген-антитіло (АГ+АТ)стабілізовано нековалентними зв'язками: гідрофобні взаємодії, водневі зв'язки, вандерваальсові сили. Міцність сполуки АГ+АТ обумовлена компліментарністю або просторовою точністю їх взаємодіючих ділянок – активного центру антитіл та антигенної детермінанти антигену. Специфічна фаза розвивається швидко, але видимої зміни немає. Потім, повільніше, розвивається неспецифічна фаза – зовнішній прояв реакції антиген-антитіло.
Неспецифічна фаза здійснюється зазвичай у присутності електролітів. Так як антигени полівалентні, а антитіла двох (Ig G) і більше (Ig M) валентні, їх з'єднання призводить до утворення конгломератів, що випадають в осад у присутності електролітів. Зовнішні прояви реакції залежить від властивостей антигенів і може бути таких видів: пластівці, якщо взаємодії з антитілами беруться корпускулярні антигени (феномен аглютинації); помутніння, якщо з антитілами реагують розчинні (молекулярні) антигени – феномен преципітації.
Серологічні реакції характеризуються специфічністю та чутливістю. Під специфічністю розуміють здатність антигенів реагувати лише з гомологічними антитілами. Чутливість характеризується мінімальною кількістю антигенів та антитіл, які виявляє дана реакція.
У лабораторній практиці використовують реакції аглютинації, преципітації, зв'язування комплементу та ін.