| Пріоритети: | Винахід відноситься до ветеринарії. Засіб для діагностики субклінічного маститу у великої рогатої худоби, що містить сульфонол і індикатор, відрізняється тим, що як індикатор використовують нейтральний червоний, метиленовий синій і воно додатково містить їдкий калій при наступному співвідношенні компонентів, мас.%: сульфонол технічний 4 ,77, нейтральний червоний 0,001-0,003, метиленовий синій 0,001-0,003, їдкий калій 0,09-0,11, вода - інше. Засіб дозволяє діагностувати субклінічний мастит у великої рогатої худоби на ранній стадії захворювання. 1 табл.
Винахід відноситься до ветеринарії та може бути використане для діагностики субклінічного маститу у корів.
Відомо засіб діагностики субклінічного маститу шляхом визначення лізоциму в молоці. Воно засноване на здатності лізоциму молока затримувати зростання тест-мікробу (золотистий стафілокок штаму ВМ). По зоні затримки зростання судять про титр лізоциму в молоці та здоров'я молочної залози (3).
Використання цього засобу діагностики за умов господарствапрактично здійснити важко, так воно вимагає спеціально обладнаної лабораторії та певних навичок у проведенні мікробіологічних досліджень, потрібна культура мікроорганізму.
Відомо засіб визначення кількості хлоридів у молоці як індикатора наявності субклінічного маститу. У молоці здорової корови міститься 0,08-0,14% хлоридів. При маститах їх кількість у вмісті вимені збільшується. У пробірки вносять по 5 мл 1,5% розчину азотнокислого срібла, по 2 краплі 10% водного розчину хромовокислого калію і додають по 1 мл досліджуваного молока. Вміст пробірок перемішують. Якщо в досліджуваному молоці кількість хлоридів перевищує 0,14%, суміш набуває жовтого забарвлення (2).
Недоліком цього засобу є те, що в молоці не завжди створюється необхідна визначення концентрація іонів хлору.
Відомо засіб діагностики субклінічного маститу, заснований на визначенні хлор-цукрового числа (співвідношення хлоридів та лактози). Лактозу (молочний цукор) визначають йодометричним методом (5).
Недоліком цього засобу є те, що це хлор-цукрове число може зміняться і при інших захворюваннях, у тому числі і при кетозі, і тим самим призводити до спотворених результатів.
Відомо засіб діагностики субклінічного маститу шляхом виміру рН молока. Якщо молоко здорової тварини має рН у середньому 6,3-6,9, то при патологічних станах реакція середовища зсувається у лужний бік – 7,0 та вище. Для цього на білу порцелянову пластинку наносять 2-4 краплі досліджуваного молока і додають до них 1-2 краплі 0,2% спиртного (на 65-градусному спирті) розчину бромтимолової сині. Фарбування молока у жовтий або зеленувато-жовтий колір приймається за показник нормального молока; синьо-зеленеабо зелено-жовте фарбування проби – ознака субклінічного маститу (4).
Недоліком даного засобу діагностики є те, що секрет молочної залози має високу буферну ємність і нейтралізує водневі іони, перешкоджаючи індикації рН, що змінився.
Відомі засоби діагностики субклінічного маститу, що ґрунтуються на виявленні кров'яних пігментів у молоці. Для цього в пробірку вносять 5 мл 3-відсоткового розчину перекису водню та 2 мл насиченого розчину бензидину в крижаній оцтовій кислоті. Вміст пробірки ретельно збовтують і потім краплями вносять в пробірку досліджуване молоко (2-10 крапель). За кількістю крапель молока, внесеного в пробірку, у якому з'явилася позитивна реакція, можна орієнтовно будувати висновки про кількості кров'яних пігментів у молоці. При позитивної реакції вміст пробірки спочатку набуває зеленого кольору, а через 5-10 хвилин воно стає темно-синім. При негативній реакції - вміст світлий, на дні пробірки утворюється білуватий пластівцеподібний осад (1, 4).
Недоліком цього засобу є те, що в початкових стадіях субклінічного маститу реакція на кров'яні пігменти не завжди є достовірною ознакою захворювання, що розвивається, у той час як при деяких фізіологічних і патологічних станах вимені, не пов'язаних з маститами, вони будуть позитивними.
Відомі засоби діагностики субклінічного маститу, засновані на комбінованому застосуванні поверхнево-активних речовин та індикаторів. На основі цього принципу використовується такий препарат як димастин, вибраний нами як прототип. Діагностика цими засобами заснована на утворенні згустку з ядер соматичних клітин, кількість яких збільшується в молоці при маститах, та зміні його кольору(Зміна рН і як наслідок зміна забарвлення індикатора). При діагностиці маститу 5% розчином димастину реакцію враховують за такими показниками: негативна реакція (немає маститу) - при змішуванні 1 мл 5% розчину димастину з 1 мл молока утворюється однорідна рідина, колір - помаранчевий, оранжево-червоний. Сумнівна реакція – сліди утворення желе, колір – червоний. Позитивна реакція - ясно видимий потік, який наполовину або повністю викидається з луночки паличкою при перемішуванні, колір: червоний, червоний, малиновий (3).
Перевагою цих засобів є те, що їх можна використовувати в будь-якому господарстві, не роблячи витрат на дороге обладнання.
Недоліками цих препаратів є те, що, по-перше, їх склад не враховує високої буферної ємності молока, і індикатор починає змінювати своє забарвлення при значному зсуві реакції середовища; по-друге, індикатори, що входять до їх складу, наприклад, феноловий червоний в димастині, починає змінювати своє забарвлення при значенні рН=7,2 і вище, в той час як при субклінічному маститі зміна рН, що свідчить про початок захворювання, відбувається з 7, 0 та вище.
Метою винаходу є засіб діагностики субклінічного маститу у корів, що дозволяє реєструвати це захворювання більш ранньої стадії.
Поставлена мета досягається тим, що при розробці засобу діагностики субклінічного маститу використовують особливості секрету вимені при цьому захворюванні містити підвищену кількість соматичних клітин та мати водневий показник вище 7,0. Для цього засіб містить (мас.%): сульфонол технічний 4,75-4,77, нейтральний червоний 0,001-0,003, метиленовий синій 0,001-0,003, їдкий калій 0,09-0,11 зниження буферної ємності молока.
Для індикаціїпідвищеної кількості соматичних клітин у молоці використовують їх властивість утворювати желеподібний потік при контакті з поверхнево-активною речовиною (ПАР). ПАР, руйнуючи ядра соматичних клітин, утворює комплекси зі своїми білками і витісняє ДНК із зв'язаного (з білком) у вільний полімерний стан, у якому через своєрідної структури макромолекули (подовжена) є в'язкою.
Як ПАР використовують технічний сульфонол. З нього готують розчин, 100 г якого міститься 5 г порошку. Розчин використовують після 3-денної експозиції.
Для реєстрації зміни рН ми вибрали індикатор, що складається з рівних частин 0,1% водного розчину нейтрального червоного і 0,1% розчину метиленового синього. Ця суміш відрізняється чітким переходом забарвлення при зміні рН. У кислому середовищі він має синьо-фіолетове забарвлення, а при рН=7,0 і вище воно переходить у зелене.
Спосіб підготовки реактиву (реактив називається надалі Троїцький маститний тест (ТМТ)): індикатор змішують з розчином сульфонолу 1:20, додають їдкий калій 0,1 г на 100 г розчину.
Порівняний аналіз заявляється і відомих засобів діагностики дозволяє виявити ознаки, що відрізняють пропоноване технічне рішення від прототипу: синергетичне використання в суміші їдкого калію, наявність якого дозволяє знизити високу буферну ємність молока, і індикатора, що реєструє за рахунок цього раннє зміна рН.
Таким чином, заявлений засіб діагностики субклінічного маститу великої рогатої худоби відповідає критерію "новизна".
Автори пропонують для діагностики субклінічного маститу використовувати реактив наступним чином: у лунки дрібно-контрольної платівки з кожної чверті надоївати 1 мл молока останньої порції(Альвеолярного молока). Потім молоко, що досліджується, змішувати з 1 мл реактиву в лунці молочно-контрольної пластинки.
Облік реакції вести через 4 секунди за ступенем желе (згустку), що утворився, і зміни кольору індикатора.
- негативною (немає маститу), якщо в лунці знаходиться однорідна рідина фіолетового кольору;
- сумнівною, якщо у лунці відзначаються сліди утворення желе, яке при перемішуванні скляною або дерев'яною паличкою тягнеться за нею у вигляді тонких ниток, колір суміші – фіолетовий;
- позитивною, якщо утворився густий потік, який при перемішуванні легко викидається з лунки скляною паличкою, колір суміші - фіолетовий, або якщо утворився густий потік, а суміш пофарбувалася в зелений або яскраво-зелений колір.
- для реалізації запропонованого засобу та способу діагностики субклінічного маститу було проведено науково-виробничий досвід.
В умовах ВАТ "Щолкунське" Сисертського району Свердловської області було досліджено 100 корів чорно-рябої породи димастинової пробою, яка виявила 8 голів, хворих на субклінічний мастит, або 8%. Потім ті ж корови було досліджено на наявність у них субклінічного маститу реактивом ТМТ. Дослідження їм повністю підтвердили результати димастинової проби. Додатково було виявлено 7 голів. Загальна кількість тварин, хворих на субклінічний мастит, склала 15 голів або 15%.
1. Результати досліджень на субклінічний мастит