ЧАСТОТА ЗУСТРІЧНОСТІ ЕРИТРОЦИТІВ З МІКРОЯДРАМИ В КРОВІ ПЕРЕПІЛУ ЯПОНСЬКОГО (COTURNIX JAPONICA) ПРИ
Одним з інформативних та швидких методів дослідження цитогенетичних ушкоджень є мікроядерний тест, що ґрунтується на підрахунку числа клітин мікроядрами, які є показником впливу на організм генотоксичних факторів зовнішнього середовища. З цією метою використовуються еритроцити чи інші високоспеціалізовані клітини живих організмів [3 та інших.].
Нині мікроядерний тест включений як обов'язковий при токсикологічних дослідженнях, особливо у промисловому рибництві. Цей метод широко застосовується при оцінці гомеостазу організму. Такі роботи проведені на рибах, мишах, щурах, жабах, голубах, ящірках, гадюках [2, 5, 6, 11, 13 та ін.]. Подібні дослідження в галузі сільського господарства у науковій літературі слабо висвітлені. У той же час реєстрація еритроцитів периферичної крові з мікроядрами може бути показником фізіологічного стану організму та потенційної генотоксичності зовнішнього середовища [1, 9, 16].
Щодо нової області птахівництва є перепелівництво. Його розвиток пов'язаний з високою продуктивністю та скоростиглістю даного виду птиці, що стимулює дослідження в галузі морфології, фізіології та біохімії [12].
Правильно здійснювані технологічні прийоми з вирощування та розведення перепелів не повинні порушувати гомеостаз організму [10]. Тому необхідно проводити оцінку стабільності генетичного матеріалу при промисловому розведенні перепелів, що становить особливий інтерес з позиції з'ясування ефективності застосування технології вирощування та розведення. Для вирішення цієї проблеми можна застосувати мікроядерний тест у еритроцитах крові.
Матеріали та методи дослідження
Дослідження проводилися у ВАТ «Воронезьке перепелине господарство» (с. Нова Усмань Воронезькаобласті). Об'єктом дослідження служили перепели японські у віці 68 днів.
Для приготування препаратів (1 особина – 1 препарат) кров брали з яремної вени, наносили на чисте сухе предметне скло (робили мазок), фіксували в 96% етиловому спирті 1-2 хвилини. Сухі препарати фарбували різними барвниками:
1. Відфільтрований водний розчин азур-еозину по Романовському-Гімза (1:5) наносили на препарат і витримували 20 хв при кімнатній температурі, потім накривали препарат покривним склом і прибирали надлишки барвника фільтрувальним папером.
2. Відфільтрований 1% розчин орсеїну наносили на препарат на 20 хв, потім накривали покривними склом і прибирали надлишки барвника фільтрувальним папером. Вся робота повинна проводитися у витяжній шафі, тому що до складу даного барвника входить оцтова кислота.
3. Спиртовий розчин метиленового синього наносили на препарат на 5 хвилин, зливали барвник та підсушували на повітрі, потім наносили імерсійну олію та накривали покривним склом.
4. Відфільтрований 1% розчин орсеїну наносили на препарат на 5 хв, змивали барвник дистильованою водою і на кілька секунд наносили 0,1% спиртовий розчин світлого зеленого, зливали барвник і підсушували на повітрі, потім наносили імерсійне масло і накривали покривним. склом.
Вибір даних барвників зумовлений тим, що перший є цитоплазматичним, інші – ядерними. При комбінованому забарвленні (орсеїн та світлий зелений) останній використовували для підфарбовування.
Статистичну обробку даних проводили за допомогою пакету статистичних програм Stadia. Процедура угруповання даних та їх обробка викладені у роботі Кулаїчова [7]. Порівняння медіан вибірок здійснювали з використанням непараметричногоХ-критерія Ван-дер-Вардена. Для виявлення впливу барвника та підлоги використовували двофакторний дисперсійний аналіз із фіксованими ефектами. Силу впливу обчислювали за Снедекором (%). Розсіювання ознак у вибірках порівнювали з використанням критерію Ансарі-Бредлі. Коефіцієнт варіації (Cv) визначали згідно з рекомендаціями Лакіна [8].
Результати досліджень та їх обговорення
При забарвленні азур-еозином по Романівському-Гімза, метиленовим синім та орсеїном виходять однорідно забарвлені чисті препарати, на яких ядерний апарат за забарвленням відрізняється від цитоплазми, клітина має чіткі межі (рис. 1).
При фарбуванні світлим зеленим виходять брудні, неоднорідно забарвлені препарати, методика фарбування складніша, ніж при використанні інших барвників, оскільки використання двох барвників не дуже зручно.
В результаті проведених досліджень в еритроцитах периферичної крові перепелів при різних способах фарбування виявлено клітини з мікроядрами (рис. 2).
В результаті проведених досліджень встановлено вплив барвника (сила впливу – 3,8%).