Етіологічні особливості та клініко-імунологічні прояви сучасної герпетичної інфекції
На правах рукопису УДК 616.98: 578.825.11]-07
БРЯЗЖИКОВА Тетяна Станіславівна
ЕТИОЛОГІЧНІ ОСОБЛИВОСТІ ТА КЛІНІКО-ІМУНОЛОГІЧНІ ПРОЯВИ СУЧАСНОЇ ГЕРПЕТИЧНОЇ ІНФЕКЦІЇ
03.00.06 – вірусологія 14.00.10 – інфекційні хвороби
дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук
Роботу виконано у Науково-дослідному інституті грипу української академії медичних наук. Директор інституту доктор біологічних наук О. І. Кисельов.
доктор медичних наук Юрлова Т. І. кандидат медичних наук Ісаков В. А.
Науковий консультант, кандидат біологічних наук Мазинг Ю. А.
доктор медичних наук, професор Кузнєцов О. К. доктор медичних наук, професор Рахманова О. Г.
Провідна установа: Науково-дослідний інститут епідеміології та мікробіології ім. Пастер, Санкт-Петербург.
Захист відбудеться”. ». . -. . . 1995 р.
о «години на засіданні спеціалізованої вченої ради Д.074.48.01 НДІ грипу РАМН (197022, Санкт-Петербург, вул. проф. Попова, 15/17).
З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці НДІ грипу РАМН. ,
Вчений секретар спеціалізованої вченої ради кандидат біологічних наук
Віруси простого герпесу (ВПГ) широко циркулюють у людській популяції. Антитіла до ВПГ 1 і 2 серотипів виявляються у 98 - 100 дорослого населення (Gelger G., 1989). За даними Whitley RJ. та ін. (1993) ВПГ вражає 30-40% населення другій половині життя.
ВПГ є етіологічними агентами герпетичної інфекції. яку відносять до опортуністичних інфекцій. Особлива тяжкість перебігу останніх пов'язана з імунодефіцитом, сформованим основним захворюванням.шкірно-слизових уражень, а також генералізації інфекційного процесу з ураженням внутрішніх органів. Герпетична інфекція може бути причиною смерті таких хворих.
ВПГ є етіологічним фактором. Близько 10% загальної кількості енцефалітів, проте герпетичні енцефаліти супроводжуються високою летальністю (Welsberg L.A. et al., 1988; Протас І. І. та ін, 1989). Крім енцефалітів ВПГ може зумовити інші тяжкі захворювання нервової системи: полірадикуломієліти. менінгіти. У літературі останніх років звертається увага, що такі хворі не отримують високоефективного лікування через відсутність своєчасної вірусологічної діагностики (Farkklla М. et al.. 1993).
Нерідко герпетична інфекція протікає як самостійне захворювання, для якого характерний поліморфізм клінічних проявів, як щодо локалізації уражень, їх поширеності та чутливості до терапії, так і щодо глибини та різноманітності імунологічних зрушень, що супроводжують інфекційний процес. У процесі терапії можливим є формування резистентності ВПГ'-до виростати-кам, що призводить до зміни патогенезу інфекції (Hlrseh M.S., Schooley R.T., 1989).
В останні роки з'явилися повідомлення про незвичайні прояви герпетичної інфекції у імунокомпетентних осіб. Описані випадки езофагітів. обумовлених ВПГ1 у дорослих (Chlen Р.. N. et а. 1992; Elliotts. Y. et al.. 1993), атипова крупа.
викликаного ВПГ1 у хворих на грип після короткого курсу декса-метазону (Inglls A.F.. 1993). В етіологічній структурі фарингітів у дорослих у 5.1% випадків було встановлено ВПГ1 (McMillan J. A. et al., 1993). Ці дані розширюють уявлення про роль ВПГ у інфекційній патології імунокомпетентних осіб.
Мінливістьвірусів простого герпесу та індивідуальні особливості захисних реакцій інфікованого організму створюють різноманіття клініко-іміунологічних проявів герпетичної інфекції, з яким стикаються клініцисти. Незважаючи на пильну увагу до проблеми герпетичної інфекції фахівців різного профілю, лікування рецидивуючих форм герпетичної інфекції залишається невирішеним завданням, частково внаслідок об'єктивної складності проблеми, частково у зв'язку з тим, що дослідження носять роз'єднаний характер, замикаючись часом на дуже вузьких аспектах проблеми. Між тим. особливості пер-систентної інфекції вимагають комплексного підходу, аналізу всієї складності системи взаємодії .збудника та організму з використанням досягнень цілого ряду сучасних дисциплін.
Метою роботи є вивчення етіологічних особливостей та клініко-імунологічних проявів герпетичної інфекції в даний час.
Відповідно до поставленої мети було визначено такі завдання дослідження:
- Вивчиш клінічні особливості рецидивуючої герпетичної інфекції в даний час;
- Вивчити інфекційну активність клінічно! ізолятів вірусів простого герпесу різних років виділення у клітинних культурах різного походження;
- визначити антигенний профіль клінічних дослідників ВПГ по відношенню до еталонного тамму і сучасного - ВПГ.1/Ленінград/248/88;
дослідити чутливість клінічних ізолятів ВПГ до деяких хіміопрепаратів. застосовується в клініці, у тому числі ацикловіру, і новим, що належать до різних класів сполук;
- уточнити умови формування резистентності ВПГ до ацикловіру в експерименті in vitro;
- вивчити імунологічні реакції у хворих на рецидивуючу герпетичну інфекцію взалежності 'від стадії інфекцій-. дозо процесу та тяжкості перебігу хвороби:
- Визначити прогностичні критерії перебігу герпетичної інфекції на основі існуючих лабораторних тестів.
1. Вперше вивчено гетерогенність природної популяції вірусу простого герпесу за комплексом біологічних ознак та визначено їх взаємозв'язок.
2. Вперше виділено різні фенотипічні варіанти ВПГ від одного хворого одномоментно.
3. В умовах експерименту In vitro показано динаміку формування резистентності до ацикловіру та залежність цього процесу від дози препарату та пасажного рівня.
4. Вперше досліджено роль факторів неспецифічної резистентності у хворих при герпетичній інфекції залежно від тяжкості перебігу хвороби.
5. Вперше вивчено функціональну активність нейтрофільних гранулоцитів у хворих на рецидивуючу герпетичну інфекцію в різні стадії хвороби.
ПРАКТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ РОБОТИ
Як діагностикум для реакції зв'язування комплементу рекомендований та впроваджений у практику в НДІ грипу штам ВПГ1/Ленінград/248/88. що дозволило суттєво (в 1.5 рази) підвищити ефективність діагностики герпетичної інфекції у хворих. Підготовлено документи діагностичного штаму для подання до ДІБК.
Видано інформаційно-методичний лист "Принципи терапії хворих на простий герпес", Санкт-Петербург. 1993.
ОСНОВНІ ПОЛОЖЕННЯ. ВИНОСНІ НА ЗАХИСТ
1. Популяція клінічних ізолятів 1977 і 1993 років виділення гетерогену за біологічними та антигенними властивостями і складається в основному з помірно-і низьковрожайних вірусів, анти-.генний профіль більшості ізолятів подібний до еталону. Клінічні ізоляти ВПГ мають різну чутливість до ацикловіру, поряд звисокочутливими штамами охарактеризовані резистентні н проміжні за чутливістю до ашкловіру варіанти ВПГ.
2. Встановлено залежність формування резистентності ВПГ до ацикловіру 1п уІго від дози препарату та пасажного рівня. Існує пряма кореляція меаду інфекційною активністю вірусу простого герпесу в культурі клітин і чутливістю до ацикловіру.
3. Тяжкість перебігу герпетичної інфекції у хворих пов'язана з вираженістю змін імунологічних реакцій. При частих рецидивах інфекції відсутні відмінності у вмісті сироваткового церулоплазміну, сироваткового та секреторного імуноглобулінів класу А у стадії загострення та ремісії. У хворих на часторецидивну форму інфекції існує пригнічення фагоцитарної ланки імунітету в стадії ремісії, що виявляється зменшенням абсолютної кількості моноцитів у циркулюючій крові, а також виснаженням окислювально-відновного потенціалу нейтрофільних гранулоцитів.
4. Встановлено динаміку показників катіонних білків нейтрофільних гранулоцитів у сироватці крові та мазках периферичної крові. Рівень катіонних білків, що визначається в лізо-сомально-катіонному тесті суттєво знижений у стадії загострення герпетичної інфекції, у стадія ремісії не відрізняється від показників здорових осіб. Вміст мієлопероксидази у сироватці крові хворих у період загострення та ремісії перевищує показники норми, збільшення вмісту сироваткового лактоферину корелює з настанням клінічної ремісії.
Основні положення дисертації доповідані та обговорені на VII Конгресі з інфекційних і паразитарних хвороб. Болгарія. 1992; Першої міжнародної конференції з імунореабілітації, Сочі. 1992; Симпозіумі "Нові підходи до цілеспрямованого конструюванняпротивірусних препаратів", Санкт-Петербург. 1994.
Матеріали дисертації викладено в 11 наукових працях.
Робота складається із вступу, огляду літератури, викладу матеріалів та методів, результатів дослідження, їх обговорення та висновків, списку літератури. У вступі обґрунтовано актуальність роботи, сформульовано мету та завдання дослідження, відображено наукову новизна, теоретичну та практичну значимість отриманих результатів. У першому розділі наведено огляд сучасних уявлень про етіологічні особливості, клініко-імуноло-гічні прояви герпетичної інфекції та лікарські препарати, що використовуються при її лікуванні. Наступні розділи присвячені результатам своїх досліджень, у процесі обговорення яких представлено порівняльний аналіз отриманих результатів і літературних даних. Дисертацію викладено на 159 сторінках, ілюстровано 34 таблицями та 2 малюнками, бібліографія містить 170 джерел.
ОБ'ЄКТ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ
Під нашим спостереженням протягом трьох років перебувало 112 хворих на рецидивну герпетичну інфекцію у віці від 16 до 58 років. Діагноз встановлювався на підставі клініко-анамнестичних даних, підтверджувався вірусологічно (виділення вірусу простого герпесу в клітинних культурах). серологічно (реакція зв'язування комплементу) та методом Флуоресціюючих антитіл.
Для оцінки імунного статусу пацієнтів визначать показники гемограми, вмісту Т-лімфоцитів та їх субпопуляцій у теофіліновому тесті у модифікації, рекомендованій Інститутом імунології МОЗ України (Петров Р.В. та ін., 1992). Функціональну, активність нейтрофілів оцінювали за допомогою тестів фагоцитозу та відновлення нітросинього тетразолію (НСТ-тест) в модифікації (Петров Р.В. та ін. 1992), тагаке лізосомально-ка-гіонного тесту (Пігарэвський В.Є., Мазинг D.A., 1987). Визначали рівень циркулюючих імунних комплексів (Haskova V. et al. 1977). Зміст лактоферину та мієлопероксидази в сироватці крові досліджували в імуноферментному аналізі в модифікації (Зорін А.Д. та ін, 1992). Трансферін. церулоплазмін та імуноглобуліни основних класів досліджували методом радіальної імунодифузії в гелі, за Manchlnl G. et al. (1965). Імунологічні дослідження проводилися спільно з ВазохіноЯ М.Ю., Альошина Г.М.. Чернової Т.М.
Віуїси, В роботі використані еталонні штами вірусу простого герпесу ВПГ1/І1р-2/еталон та ВПГ2/І1-38/еталон. 6 штамів ВПГ1 з колекції вірусів ГРЗ Федерального центру з грипу та ГРЗ (м. Санкт-Петербург) та 7 клінічних ізолятів. виділених нами.
Були використані імунні кролячі сироватки до еталонних штамів та штаму ВПГ1/Ленінград/248/88.
Методи вивчення біологічних властивостей ВПГ. Клонування вірусів здійснювали методом граничних розведень триразово. Репродукційну активність ВПГ вивчали у різних тканинних культурах – епітеліальній тканині ПЕЧ, фібробластах ПЕЧ, фібропластах ЛЕЧ. а також культурі Vero, що перевивається. Результати титрування, отримані щодня інкубації, обробляли методом Ріда і Менча. 1938. Швидкість репродукції щодня інкубації обчислювали з урахуванням використання методу суми