Імунодефіцити первинні дослідження гуморального імунітету
Визначення числа В-лімфоцитів. На клітинній мембрані лімфоцитів міститься безліч глікопротеїдів, які можна виявити при проточній цитофлюориметрії за допомогою моноклональних антитіл. Деякі з цих глікопротеїдів специфічні для певного типу клітин, наприклад, Т-, В- та NK-лімфоцитів, різних субпопуляцій Т-лімфоцитів, моноцитів, і навіть для певних стадій їх дозрівання та диференціювання. Ці молекули прийнято позначати CD.
В даний час визначено функції багатьох CD (табл. 18.8). Оцінюючи результатів дослідження необхідно враховувати вік хворого. Крім того, необхідно постійно контролювати якість реактивів та дотримання методики, оскільки навіть незначне її порушення спотворює результати дослідження.
Визначення В-лімфоцитів за допомогою проточної цитофлюориметрії засноване на виявленні імуноглобулінів, фіксованих на поверхні клітин CD19 і CD20 (табл. 18.8). У дітей старшого віку та дорослих В-лімфоцити становлять 10-20% усіх лімфоцитів крові, у дітей молодшого віку їх більше.
Визначення титру антитіл. При підозрі на недостатність гуморального імунітету оцінюють титр антитіл до білкових та полісахаридних антигенів. Зазвичай їх визначають після вакцинації чи інфекції:
- Антитіла до білкових антигенів. У більшості випадків досліджують IgG до дифтерійного та правцевого анатоксинів до та через 2-4 тижні після вакцинації АКДС або вакцинації АДС. Оскільки майже всі дорослі вакциновані АКДС, рівень антитіл після ревакцинації є показником вторинної імунної відповіді. Можна також визначити антитіла до антигену PRP після введення вакцини проти Haemophilus influenzae типу B . Хоча цей антиген представляєсобою полісахарид, у кон'югованій вакцині він діє як білковий антиген. Іноді досліджують антитіла після імунізації інактивованою поліомієлітною вакциною та рекомбінантною вакциною проти гепатиту B . За підозри на імунодефіцит живі вірусні вакцини протипоказані.
- Антитіла до полісахаридних антигенів. Для оцінки гуморальної імунної відповіді на полісахаридні антигени застосовуються пневмококова та менінгококова вакцини, що не містять білкових носіїв. Титр антитіл визначають до та через 3-4 тижні після вакцинації. У деяких дослідницьких лабораторіях з цією метою використовують некон'юговану вакцину проти Haemophilus influenzae типу В . Результати оцінюють з огляду на вік хворого. Так, у дітей віком до 2 років імунна відповідь на полісахаридні антигени слабка, у деяких дітей вона залишається такою аж до 5 років. У зв'язку з цим застосування полісахаридних вакцин у дітей молодшого віку є недоцільним і навіть протипоказаним, оскільки може призвести до імунологічної толерантності та неефективності ревакцинації у більш старшому віці.
- Оцінка первинної та вторинної гуморальної імунної відповіді. Для визначення кліренсу антигену, рівня IgM (при первинній імунній відповіді) та IgG (при вторинній імунній відповіді) як білковий антиген використовують бактеріофаг фіхи 174 - бактеріальний вірус, безпечний для людини. Для оцінки первинної гуморальної імунної відповіді застосовують також гемоціанін черевоногих молюсків, рекомбінантну вакцину проти гепатиту В, мономерний флагеллін, вакцину проти кліщового енцефаліту.
Природні антитіла (ізогемагглютинини, антитіла до стрептолізину O, гетерофільні антитіла, наприклад антитіла до еритроцитів барана) в нормі присутні в сироватці багатьох людей. Цепояснюється тим, що антигени, проти яких спрямовані ці антитіла, широко поширені і містяться в харчових продуктах, частинках, що вдихаються, мікрофлорі дихальних шляхів.
Визначення підкласів IgG. Якщо при рецидивуючих бактеріальних інфекціях дихальних шляхів загальний рівень IgG в нормі або трохи знижений або виявляється ізольований дефіцит IgA, показано визначення підкласів IgG. При цьому можна виявити дефіцит lgG2 (IgG2 становить близько 20% IgG), який може бути ізольованим або поєднуватися з дефіцитом IgA або IgG4. Слід пам'ятати, що функціональна оцінка гуморальної імунної відповіді – більш інформативний метод дослідження, ніж кількісне визначення підкласів IgG. Так, при нормальному рівні IgG2 часто знижується рівень антитіл до полісахаридних антигенів Streptococcus pneumoniae. Поряд з цим можливий вроджений дефіцит IgG2, обумовлений порушенням синтезу важких ланцюгів, без будь-яких клінічних проявів імунодефіциту.
Визначення IgA. Ізольований дефіцит секреторного IgA при нормальному рівні IgA у сироватці трапляється рідко. Як правило, спостерігається одночасний дефіцит секреторного та сироваткового IgA. Ізольований дефіцит IgA клінічно не проявляється або супроводжується легкими інфекціями верхніх дихальних шляхів. Це зумовлено тим, що при дефіциті IgA компенсаторно підвищується рівень IgG у сироватці та IgM у секреті слизових. Рівень IgA вимірюють у сльозі, слині та інших біологічних рідинах. Існує два підкласи IgA – IgA1 та IgA2. У крові та секреті дихальних шляхів переважає IgA1 у секретах ШКТ – IgA2. Нормальні показники рівнів IgA1 та IgA2.
Синтез імуноглобулінів in vitro. Це дослідження дозволяє оцінити вироблення IgM, IgG та IgA стимульованимиВ-лімфоцитами. Змішуючи оброблені різними стимуляторами Т-і В-лімфоцити здорових та хворих, можна оцінити функцію Т-хелперів та В-лімфоцитів. У більшості випадків дефіцит антитіл обумовлений порушенням диференціювання В-лімфоцитів у плазматичні клітини.
Біопсію лімфовузлів при підозрі на первинний імунодефіцит, як правило, не виробляють. Вона показана лише в тих випадках, коли діагноз незрозумілий і у хворого збільшено лімфовузли, що потребує виключення гемобластозу. Біопсію зазвичай виробляють через 5-7 діб після антигенної стимуляції. Антиген вводять у область, лімфа від якої відтікає до групи лімфовузлів, один з яких підлягає біопсії. При недостатності гуморального імунітету в лімфовузлі знижено число плазматичних клітин, кількість первинних фолікулів збільшена, вторинні фолікули відсутні, товщина коркової речовини зменшена, спостерігається перебудова тканини лімфовузла, іноді збільшується кількість макрофагів та дендритних клітин.
Біопсію кишечника виробляють при загальній варіабельній гіпогаммаглобулінемії та ізольованому дефіциті IgA. Біопсія тонкої кишки показана при хронічній діареї та синдромі порушеного всмоктування для виключення атрофії ворсинок слизової та інфекцій, спричинених Cryptosporidium spp. і Giardia lamblia.
Швидкість виведення антитіл вивчають за допомогою мічених імуноглобулінів. Це дослідження показано при підозрі на втрату імуноглобулінів через ШКТ.