Лабораторна діагностика в системі заходів щодо оздоровлення відлейкоза ВРХ, ОДБУ «Липецька
Лейкоз великої рогатої худоби – хронічна інфекційна хвороба пухлинної природи, яка протікає безсимптомно або проявляється лімфоцитозом та злоякісними утвореннями у кровотворних та інших органах та тканинах.
Джерелом збудника інфекції є заражений організм тварини, що є середовищем проживання вірусу лейкозу великої рогатої худоби (ВЛКРС). Тільки в організмі тварини зазначено збереження, розмноження та накопичення цього вірусу. Доведено, що місцем локалізації вірусу є лімфоцит.
Передача ВЛКРС сприйнятливої великої рогатої худоби може здійснюватися з усіма секретами та екскретами при потраплянні до них лімфоцитів, заражених вірусом.
Епізоотичний процес лейкозу є складним безперервним процесом передачі ВЛКРС від заражених до сприйнятливих здорових тварин. Є два шляхи передачі вірусу: вертикальний (внутрішньоутробний) та горизонтальний (контактний). Зараження відбувається зазвичай горизонтально, тобто внаслідок введення здорових тварин у стадо, інфіковане ВЛКРС, і здорових стадах – шляхом введення у яких тварин, заражених вірусом лейкозу.
ВЛКРС може передаватися трансплацентарно з інфікованими лімфоцитами матері завдяки здатності лімфоцитів мігрувати у міжклітинному просторі та таким чином долати плацентарний бар'єр. За деякими даними, до 20% телят, які заражені вірусом ВЛКРС від матерів, можуть народжуватися інфікованими. Вірус лейкозу присутній у молозиві та молоці інфікованих корів. Інокуляція такого молока чи молозива телятам та вівцям індукує у них інфекцію.
Індукована ВЛКРС інфекція характеризується деякими особливостями. Збудникперсистує в організмі довічно у вигляді провірусу, інтегрованого в геном лімфоцитів господаря, при цьому вільні зрілі віріони або їх антигени, як правило, відсутні. Постійною ознакою інфекції є продукція специфічних антитіл. Тому для діагностики широко застосовують непрямі серологічні методи дослідження, такі як реакцію дифузійної преципітації (РІД) та імуноферментний аналіз (ІФА).
В даний час програми оздоровлення господарств від лейкозу побудовані на застосуванні як діагностика серологічних методів (РІД та ІФА), запобігання контакту тварин, вільних від вірусу лейкозу великої рогатої худоби, із зараженими тваринами та видалення останніх від популяції.
Як показала практика, при такому підході оздоровлення затягується на роки, оскільки неможливо виявити всіх інфікованих тварин, особливо на ранніх стадіях захворювання та ізолювати їх від здорових.
Для прискорення повного оздоровлення стад від лейкозу доцільно спільно з РІД та непрямим ІФА використовувати методи, які виявляють безпосередньо вірус чи провірус у інфікованих тварин. Перспективною в цьому напрямку є полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), що дозволяє виявляти провірусну РНК в крові тварини. Проаналізувавши літературні дані, розташували методи діагностики лейкозу у порядку зростання чутливості, точності та специфічності у такому порядку: РІД, ІФА, ПЛР.
Незважаючи на дуже високу чутливість ПЛР, бувають такі періоди, коли рівень провірусної ДНК мінімальний. У таких випадках РІД виявляється більш інформативним. Тому має сенс методом ПЛР контролювати РІД-і ІФА-негативних особин. При такому комбінованому застосуванні діагностичних тестів можна швидко та ефективно оздоровити стадо. Здопомогою ПЛР виявляють безпосередньо провірус, тобто результат аналізу не залежить від віку та стану тварини, тому ПЛР можна використовувати для поділу телят на інфікованих та здорових у віці від 15 днів до 5 місяців (у цьому віці застосовувати РІД не має сенсу).
Система РІД+ПЛР перспективна при лейкозі ВРХ, оскільки має низку переваг перед РІД і дозволяє з високою достовірністю одномоментно виявляти максимальну кількість інфікованих тварин на ранніх стадіях захворювання. Це суттєво скорочує терміни оздоровчих протилейкозних заходів. Крім того, ПЛР застосовується для обстеження молодняку, починаючи з 15-денного віку.
Відсоток інфікованих телят до 3-місячного віку, за даними ПЛР, практично відповідає відсотку РІД-позитивних особин, але в пізнішому віці (до 3 років). Очевидно, це свідчить у тому, що зараження тварин відбувається у ранньому віці (трансплацентарно і по 3 місяців), а перші імунологічні ознаки хвороби з'являються після першої лактації. Таким чином, якщо у перші тижні життя методом ПЛР розділити теличок на носіїв провірусу та здорових, то оздоровити господарство можна значно швидше.
Висока чутливість ІФА, на відміну від РІД, дозволяє швидко і масово досліджувати сироватки крові. За допомогою цього методу можна виявляти стада, у яких рівень інфікованості не перевищує 1%. Однак ІФА та РІД не здатні диференціювати материнські антитіла у молодих тварин від активних антитіл, що продукуються при вірусній інфекції.
Як найчутливіший на сьогоднішній день метод виявлення інфекційних агентів ПЛР не вимагає імунологічної відповіді на проникнення збудника в організм господаря, що дає можливість стежитиза ранніми стадіями розвитку інфекції. ПЛР дозволять виявити фрагменти провірусної ДНК, вбудовані в геном інфікованої тварини або вірусну РНК, тим самим являючи собою прямий метод діагностики на відміну від непрямих РІД та ІФА.
Заражених тварин первинно виявляють за допомогою РІД. Одночасно всіх телят з 15-денного до 6-місячного віку та додатково РІД-негативних тварин досліджують за допомогою ПЛР. Подальше виявлення заражених тварин старше 6-місячного віку проводять методом РІД. А молодняк, що знову вступає, починаючи з 15-денного віку – ПЛР. Усі заражені тварини негайно видаляються. Критерієм благополуччя стада, що оздоровлюється (у господарстві, на відділенні, фермі, дворі) є отримання двох поспіль з інтервалом у 3 місяці негативних результатів у РІД або ІФА всього поголів'я старше 6-місячного віку.
Згідно з даними літератури та власних спостережень, для успішного оздоровлення неблагополучних по лейкозу господарств необхідно здійснити такі спеціальні та господарські заходи.
1. Серологічні дослідження (РІД чи ІФА) тварин на лейкоз проводити з 6-місячного віку з інтервалом 3 місяці. Усіх серопозитивних тварин видаляти зі стада.
2. З метою підвищення ефективності оздоровчих заходів та прискореного виявлення інфікованих тварин, що негативно реагують на РІД або ІФА, а також телят з 15-денного вікудосліджувати методом ПЛР.
3. При вирощуванні ремонтного та племінного молодняку перше серологічне дослідження (РІД або ІФА) телиць на лейкоз проводити у віці 6 місяців, потім у 12-місячному віці, перед заплідненням та у 6-7-місячній тільності.У ПЛР дослідження молодняку починати з 15-денного віку.
4. Стельових корів досліджувати налейкоз у РІД або ІФА за 30 днів до готелю та/або через 30 днів після готелю. Серопозитивних після отелення переводять на відгодівлю або групу серопозитивних дійних корів. Отриманих від них телят, позитивних у ПЛР, переводять у групу відгодівлі.
5. Биків-виробників досліджувати на лейкоз у РІД або ІФА не менше 2 разів на рік, з інтервалом 3 місяці. Сіропозитивних тварин ізолювати та передавати на відгодівлю.
6. Новонароджених телят до 7-10-денного віку утримувати в індивідуальних клітинах у профілакторії або боксах разом з коровами-матерями, аз 15-денного віку досліджувати в ПЛР, що позитивно реагують передавати на відгодівлю.
7. На заключному етапі оздоровлення (поодинокі випадки позитивно реагують) телят, починаючи з 15-денного віку та дорослих тварин, які раніше негативно реагують у РІД або ІФА, досліджувати із застосуванням ПЛР. Подальші дослідження проводити кожні три місяці.
8. Завозимий племінних тварин у період карантину досліджувати серологічним методом (РІД, ІФА) та одноразово – ПЛР. При негативних результатах дослідження тварин вводити у загальне стадо.
9. Тварин, у сироватці яких виявлено специфічні антитіла (РІД, ІФА), піддають гематологічним дослідженням.
10. Тварин, які показали позитивний результат щодо будь-яким методом (РІД, ІФА, ПЛР), вважати інфікованими лейкозом, повторні серологічні дослідження вони проводяться. Таких тварин слід ізолювати від здорових з подальшим здаванням на забій або переведенням до групи серопозитивних тварин.
Критерій благополуччя стада - отримання двох поспіль з інтервалом у три місяці негативних результатів РІД або ІФА