Спосіб діагностики активності туберкульозу
Спосіб може бути використаний у галузі клінічної медицини, а також у фтизіатрії. У обстежуваного беруть венозну кров, виділяють із неї сироватку, з якої готують препарати, та проводять їх мікроскопічне дослідження у поляризованому світлі. При спостереженні у препараті радіально-променистих структур, дендритів чи кристалів діагностують активний туберкульоз. Підвищується точність діагностики. Збільшується чутливість та специфічність способу, зменшується його трудомісткість за рахунок скорочення часу його проведення. Чутливість та специфічність способу діагностики можуть досягати 100%. Це дозволяє з більшою точністю відокремлювати осіб із неактивною формою туберкульозу та здорових осіб від хворих на активний туберкульоз. 1 з.п.ф-ли, 2 табл.
Винахід відноситься до клінічної медицини та може бути використане у фтизіатрії.
Найбільш близьким до заявляється та обраним за прототип є спосіб діагностики активності туберкульозу, що включає забір венозної крові, виділення сироватки, приготування з неї препаратів та їх мікроскопічне дослідження в поляризованому світлі (Рогожина Н.А. Причини реактивацій туберкульозу легень після хірург виявлених хворих на ранніх термінах лікування та заходи їх профілактики.Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня канд.мед.наук, с.9-11. Критерієм діагностики активності туберкульозу є відношення кількості рідких кристалів (ЖК) типу сферолітів і дендритів у препараті сироватки крові з розчином туберкуліну в реополіглюкіні до кількості рідких кристалів цих же типів у препараті сироватки крові з реополіглюкіном. Спосіб доступний для широкого використання в клінічній практиці і не вимагає дорогої апаратури та реактивів.
Однак цей спосібмає недостатні чутливість (74,4%) та специфічність (84%). Зумовлено це, можливо, тим, що при даному способі аналізу не чисті препарати сироватки крові, а в суміші з реополіглюкіном і з розчином туберкуліну в реополіглюкіні. Відомо, що дослідження біологічних середовищ (зокрема, сироватки крові) завжди бажано проводити в чистому вигляді, оскільки додавання будь-якої речовини (в даному випадку реополіглюкіну) може змінити властивості середовища, його рідкокристалічну структуру, що веде до спотворення результатів дослідження. Ймовірно, що РК, що виникають в реополіглюкіні, ускладнюють картину, і діагностика активності туберкульозу можлива лише за кількісним критерієм. Додавання туберкуліну в сироватку крові in vitro не зовсім точно відображає зміну, що відбуваються в цілому організмі, оскільки виключаються клітинні складові крові. Це також може знижувати точність способу. Крім того, спосіб трудомісткий, оскільки вимагає обов'язкового приготування та порівняння двох препаратів сироватки крові з реополіглюкіном та з розчином туберкуліну в реополіглюкіні, а найголовніше – вимагає візуального підрахунку кількості РК типу сферолітів та дендритів у всіх полях зору цих двох препаратів.
Завдання, на вирішення якого направлено винахід, полягає у розробці простого та недорогого способу активності туберкульозу з високою точністю діагностики. Підвищити точність діагностики можна шляхом збільшення чутливості способу та його специфічності.
Зазначений технічний результат досягається тим, що при способі діагностики активності туберкульозу, що включає забір венозної крові, виділення сироватки, приготування препаратів із сироватки крові та їх мікроскопічне дослідження в поляризованому світлі, активний туберкульоз діагностують під час спостереженняу препараті радіально-променистих структур, або дендритів, або кристалів. Точність діагностики збільшують і тим, що кров до виділення з неї сироватки додають стандартний туберкулін Лінникової в розведенні.
Спосіб здійснюють наступним чином. Обстежено три групи людей: здорові (15 осіб), особи з неактивним туберкульозом легень (15 осіб) та хворі на активний туберкульоз легень (30 осіб). За стандартною методикою у обстежуваних людей виробляли натще забір 20 мл крові з периферичної вени. Кров забирали у дві пробірки. В одну з них відразу ж додавали 1 мл туберкуліну Лінникової в розведенні (20 ТЕ), а в іншу пробірку 1 мл фізіологічного розчину, після чого в обох пробірках кров відстоювали 60 хв. З отриманої сироватки готували препарати для поляризаційної мікроскопії, для чого 50 мкл сироватки крові поміщали між предметним та покривним склом, обробленим розчином лецитину для створення рівномірної гомеотропної орієнтації молекул. Препарати витримували добу в термостаті при температурі 37 o C для повнішого прояву повільного структуроутворення (кристалізації) у сироватці крові. Препарати переглядали на оптичному мікроскопі "Біолам" у поляризованому світлі зі збільшенням 130 крат. Результати дослідження препаратів сироватки крові наведено у табл.1 та 2.
У препаратах групи здорових осіб виявлено патологічні типи ЖК. У осіб з неактивним туберкульозом в одному випадку знайдені радіально-променисті структури та дендрити, надалі іншими методами у цьому випадку було діагностовано рак шлунка. Специфічність способу становила 93,3%. З 30 осіб з активним туберкульозом у 25 спостерігали різні типи патологічних РК, що дає можливість діагностувати у них активний туберкульоз (чутливість способу83,3%).
Для підвищення точності діагностики достатньо провести дослідження препаратів з туберкуліном лише в осіб з неактивним туберкульозом (у даному випадку 15 препаратів) та у хворих на туберкульоз, у яких не було виявлено патологічних типів ЖК (у даному випадку 5 препаратів), тобто. немає необхідності досліджувати усі препарати з туберкуліном.
При дослідженні препарату сироватки крові з туберкуліном у здорових осіб не виявлено патологічних структур. У осіб з неактивним туберкульозом в одному випадку було виявлено патологічні типи структур, що дозволило діагностувати в цьому випадку активний туберкульоз, підтверджений надалі іншими методами. Специфічність способу склала 100% (28 негативних результатів у 28 здорових та осіб з неактивним туберкульозом). Дослідження препаратів сироватки крові з туберкуліном у хворих на активний туберкульоз виявило наявність патологічних структур у всіх 30 випадках. Чутливість способу становила 100%.
Відомо, що структурно-оптичні реакції сироватки крові, будучи матрицею всім без винятку біохімічних реакцій, відбивають глибину розладів гомеостазу. При туберкульозі як системному захворюванні всі елементи цієї системи зазнають значних змін, що проявляється в багатьох реакціях (біохімічних, імунологічних, біофізичних) у відповідь на розвиток специфічного процесу. Відомі закономірності кількісної зміни окремих РК структур сироватки крові залежно від активності туберкульозного процесу.
Авторами, на відміну від прототипу, виявлено якісні відмінності за типами ЖК у осіб з активним та неактивним туберкульозом, а також у здорових. При використанні туберкуліну як повного специфічного антигену ці відмінності щебільш зростають.
Приклад 1. Хворий В. Діагноз: інфільтративний туберкульоз верхньої частки лівої легені. При поляризаційній мікроскопії сироватки крові крім доменів та борозенок виявлено радіально-променисті структури, дендрити та кристали, що підтвердило активність туберкульозного процесу. Необхідності дослідження препарату із туберкуліном немає.
Приклад 2. Хворий К. Діагноз: інфільтративний туберкульоз верхньої частки правої легені у фазі розпаду та обсіменіння. Проведено основний курс лікування 14 місяців. За даними рентгенотомографічного дослідження дома інфільтрату визначалися щільні осередки, ділянки пневмосклерозу. При поляризаційній мікроскопії, крім доменів та борозенок, знайдено дендрити. Лікування продовжили. В результаті отримано подальше ущільнення вогнищ, що дозволило ретроспективно підтвердити активність процесу на момент проведення поляризаційної мікроскопії. Необхідність дослідження препарату з туберкуліном була відсутня.
Приклади 3 та 4. Хворі М. та Д.. Обидва перебувають на обліку по 3 групі диспансерного спостереження (неактивний туберкульоз). У обох у верхній частині правої легені сліди перенесеного інфільтративного туберкульозу у вигляді щільних вогнищ та ділянок пневмосклерозу. За даними звичайного клініко-рентгенотомографічного дослідження, зміни у легенях стабільні, процес неактивний. При проведенні поляризаційної мікроскопії, сироватки крові в препаратах виявлено РК за типом борозенок та доменів, але при додаванні туберкуліну у хворого Д. виявлено радіально-променисті структури та дендрити, а у хворого М. – борозенки та домени. Запідозрений рецидив туберкульозу легень у хворого на Д., який не підтверджений при ретельному поглибленому дообстеженні. Тільки після проведення 3-х місячної пробної терапії хіміопрепаратами рецидивтуберкульозу легень встановлено, тобто. додавання туберкуліну дозволяє без проведення пробного лікування встановити активність процесу та в ранні терміни призначити повноцінну хіміотерапію.
1. Спосіб діагностики активності туберкульозу, що включає забір венозної крові, виділення сироватки, приготування препаратів із сироватки крові та їх мікроскопічне дослідження в поляризованому світлі, який відрізняється тим, що активний туберкульоз діагностують при спостереженні в препараті радіально-променистих структур, або дендритів, або кристал.
2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що кров до виділення з неї сироватки додають туберкулін Лінникової в розведенні.