Тромбін вплив на огрядні клітини
Гладкі клітини активно залучаються в процеси загоєння ран, оскільки здатні у відповідь на активацію імунними (IgE і специфічні антигени) і неімунними лібераторами (компоненти системи комплементу, нейропептиди та регуляторні пептиди, лізосомальні білки нейтрофілів, отрути комах, та ін) звільняти безліч сильних медіаторів. Серед них медіатори і модулятори запалення, проліферації і міграції клітин преформовані в цитоплазматичних гранулах опасистих клітин (гістамін, нейтральні протеази - хімаза і триптаза, кислі гідролази, катепсин G, карбоксипептидаза, гепарин-і , які синтезуються при активації клітини (PAR, простагландин D2, лейкотрієн С4, цитокіни IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-13, TNF-альфа, MIP-laльфа (запальний білок la макрофагів), FGFb . Деякі цитокіни, як, наприклад, TNF-CL можуть бути преформовані в опасистих клітинах, а також знову синтезуватися при активації клітин. Гладкі клітини також звільняють такі регулятори, як NO, TGF-бета1, активатор фібринолізу tРА (але не інгібітори активатора плазміногену PAI-1 і РА1-2), і експонують рецептори IgE, урокінази. фактор зростання (c-kit) та ін [ Valent, ea 1998, Bissonnette, ea 1997, Galli, ea 2000, Gottwald, ea 1998, Bankl. ea 1999, Metcalfe. ea 1997, Baghestanian. ea 1997].
Специфічне зв'язування міченого ФІТЦ (ізотіоціонат флуоресцеїну) тромбіну з перитонеальними опасистими клітинами щура передбачає наявність рецепторів тромбіну на мембрані цих клітин [Струкова ea 1991]. Доказ існування на опасистих клітинах PAR-1 отримано в роботі [Strukova. ea 1995]: показано підвищенняконцентрації внутрішньоклітинного Са2+ у відповідь на дію TRAP-6 – агоніста цього рецептора. Виявлено мРНК PAR-1 в перитонеальних опасистих клітинах [Nishikawa, ea 2000]. Контакт тромбіну з опасистими клітинами, локалізованими вздовж кровоносних і лімфатичних судин у багатьох тканинах і органах, відбувається в ділянці пошкодження тканини. Крім того, є дані про можливість утворення тканинного тромбіну макрофагами, в яких виявлена мРНК протромбіну, а також нервової та м'язової тканинами, що розвивається [ Lindahl ea, 1989 , Zoubine, ea, 1996 ]. Інформація про взаємодію тромбіну з опасистими клітинами обмежена. У мишей з дефіцитом опасистих клітин відзначали почастішання випадків фатальних тромбоемболій після провокації тромбоутворення порівняно з нормальними тваринами [Kitamura, ea 1986]. Виявлено збільшення кількості опасистих клітин у верхніх відділах серця у хворих з тромбозом передсердя та в адвентиції тромбованих глибоких вен кінцівок [Bankl. ea 1999, Baghestanian. ea 1997].
Тромбін викликає дегрануляцію культивованих опасистих клітин кісткового мозку і опасистих клітин шкіри. У високій концентрації тромбін стимулює дегрануляцію перитонеальних опасистих клітин щура [Струкова ea 1977, Strukova, ea 1996, Marx. ea 1986].
Секретовані опасистими клітинами залежні від гепарину протеази здатні розщеплювати екзогенний тромбін [Peiler. ea 1999]. Здатність клітин інактивувати тромбін значно знижується при запаленні, спричиненому хронічним введенням бактеріального ліпополісахариду або солей тіогліколевої кислоти [Peijier. ea 1999].
Прозапальна дія тромбіну in vivo може бути опосередкована активацією його рецептора PAR-1 на опасистих клітинах, оскільки введення пептидних аналогів TRAP підвищує проникність судин та викликає набряк кінцівки.щури [Cirino, ea 1996, Kawabata, ea 1999]. Гістохімічним аналізом виявлено дегрануляцію опасистих клітин [Cirino, ea 1996]. Однак ці дані не дозволяють стверджувати, що TRAP безпосередньо діє на огрядні клітини, викликаючи їхню дегрануляцію. За допомогою методів локальної фіксації потенціалу (patch-clamp) і вимірювання внутрішньоклітинного рН (рНвн) встановлено, що тромбін викликає дозозалежне збільшення ємності та провідності мембрани опасистих клітин, а також двофазна зміна рНвн: початкове зниження та подальше підвищення рНвн, обумовлене залежною від РНвн Na + / H + обміну [Strukova, ea 1996, Струкова ea 1992, Редкозубов ea 1992].
Крім того, тромбін у високій концентрації може викликати дегрануляцію опасистих клітин і звільнення гістаміну, тоді як низькі концентрації тромбіну підвищують рівень cGMP в опасистих клітинах і знижують спонтанну секрецію гістаміну [Strukova, ea 1996]. Це узгоджується з даними про зниження проникності моношару епітеліальних клітин при дії низьких концентрацій тромбіну та зростання проникності при підвищенні концентрації ферменту [DeMichele, ea 1992]. Очевидно, активація тромбіном опасистих клітин, як і тромбоцитів, фібробластів і ендотеліальних клітин, включає реакції, опосередковані кількома рецепторами, включаючи PAR-1. Однак механізми модуляції тромбіном реактивності опасистих клітин ще не відомі. Ендогенним регулятором опасистих клітин може бути оксид азоту, який активує гуанілатциклазу [Scsmidt, ea 1995, Iikira. ea 1998] і гальмує секрецію гістаміка та PAF опасистими клітинами при активації їх цитокінами [Hogaboam, ea 1993].
Можливість опосередкованої PAR-1 модуляції реактивності опасистих клітин показана при дослідженні впливу TRAP-6 на звільнення NO [Струкова ea 1999]. Активаціяагоністом PAR-1 опасистих клітин викликала стимуляцію звільнення ними NO, який блокував індуковану агрегацію тромбоцитів. Цей ефект TRAP-6 блокувався в присутності L-NAME – інгібітора утворення NO або кальмідазоліуму – інгібітора кальмодуліну та Са-залежної конститутивної ізоформи NO-синтази (cNOS). Гладкі клітини, стимульовані кальцієвим іонофором (модель неімунної активації), звільняють потужний медіатор запалення та індуктор агрегації тромбоцитів PAF [Hogaboam, ea 1993, Струкова ea 1999]. Попередня обробка опасистих клітин TRAP-6 до стимуляції їх кальцієвим іонофором призводила до зниження в 3 рази викликаного PAF підвищення індукованої агрегації тромбоцитів [Струкова ea 1999]. Очевидно, тромбін, взаємодіючи з PAR-1, служить неімунним регулятором активності опасистих клітин, стимулюючи утворення NO і пригнічуючи секрецію медіатора запалення PAF. Ці дані підтверджують гіпотезу про NO в ролі модулятора активності опасистих клітин і рек-рутмента лейкоцитів, що викликається в ділянці запалення [Kubes, ea 1996]. Показано, що донори NO пригнічують звільнення гістаміну опасистими клітинами, активованими ліпополісахаридом, викликану ними активацію лейкоцитів in vivo та in vitro, а також індуковане гістаміном підвищення проникності ендотелію [ Salvemini. ea 1991, Gaboury, ea 1996, Al-Naemi, ea 1999].
Тромбін може виявляти про- та антизапальну дію за допомогою механізмів, відмінних від активації PAR-1, оскільки виявлено відмінність у характері дії тромбіну та пептидів - аналогів TRAP [Vergnolle, ea 1999]. Так, набряк кінцівки, що викликається тромбіном, майже повністю пригнічувався попереднім виснаженням опасистих клітин за допомогою дегранулятора або передобробкою індометацином - інгібітором циклооксигеназ, що свідчить проучасті опасистих клітин у реалізації дії тромбіну. Навпаки, набряк, що викликається пептидами, взагалі не знижувався при введенні інлометацину і трохи знижувався у щурів, оброблених дегранулятором опасистих клітин. Комбіноване введення тромбіну та пептидів виявило антизапальну дію тромбіну. Водночас контрольний пептид FSLLRY, який не активував PAR-1, викликав набряк подібно до досвідченого. PAR-2, що експресується багатьма клітинами. що беруть участь у процесі запалення, у тому числі лейкоцитами та ендотеліальними, а також нейронами, не є рецептором тромбіну (таблиця), але активується трипсином, триптазою опасистих клітин, пептидними агоністами PAR-2 і опосередковує гострі запальні відповіді, що характеризуються розвитком набряку. Steinhoff, ea 2000, Vergnolle, ea 1999, Vergnolle, ea 1999].
Набряк кінцівки щура, викликаний введенням агоніста PAR-2, не пригнічувався скільки-небудь суттєво передобробкою тварин дегранулятором опасистих клітин або інгібітором NO-синтази, свідчуючи про розвиток запальної відповіді механізмом, не залежним від активації опасистих клітин і генерації NO [Vergno9, ea .