Удосконалення методу прямого пересадки ембріонів від корів-донорів до корів-реципієнтів -
Сучасні сільськогосподарські виробники спрямовують всі зусилля отримання максимального прибутку. Ці агротехнічні процеси базуються на використанні високоефективних технологій виробництва молока, м'яса, збереження племінного поголів'я тварин. Кон'юнктура ринку потребує прискореного створення нових порід, ліній, сімейств високопродуктивної худоби. Потужним засобом реалізації поставлених завдань стали штучне запліднення, трансплантація ембріонів, що дозволяють значно знизити генераційний інтервал та прискорити оцінку матерів, бугаїв, забезпечити розмноження тварин із високою генетичною цінністю [1].
Матеріали та методи дослідження
Експериментальні дослідження здійснено з урахуванням селянського господарства «Балці», розташованих північному заході Східно-Казахстанської області, разом із фахівцями лабораторії ТОВ «БіоПрофі» (м. Астана). При доборі донорів виділили групу племінних корів чорно-рябої породи (10 голів), у яких не відзначено ускладнення (мертвонароджуваність, затримання посліду, післяпологові захворювання статевих органів), їх індекс запліднення не перевищував 1,5. Групу корів-реципієнтів (10 голів) склали тварини цього господарства. Виробником був бик чорно-рябої породи Честер-220. Осіменіння корів, біологічний скринінг за їх фізіологічним станом, трансплантацію ембріонів виконували з дотриманням ветеринарно-санітарних правил та згідно з діючою інструкцією зі штучного запліднення корів і телиць [3, 4]. Як середовище для промивання використано фосфатно-буферний сольовий розчин (ФБС) Дюльбекко, для вимивання зародків з матки використано катетер Фоллея з пружним мандреном та надувним балончиком, попередньо простерилізовані. Тільність у самок – рецепієнтів перевірялися порівнем прогестерону в плазмі крові на 21-й день, паралельно використовували ректальний метод за допомогою апарату ультразвукової діагностики.
Результати дослідження та їх обговорення
У країнах СНД роботи з пересадки ембріонів тварин та вдосконалення аспектів самого методу розпочато у 70-х роках минулого століття. Сучасна технологія трансплантації ембріонів дозволяє одержати від корови – рекордистки за її життя кілька десятків телят. У США від однієї корови голштинської породи з визначною молочною продуктивністю отримали 131 теля. В одному із фермерських господарств США за 6 зборів від п'яти корів заморозили 201 ембріон, отримали 113 телят. США, Канада, Англія, Нова Зеландія здійснюють експорт ембріонів до десятків країн світу [6, 7].
У регіонах Східного Казахстану молочне скотарство – одна з головних тваринницьких галузей сільського господарства, продукцією якого є не тільки молоко, а й молодняк, який використовується для власного відтворення, племінного продажу, вирощування з подальшою реалізацією іншим сільгосппідприємствам, відгодівлі та реалізації на м'ясо [2, 3]. Відібрані донори були здоровими коровами віком від 3,5 до 7 років із добре розвиненою молочною залозою, придатною до машинного доїння. Ветеринарні фахівці раніше у них не фіксували будь-яких ускладнень пологів та післяпологового періоду. Методом ректальної пальпації обстежено у корів-донорів стан статевих органів, щоб виключити порушення відтворювальної функції, наявність кісти яєчника, гіпофункцію, запалення яєчникової зв'язки, ендометрити. За стандартною схемою виконані роботи з запліднення корів-донорів після реєстрації суперовуляції. Зародки вилучені у корів на 7-й день після запліднення. У ході експерименту нами модифіковано традиційнутехнологічна схема при трансплантації ембріонів Для отримання ембріонів нами обраний нехірургічний спосіб, заснований на введенні в матку особливого зонда природним каналом. Зонд «Фоллея» має три канали. Один з каналів призначений для надування балончика, який закупорює ріг матки, перешкоджаючи витіканню рідини. Іншим каналом вводиться фізіологічний розчин (середовище Дюльбекко) з температурою 25-30 °С, який вимиває ембріони і повертається разом з ними через третій канал зонда в пробірку, поміщену у водяну баню з температурою 35 °С. У цій рідині з порожнини матки вилучаються ембріони (рис. 1). Закріпивши катетер, промивали порожнину рога матки за допомогою шприца Люера місткістю 50-60 мл. У ріг матки залежно від його величини вводили порціями від 40-60 мл промивної рідини, витрачаючи промивання кожного рогу трохи більше 500 мл. Наповнення матки промивним середовищем та ступінь її відтоку контролювали ректально.
Мал. 1. Вилучення ембріонів із порожнини матки за допомогою зонда «Фоллея»
На рис. 2 показані 7-денні ембріони (при 10-кратному збільшенні). У середньому при суперовуляції від донора було отримано від 5 до 7 ембріонів. Зібрану в циліндр промивну рідину відстоювали 20-35 хв. при температурі 20-37 градусів, щоб зародки опустилися на дно, після чого верхній шар видаляли сифоном. Нижній шар рідини порційно по 20-30 мл для виявлення зародків досліджували у спеціальних чашках Петрі під лупою бінокулярною при 10-кратному збільшенні. Знайдених ембріонів за допомогою пастерівської піпетки переносили в середу для короткочасного зберігання (середовище Дюльбекко з додаванням 20% фетальної сироватки теляти). Як показали результати досліджень, отримані ембріони мали нормальний розвиток, виявилися придатними.для трансплантації реципієнтів. Спостереженнями встановлено, що обстежені ембріони перебувають у стадії пізньої морули чи бластоцисти. Морфологічні структури ембріонів характеризуються компактністю, сферичною формою. Клітини за розмірами виявилися приблизно однакової величини, з гладкою, плоскою та рівномірно сформованою зоною пеллюциду, без включень у перивітеліновому просторі. Ці ембріони повністю використані для пересадки гормонально підготовлених корів-реципієнтів. Після оцінки зародків їх культивували при 37 ° С, пересадку ембріонів провели протягом 30 хвилин.
Мал. 2. Ембріони 7-денного віку, при 10-кратному збільшенні
Трансплантацію проводили за допомогою спеціального зонду для запліднення. Ембріони були поміщені в роги матки, через шийку, цей спосіб названий цервікальним фахівцями. Відомо, що основною умовою гарного приживлення ембріонів є синхронність прояву статевого полювання у донорів та реципієнтів. Слід зазначити, що такої синхронності можна досягти в результаті ретельного біологічного скринінгу корів, починаючи з початкової стадії підбору та огляду тварин. Як видно, з результатів досвіду удосконалення традиційного біотехнологічного методу штучного запліднення виявило основні переваги: простоту, економічність. Спосіб трансплантації ембріонів шляхом прямої пересадки без заморозки від корів-донорів до корів-реципієнтів призвів до суттєвого підвищення ефективності отримання приплоду великої рогатої худоби. Сильність у самок – реципієнтів перевірялися ректально та за допомогою апарату ультразвукової діагностики.
Як показали експерименти, нами проведено трансплантацію ембріонів коровам-реципієнтам без заморозки. Зазвичай процедура заморозки входила в данийбіотехнологічний цикл Результати виконаних досліджень свідчать, що вдосконалення традиційного способу штучного запліднення може забезпечити фізіологічно нормальну тільність, народження здорових телят. Важливою умовою ефективності експерименту є чітке виконання всіх фрагментів біотехнологічного методу та висока кваліфікація фахівців, залучених до таких розробок. Загалом розведення великої рогатої худоби молочних порід за допомогою трансплантації ембріонів дозволяє забезпечити розмноження високоцінних племінних бугаїв-плідників; формувати поголів'я заводських сімейств; посилити відбір бугаїв-плідників, підвищити генетичний статус за селекційними ознаками.
Автори висловлюють вдячність керівнику селянського господарства Токашеву О.М., фахівцям лабораторією ТОВ «БіоПрофі», Асанову Ж.Б., Бекмаганбетову Ж.К., Елістратову Є.В. за допомогу та сприяння у реалізації завдань дослідження.
Висновки
1. Удосконалення методу трансплантації ембріонів без заморозки у поєднанні із суперовуляцією у донорів дозволяє отримати здорове потомство від високопродуктивних тварин.
2. Процес трансплантації ембріонів без заморозки дозволяє скорочувати термін відтворення тварин через найкращу його частину поголів'я.
3. Застосування цього методу дозволяє створювати ембріобанки від генетично цінних тварин, зберігати генофонд рідких та зникаючих порід.