Відомості про пірогенність води для ін’єкцій, Методи виявлення пірогенів - Промислова технологія
Відомості про пірогенність води для ін'єкцій
При парентеральному, особливо при внутрішньосудинному введенні препаратів, іноді спостерігається швидке підвищення температури тіла до 40°С, що супроводжується почастішанням пульсу, ознобом, потовиділенням, нудотою та головним болем. У особливо важких випадках можливий смертельний результат, викликаний присутністю у розчині пірогенів - речовин бактеріального походження. Пірогенність мають живі мікроорганізми та продукти їх життєдіяльності, тіла мертвих бактерій, які можуть перебувати в розчинах після стерилізації. Пирогенні речовини прийнято розділяти на екзогенні (в основному бактеріальні) та ендогенні (клітинно-тканинні). Джерелом ендогенних пірогенів можуть бути лейкоцити та білки крові, які у певних умовах утворюють та виділяють біологічно активні речовини з пірогенними властивостями (лейкопірогени).
З хімічної точки зору пірогени - це складні речовини з високою молекулярною масою та розміром частинок від 50 до 1 мкм, що складаються в основному з ліпополісахаридів, адсорбованих на білковому носії. Наприклад, хімічний склад пірогенної речовини, виділеної з Proteus Vulgaris, складається з вуглецю (25,83%), водню (6,06%), азоту (6%), фосфору (0,29%) та золи (8,33%). ).
Пирогени розчиняються у воді, нерозчинні у спирті та ацетоні, стійкі до впливу підвищеної температури. Нагрівання в автоклаві при 120 С протягом 20 хв призводить до загибелі бактерій, але не знищує пірогени. Чутливість пірогенів до високої температури різна. Зміна pH водяного розчину практично не впливає на термолабільність пірогенів. У сухому вигляді їхнє повне розкладання відбувається тільки при температурі 200°С протягом 30 хв; стерилізація сухим повітрям при 160 ° С протягом 2 год не гарантує повноїапірогенності. Підвищення температури дозволяє скоротити час, необхідний знищення пирогенов. При температурі 600 ° С досить хвилинного нагрівання, при 450 ° С - двохвилинного, отже, звільнити від них воду та ін'єкційні розчини термічною стерилізацією практично неможливо.
Пирогенні речовини чутливі до дії окислювачів, наприклад перекису водню або перманганату калію.
Пирогени мають дуже малими розмірами і проходять через найщільніші фільтри з розмірами пор від 0,005 до 0,001 мкм.
Існують різні методи виявлення та видалення пірогенів із розчинів.
Методи виявлення пірогенів
Для практичних цілей, поряд із методами видалення пірогенних компонентів, велике значення мають методи їх виявлення:
Хімічні методи засновані на проведенні певних кольорових реакцій.
Фізичні методи засновані на вимірі електропровідності та полярографічних максимумів.
Через низку недоліків перших двох методів найчастіше застосовують методи біопроб, які введені у Фармакопеї різних країн світу.
Біологічні методи. До цього часу основним та офіційно прийнятим у всіх країнах методом випробування лікарських засобів на наявність пірогенних домішок вважаєтьсяметод, заснований на триразовому вимірі температури тіла кролика після внутрішньовенного введення досліджуваного препарату. Підвищення температури на 0,6°С або більше, згідно з вимогою фармакопей, вважається доказом пірогенів.
Спеціальні статті Фармакопей обумовлюють умови. проведення цього випробування, оскільки фактори - хімічний (корм), фізичний (зміна температури навколишнього середовища), фізіологічний (збудження тварин при анальному вимірі)температури) - можуть вплинути на результат випробування. І навіть при найсуворішому дотриманні вимог до проведення випробувань неможливо уникнути випадкових помилок, пов'язаних з індивідуальною чутливістю тварин до пірогену та препарату, різними кліматичними умовами, часу постановки досвіду тощо. 0,1°С.
Згідно з даними різних Фармакопей, доза одного і того ж препарату в ряді випадків коливається в широких межах. Дуже часто при рівних або дуже близьких дозах препаратів обсяги розчинів, що вводяться, різняться в 5 разів. Відмічено, що спостерігається великий розрив між дозами для кроликів та людини. Нерідко ці дози різняться в 100-6000 разів. На думку вчених, які вивчали це питання, тест-доза препарату при випробуванні пірогенності повинна підбиратися індивідуально, враховуючи його фармакологію, переносимість кроликом, та орієнтовно повинна становити 1/10 максимальної добової дози для людини.
Існує варіант умов визнання препарату пірогенним або аллірогенным: воду або розчин лікарського засобу вважають апірогенним, якщо сума максимальних підвищення температур у 3 кроликів не перевищує 1,2°С, і пірогенним, якщо вона дорівнює або більше 2,2°С. Якщо сума підвищення температури у 3 кроликів більше 1,2°С, але менше 2,2°С, випробування повторюють на 5 кроликах. Воду або розчин лікарського засобу вважають пірогенним, якщо сума підвищення температури у 8 кроликів дорівнює або більше 3,8 ° С, в іншому випадку - апірогенним.
Останнім часом помітне поширення набуває метод випробування лікарських засобів на пірогенність in vitro з використанням лізату амебоцитів краба Лімулюс. Цей метод має низку переваг перед фармакопейним: вінчутливіше в 5-10 разів, результат виходить швидше, можливе кількісне визначення пірогену. Крім того, за його допомогою можливий контроль препаратів, які не можна випробувати на кроликах. Одним із недоліків цього методу є його специфічність щодо ендотоксину грамнегативних бактерій, тобто небезпека не виявити наявність у лікарських засобах пірогенів іншого походження.