Виявлення стафілокока
З окремихколоній, посіяних на агар з кров'ю, що утворили гемоліз, роблять мазки і фарбують за Грамом. При виявленні стафілококу ці колонії пересівають на м'ясний бульйон та косий агар.
З чашки з живильним агаром пересівають пігментовані колонії. За відсутності пігментованих пересівають білі колонії. Ці пересіви виробляють для подальших досліджень і, зокрема, відмінності патогенних стафілококів від непатогенних. І тому існує кілька методів:
1.Реакція плазмокоагуляції. У стерильну пробірку з 1 мл стерильного 5% розчину натрію лимоннокислого вливають 10 мл стерильно взятої крові з серця кролика. Отриману суміш відразу розводять фізіологічним розчином 1: 4 і розливають по 1 мл стерильні пробірки. Платинової петлею засівають випробувану чисту культуру стафілококів у пробірки з плазмою, після чого ці пробірки ставлять у термостат при 37 ° і перевіряють кожні 2-3 години згортання плазми. Одночасно ставлять у термостат для контролю одну пробірку з плазмою без культури та пробірку з плазмою, в якій посіяна культура свідомо патогенного стафілокока.
При коагуляції плазми протягом 2-4 годин стафілококи вважаються патогенними. Кролячу кров можна замінити кров'ю людини, якщо їй не вводилася найближчим часом глюкоза.
2.При посіві на 5% кров'яний агарз кролячою або баранячою кров'ю патогенні стафілококи дають різкий гемоліз. 3. Використовується здатність патогенних стафілококів викликати інфільтрат та некроз при введенні їх у шкіру піддослідної тварини. Для біологічнихдослідженьстафілококу найбільш чутливими тваринами є кролики.
Суспензію культуристафілококарозводять у фізіологічному розчині так, щоб 1 мл суспензії містив 2млрд. мікробних тіл і вводять кролику внутрішньошкірно на епільованій ділянці шкіри на боці або спині 0,2 мл суспензії.За наявностіу введеній суспензії патогенних стафілококів на місці введення з'являється інфільтрат, значний некроз, що іноді закінчується загибеллю тварини. На одному кролику можна поставити не більше 4-5 проб.
Діагностика стрептокока
Крімстафілококазбудником гнійних захворювань шкіри є і стрептококи.Стрептококи— круглі або витягнуті в довжину коки, що найчастіше розташовуються короткими або довгими ланцюжками. Фарбуються за Грамом. Зустрічаються як патогенні, і непатогенні форми.
Стрептококи, особливо патогенні, на простих поживних середовищах майже не розвиваються. Для їх зростання до живильних середовищ, які мають бути слаболужної реакції (рН-7,2-7,6), додають 1% глюкози, або 5-10% крові, або 10-20% сироватки, асцитичної рідини.
Стрептококиу фізичному та хімічному відношенні досить стійкі. При температурі + 70 ° гинуть через 1 годину, а за + 65 ° - через 2 години. Стрептококи здатні переносити заморожування, не гинуть протягом місяця у висохлому гною чи крові, гинуть від сулеми у розведенні 1 : 1000 через 15 хвилин. Так само діє на стрептококи і 5% розчин карболової кислоти. ж тампоном виробляють посів на чашку з кров'яним агаром, а також на цукровий бульйон, який опускають тампон з випробуваним матеріалом. Засіяні кров'яний агар та бульйонставлять у термостат за нормальної температури 37° на 18—20 годин.
Після зазначеного часу на чашці з кров'яним агаром можна бачити дрібні колонії із зоною просвітлення (гемолізу) навколо, що за величиною перевищує в кілька (3-4 рази) саму колонію. При дослідженні чашки під мікроскопом у зоні гемолізу еритроцити не виявляються; це колонії гемолітичного стрептокока - бета-стрептококи (Streptococcus haemolyticus). Уприготовленомуз такої колонії та забарвленому за Грамом препараті є грампозитивні коки у вигляді коротких ланцюжків.
На рідкомупоживномусередовищі стрептокок росте у вигляді дрібного осаду на дні. Середовище залишається прозорим. Узабарвленомуза Грамом препараті з бульйону виходять довгі ланцюжки гемолітичного стрептокока. Крім гемолітичногострептокока, у чашці з кров'яним агаром виростають колонії зеленого стрептокока - альфа-стрептококи (Streptococcus viridans).
Це дрібніколонії, навколо яких утворюється невелика, вдвічі більше колонії, зона зелянення середовища При вивченні чашки під малим збільшенням мікроскопа можна відзначити, що вся зона зелянення складається з тіней еритроцитів. Узабарвленомуза Грамом препараті з колонії зеленого стрептокока видно грампозитивні короткі ланцюжки стрептококів округлої форми.
Зустрічається ще один вид також дрібних колоній, але не викликають жодних змін середовища на кров'яному агарі (ні гемолізу, ні позеленіння). Це негемолітичний стрептокок (гамма-стрептокок - Streptococcus anhaemolyticus).
У пофарбованому поГрамупрепараті негемолітичні стрептококи так само, як і гемолітичні, розташовані довгими ланцюжками. Негемолітичні стрептококи вважаються менш патогенними. Крім зазначених видівстрептококів, що можуть викликати гнійні захворювання шкіри, існують ще інші види, які не мають прямого відношення до захворювання шкіри.