2.3 Методика визначення сальмонел (Salmonella)
Наважку продукту масою 25 г від об'єднаної проби, ретельно подрібненої стерильними ножицями, вносять у флакон Сокслета, що містить 100см3 середовища збагачення (Мюллер, Кауфман, хлористо-магнієвий) або 225 см3 селенітового бульйону. Вміст перемішують струшуванням і поміщають термостат при 37 °С. Через 16-24 год вміст флакона ретельно перемішують бактеріологічною петлею (діаметр 0,4-0,5 мм) або пастерівської піпеткою і проводять посів з середовища збагачення в чашки Петрі з попередньо підсушеним середовищем Ендо, БФА, Плоскірєва, Левіна або вісмут-сульфіт агар (на вибір). При значному помутнінні слід використовувати середовище Плоскірєва.
Посіви поміщають у термостат при 37 ° С на 16-24 год. На середовищі Ендо бактерії з роду сальмонел утворюють безбарвні або з рожевим відтінком колонії.
На середовищі БФА сальмонели ростуть у вигляді великих, гладких, червоного відтінку прозорих колоній (колонії Staphylococcus typhi suis як і на середовищі Ендо, дрібні). Колонії БГКП жовто-зеленого кольору. Бактерії групи протею дають зростання через 72 год.
На середовищі Плоскірєва колонії сальмонел безбарвні, але щільніші і трохи меншого розміру, ніж серед Ендо; при рясному зростанні середовище жовтіє.
На середовищі Левіна сальмонели ростуть у вигляді прозорих, блідих, ніжно-рожевих або рожево-фіолетових колоній.
На вісмут-сульфітному агарі сальмонели утворюють чорні або коричневі колонії з металевим блиском, ділянка середовища під колонією чорніє. Виняток становлять деякі серологічні типи групи С, що ростуть на цьому середовищі у вигляді ніжних світло-зелених або великих сірувато-зелених колоній.
Ізольовані колонії (не менше 5), характерні для бактерій із роду сальмонел, пересівають на трицукровий агар Крумвіде-Олькеницького у модифікації.Ковальчука штрихом по скошеній поверхні та уколом у стовпчик і інкубують при 37 ± 1 ° С протягом 12-16 год.
При зростанні сальмонел кольору скошеної поверхні середовища Крумвіде — Олькеницького в модифікації Ковальчука рожевий, стовпчик жовто-бурий. Газоутворення встановлюють за наявністю тріщин і розриву стовпчика агару, утворюють сірководень види, що викликають потемніння стовпчика.
Інші грамнегативні бактерії сімейства ентеробактерій дають наступні зміни кольору трицукрового агару:
БГКП - рівномірне фарбування в синій або синьо-зелений колір з утворенням газу або без нього;
бактерії з групи протею - фарбування в яскраво-червоний колір, у випадках виділення Н2S може утворитися чорний осад;
шигели та збудники черевного тифу забарвлюють скошену поверхню в рожевий колір, стовпчик — у синій або синьо-зелений.
Замість середовища Крумвіде-Олькеницького у модифікації Ковальчука допускається посів: на вуглеводні середовища короткого строкатого ряду з глюкозою, лактозою, сахарозою, манітом та мальтозою; напіврідкий агар уколом (для визначення рухливості); бульйон Хоттінгера для визначення утворення індолу та сірководню. При використанні напіврідких середовищ із вуглеводами та індикатором ВР одночасно з ферментативною активністю можна визначити рухливість бактерій.
Для подальшої ідентифікації бактерій готують мазки, які фарбують за Грамом, мікроскопують і вивчають антигенні властивості шляхом постановки пробної аглютинації на предметному склі з адсорбованою аглютинуючою полівалентною сальмонельозною О - сироваткою. При отриманні позитивної реакції на склі з полівалентною сироваткою проводять ідентифікацію за допомогою монорецепторних аглютинуючих Про-сироваток. Встановивши серологічну групу досліджуваних бактерій,допомогою Н-сироваток визначають тип (вид) бактерій.
Виявлення рухливих (крім Salmonella pullorum і Salmonella gallinarum) грамнегативних паличок, що дають характерний ріст на елективних середовищах, неферментують лактозу і сахарозу, що зброджують глюкозу і маніт до кислоти і газу (Salmonella typhi suis не ферментує манітін) та утворюють позитивну реакцію аглютинації з монорецепторними О- та Н-сальмонельозними сироватками, вказує на наявність бактерій з роду сальмонел.