4 Алгоритми диференціальної діагностики спадкових хвороб обміну речовин, що супроводжуються
Таблиця 7. Концентрації патологічних метаболітів, що визначаються за допомогою ВЕРХ-МС/МС
| захворювання | Патологічний метаболіт | ПатологіямМ/М креатиніну | Референсні значеннямМ/М креатиніну |
| Тирозинеміятип 1 | сукцинілацетон | 20 - 254 (n = 8) | 0 - 1,2 (n = 92) |
| Дефекти циклусечовини | Оротова кислота | 560 - 1090 (n=2) | 1-6 (n=47) |
| Глутарова ацидемія тип 1 | Глутарова кислота | 850-2060 (n=12) | 10-130 (n=47) |
3.5.3. Газова хроматографія/мас-спектрометрія органічних кислот сечі.
Підтверджуюча діагностика більшості захворювань із груп органічних ацидурій та аміноацидопатій проведена із застосуванням газової хроматографії – мас-спетрометрії (ГХ/МС). Усім пацієнтам, у яких виявлено відповідні зміни у спектрі амінокислот та ацилкарнітинів, проведено дане дослідження. Істотне підвищення концентрацій певних органічних кислот та ацилгліцинів було підставою для остаточного підтвердження діагнозу (таблиця 8).
3.6. Молекулярно-генетична характеристика захворювань, виявлених у ході дослідження.
Хоча для більшості НБО як основні підтверджуючі тести застосовуються біохімічні методи, для деяких захворювань потрібне проведення ДНК-діагностики. Особливо це актуально для порушень окиснення жирних кислот. Крім того, дані дослідження необхідні в тих випадках, коли сім'я планує проведенняПренатальна діагностика. Також характеристика спектра мутацій при різних захворюваннях має самостійне наукове значення, оскільки розширює наші уявлення про генетичне різноманіття та дані про особливості різних популяцій.
У ході дослідження розроблено прості та швидкі методи ДНК-діагностики для виявлення частих мутацій при глутаровій ацидурії тип1, тирозинемії тип 1, недостатності СЦАД та ДЦГАД (таблиця 9).
Таблиця 8. Значення концентрацій діагностично значимих метаболітів у групі органічних ацидурій.
| Реф-ні значення(мкМ/Мкр) | Захворювання * | |||
| Лейциноз (n=12) | ІВА(n=6) | ММА(n=12) | ГА1(n=13) | ПА(n=2) |
| 2-кето-ізокапронат | 0 – 2 | 313 (90-522) | ||
| 2-ОН-ізокапронат | 0 – 2 | 905 (800-1040) | ||
| 2-ОН-ізовалерат | 0 – 2 | 119 (80-145) | ||
| 2-ОН-3-метилвалерат | 0 – 2 | 75 (50-100) | ||
| 3-ОН-ізовалерат | 0 – 46 | 125 (84-162) | ||
| Ізовалерілгліцин | 0 – 2 | 747 (152 - 1990) | ||
| Метилмалонат | 0 – 2 | 5384 (1645 - 14090) | ||
| Глутарат | 0 – 2 | 1929 (474 - 3542) | ||
| Метилцитрат | 0 – 12 | 230 150 | ||
| 3-ОН-пропіонат | 3 – 10 | 58 362 | ||
| Пропіонілгліцин | 0 – 2 | 5 10 | ||
| Тігглілгіцин | 0 – 2 | 12 21 |
Таблиця 9. Часті мутації деяких захворювань.
| Захворювання | Мутації | % мутантних алелів |
| Тирозинемія тип 1 | IVS 6-1 G/T IVS 12+5 G/A Pro342Leu Arg174Term | 75 |
| Глутарова ацидемія тип 1 | Arg402Trp | 50 |
| Недостатність ДЦГАД | Glu474Gln | 83,3 |
| Недостатність СЦАД | Lys304Glu | 70 |
Незважаючи на невеликий розмір вибірок, розширено уявлення про спектр мутацій деяких захворювань, виявлених під час дослідження (рисунок 5). Всього в ході дослідження розроблено методи ДНК-діагностики для 12 захворювань із цієї групи (таблиця 10), виявлено 24 нових мутацій та 33 описаних раніше в літературі.
а) тирозинемія тип 1 б) глутарова ацидурія тип 1
Мал.5. Спектр мутацій у пацієнтів.
Таблиця 10. Захворювання, котрим під час дослідження розроблено методи ДНК-діагностики.
| Захворювання | Ген | Кількість обстежених |
| Недостатність орнітинтранскарбамілази | OTC | 4 |
| Тирозинемія тип 1 | FAH | 6 |
| Лейциноз | BCKDHA BCKDHB | 9 |
| Глутарова ацидурія тип 1 | GCDH | 10 |
| Метилмалонова аїдурія | MUT MMAA MMACHC MMADHC | 9 |
| Ізовалеріанова ацидурія | IVD | 6 |
| Недостатність–кетіолази | AKAT | 1 |
| Недостатність КЦАД | ACADS | 1 |
| Недостатність СЦАД | ACADM | 2 |
| Недостатність ОДЦАД | ACADVL | 5 |
| Недостатність ДЦГАД | HADHA | 5 |
| Недостатність біотинідази | BD | 15 |
3.7. Частота довголанцюгової 3-гідрокси-ацил-КоА дегідрогенази та середньоланцюжкової ацил-КоА дегідрогенази жирних кислот.
Оскільки в ході дослідження з 26 пацієнтів з ДОЖК, 15 пацієнтів було з недостатністю ДЦГАД і лише 5 з недостатністю СЦАД, а за даними літератури недостатність СЦАД є найчастішим захворюванням із групи ДОЖК, і серед пацієнтів з недостатністю ДЦГАД та СЦАД з високою частотою зустрілися мутації Glu474Gln та Lys304Glu (83,3% та 70%, відповідно), проведено визначення частоти даних мутацій методом ПЛР-ПДРФ аналізу серед новонароджених м. Москви. На підставі аналізу частот мутацій Glu474Gln і Lys304Glu у вибірці новонароджених м. Москви виявлено, що частота СЦАД в Україні значно нижча, ніж у багатьох інших країнах Західної Європи, а частота ДЦГАД порівнянна з частотами деяких країн Західної Європи (таблиця 11).
Таблиця 11. Аналіз частот мутацій Glu474Gln та Lys304Glu у вибірці новонароджених м. Москви.