Артефакти приготування гістологічного препарату та шляхи їх усунення
Артефактом (від латинського art – мистецтво та factum – зроблений) називають те, що створено штучно.В гістології артефактом називають ознаки або структури, що виникають на препаратах випадково або внаслідок поганої обробки. Спотворення справжнього виду тканини можуть виникнути на будь-якому етапі виготовлення препарату.
До найчастіше зустрічаютьсяартефакти фіксації відносять:
- Посмертну дегенерацію – виникає при несвоєчасній фіксації або взяття дуже великих шматочків матеріалу
- Зморщування - виникає при занадто тривалій фіксації
- Випадання осаду (темно-коричневий пігмент у вигляді зернят або глибок) – при використанні кислого формаліну, поганому видаленні фіксаторів
Для усунення зерен пігменту (осаду) на препараті зрізи поміщають:
- в 1-5% розчин аміаку на 15-20 хв
- у 70% спирт на 15-20 хв
- в 1% розчин гідроксиду калію в 80% спирті (1:25) на 10 хв
Після чого зрізи промивають водою і фарбують
Надмірне ущільнення можна спробувати виправити, помістивши шматочки тканини у 10% розчин лимонної кислоти на 1-2 години.
Прояви посмертної дегенерації усунути не можна.
Артефакти приготування гістологічних зрізів і шляхи їх усунення.
| Причини проблеми | Алгоритм дій для усунення причин: |
| Зрізи виходять занадто тонкі або товсті | |
| 1. Кут нахилу леза занадто малий | Відрегулюйте кут нахилу |
| 2.Зразок погано зафіксований (в орієнтаційній насадці або затискачі для касет) | Перевірте, щоб всі гвинти та ручки,що фіксують зразок, були затягнуті. Якщо потрібно, то затягніть їх ще раз. |
| 3.Мікротомний ніж чи лезо затупилися | Використовуйте інші частини ріжучого краю або візьміть новий ніж чи лезо |
| Зрізи стислі. | |
| 1.Мікротомний ніж чи лезо затупилися | Використовуйте інші частини ріжучого краю або візьміть новий ніж чи лезо |
| 2.До ножа/леза прилип парафін | Очистіть ніж/лезо за допомогою щітки, змоченої у ксилолі. Під час чищення ведіть щітку вгору у напрямку від ріжучого краю, |
| 3.Блок надто теплий | Безпосередньо перед мікротомією, охолодіть блок за допомогою спеціального спрею, на охолоджувальній платі або в крижаній воді |
| 4. Кут нахилу леза занадто великий | Відрегулюйте кут нахилу (поступово зменшуйте кут нахилу, доки не знайдете оптимальний). Перевірте, чи затиснутий гвинт листової пружини |
| Зрізи мають подряпини чи розриви | |
| 1.Дефект ріжучої поверхні | Трохи просуньте лезо і подивіться, чи змінилося разом із цим розташування подряпин на зрізі. Якщо подряпини теж змістилися, замініть лезо |
| 2.На ріжучий край леза налип парафін | Очистіть лезо за допомогою щітки, змоченої у ксилолі. Під час чищення ведіть щітку вгору у напрямку від ріжучого краю |
| Не виходить серія зрізів | |
| 1. Неправильно виставлено кут нахилу леза (занадто вертикально) | Відрегулюйте кут нахилу (поступово змінюйте кут нахилу, доки не знайдете оптимальний). |
| 2. Блок надто теплий | Безпосередньо перед мікротомією, охолодіть блок за допомогою спеціального спрею, на охолоджувальній платі абоу крижаній воді |
| 3. Тканина погано проведена | Проведіть повторну проводку та заливку зразка |
| 4. Неправильно вибрано тип леза | Використовуйте лезо для серійних зрізів із кутом ріжучого краю 35º |
| 5. Лезо затупилося | Спробуйте різати іншою ділянкою леза або поміняйте лезо на нове |
| На зрізах з'являються отвори: | |
| 1. Тканина погано проведена | Проведіть повторну проводку та заливку зразка |
| 2. На ріжучий край леза налип парафін | Очистіть лезо за допомогою щітки, змоченої у ксилолі. Під час чищення ведіть щітку вгору у напрямку від ріжучого краю, |
| 3. Пошкоджено ріжучий край леза | Посуньте лезо або поміняйте його на нове |
| Зрізи закручуються | |
| 1. Неправильно виставлено кут нахилу леза (занадто вертикально) | Налаштуйте кут нахилу ножа\леза |
| 2. Лезо занадто гостре | Проведіть тримінг леза, використовуючи порожній парафіновий блок |
| 3. Неправильно вибрано тип леза | Використовуйте інші типи лез |
Артефакти фарбування та укладання препаратів: