Дифузійний метод - Студопедія
Феномен преципітації
Це взаємодія розчинних антигенів та антитіл з утворенням агрегатів, що проявляється помутнінням середовища (освітою преципітату).
Осадовий метод.
Це реакції преципітації в розчині електроліту, з осадом, що повільно осаджується (преципітатом).
РКПА - реакція кільцепреципітації Асколі.
Імунну сироватку у невеликих розведеннях (1:2-1:10) наливають у конічну пробірку у кількості 3-5 мл. По стінці цієї пробірки пастерівською піпеткою обережно нашаровують на сироватку рівний об'єм розчинного антигену (екстракт бактерій). Для розведення інгредієнтів застосовують 0,85% розчин хлориду натрію.
За наявності в матеріалі антигену на місці зустрічі двох компонентів через кілька хвилин з'являється помутніння - білувате кільце преципітату. Якщо антигену немає, то не буде і преципітату.
Цю реакцію широко застосовують щодо сибировиразкових бактерій на шкіряно-хутряних виробах. Шматочки шкіри з хутром вистригають, подрібнюють, заливають розчинником 1:10 і кип'ятять 30 хв. Екстракт використовують у РКПА для визначення термостійкого сибіркового антигену.
Дифузійний метод.
Ця група реакцій преципітації ставиться в агаровом гелі, результат взаємодії розчинних антигену та антитіл проявляється у вигляді білуватої смужки на межі їх зустрічі в гелі – преципітату.
РПГ - реакція преципітація в гелі.
Реакцію ставлять на чашках Петрі, залитих агаровим пептонним шаром. Посередині поміщають смужку фільтрувального паперу, попередньо змоченою антитоксичною сироваткою. Після підсушування на відстані 1 см від краю смужки роблять посіви культур дифтерійного мікроба бляшками до 1 см, з двох сторін смужки.паперу. Серед культур має бути свідомо токсигенний штам (позитивний контроль) та штам нетоксигенний (контроль негативний). Посіви поміщають у термостат на 24 год.
Якщо культури були токсигенні, то між смужкою паперу та бляшкою культури виникає біла лінія преципітації, яка збігається з лінією преципітації позитивного штаму. Якщо культури не токсигенні, лінії преципітації нічого очікувати. Преципітат утворюється завдяки дифузії антитіл та антигену в різні боки в агарі. У місці їхньої зустрічі з'явиться біла смужка преципітації.
РПО - реакція преципітації по Оухтерлону.
Ще один різновид преципітації в гелі. У агарі на чашці Петрі певними пробійниками вирізують 4 невеликі лунки, розміщені у вигляді квадрата, з відривом 0,5 див. У першу лунку вносять імунну сироватку. У другу лунку поряд - відомий антиген (контроль позитивний), гомологічний імунній сироватці, що в 1 лунці. У третю лунку, навпроти першої лунки, вносять нормальну сироватку (негативний контроль). У 4 лунку, поряд з першою, але з іншого боку від неї порівняно з другою лункою, вносять випробовуваний антиген екстракт. Чашка ставиться у вологу камеру на добу при 37оС - за потреби і більше доби.
Якщо у випробовуваному екстракті є антиген, то смужки преципітації в гелі розподіляться між 1 і 2 лунками (контроль), 1 і 4 лунками (досвід) під кутом до третьої лунки (негативний контроль). Якщо антигену немає, то буде лише одна смужка між 1 та 2 лунками (позитивний контроль).
Реакція преципітації характеризується осадженням специфічних дрібнодисперсних антигенів еквівалентною кількістю антитіл у присутності електроліту. Випадання нерозчинного комплексу антиген - антитіло у вигляді осадуспостерігається лише за еквівалентних співвідношеннях інгредієнтів. Комплекс, що утворився, може розчинитися в надлишку антигену або антитіл. Антиген повинен мати характер прозорого колоїдного розчину.
У лабораторній діагностиці інфекційних захворювань реакція преципітації служить головним чином для виявлення або ідентифікації антигену (преципітіногену) по відомій сироватці, що містить преципітуючу, містить антитіла (преципітини). Для приготування колоїдних антигенів, що беруть участь у реакції преципітації, використовують різні методи їх екстракції з досліджуваного матеріалу: фізичні, хімічні та біологічні.
Імунофлюоресцентний метод. Виявлення бактеріальних та вірусних антигенів в інфікованих матеріалах, тканинах тварин і культурах клітин за допомогою флюоресціюючих антитіл (сироваток) набуло широкого застосування в діагностичній практиці. Імунофлюоресцентний метод відноситься до експрес-діагностики, не поступаючись іншим серологічним реакціям щодо чутливості та специфічності
еакція преципітації. Проводиться з прозорими колоїдними розчинними антигенами, екстрагованими з патологічного матеріалу, об'єктів довкілля та чистих культур бактерій. Один з поширених методів хімі-
чеської екстракції антигенів бактерій - отримання комплексного антигену за Буавеном за допомогою гідролізу бактерій трихлороцтовою кислотою. В реакції використовуються прозорі діагностичні сироватки з високими титрами антитіл. За титр сироватки, що преципітує, приймають те найбільше розведення антигену, яке при взаємодії з імунною сироваткою викликає утворення видимого преципітату - помутніння.
Реакція кільцепреципітації. Ставиться у вузьких пробірках (діаметр 0,5 см), які вносять по 0,2-0,3 млпреципітуючої сироватки. Потім пастерівською піпеткою повільно, по стінці, тримаючи пробірку в похилому положенні, нашаровують 0,1-0,2 мл антигенного розчину. Пробірки обережно переводять у вертикальне положення. Результати досліду протоколюють (табл. 17).
Облік реакції проводять через 1-2 хв. У разі позитивної реакції у першій пробірці на межі між сироваткою та досліджуваним антигеном з'являється преципітат у вигляді білого кільця. В інших (контрольних) пробірках преципітату не утворюється
Реакція преципітаціїв гелі (агарі). Чашки заливають агаром, у якому вирізують кілька луночок на рівній відстані один від одного. У центральну лунку вносять сироватку, що містить антитіла, в інші - різні випробувані антигени або один і той же антиген у різних розведеннях. При дифузії реагентів в агарі в зонах оптимальних співвідношень на місці зустрічі антигену та антитіл утворюються каламутні смуги - дуги преципітації (рис. 58).
У разі постановки реакції преципітації з різними розведеннями антигену можна встановити титр преципітуючої сироватки-максимальне розведення антигену, яке дає преципітацію з даною сироваткою. Один із різновидів реакції преципітації в гелі дозволяє визначати токсигенність досліджуваних бактерій (наприклад, дифтерійної палички) за допомогою антитоксичної сироватки. Для цього в чашку Петрі на живильне середовище поміщають смужку стерильного фільтрувального паперу, просочену антитоксичною протидифтерійною сироваткою. Потім чашку підсушують у термостаті і засівають випробуваними культурами у вигляді штрихів, перпендикулярних до смужки паперу, на відстані 06-08 см від її краю. Як контроль використовують наперед токсигенну культуру. Чашки інкубують при 37°С протягом доби. Принаявності токсигенної культури у місці взаємодії токсину з антитоксином утворюються лінії преципітації у вигляді дуг
Чи не знайшли те, що шукали? Скористайтеся пошуком: