Дослідження клітин
Визначення кількості клітин у пунктаті. Пунктат кісткового мозку на годинному склі обережно розтирають скляною паличкою і швидко насмоктують у змішувач для еритроцитів, набирають 3-5% розчин оцтової кислоти (розведення кісткового мозку можна також проводити пробірковим методом по Миколаєву). Після цього роблять так само, як при підрахунку лейкоцитів крові.
Загальна кількість ядерних елементів коливається у великих межах, мабуть, внаслідок неоднакового складу кістковомозкової тканини у різних ділянках та різної домішки периферичної крові в пунктаті. У здорових людей кількість кістково-мозкових клітин становить від 45 до 250 тис. в 1 мкл.
Підрахунок можна робити двома способами:
1) метод Кіст. Вважають окремо клітини лейкопоезу та еритропоезу. Зраховують 500 (або 1000) клітин лейкопоезу, а кількість клітин червоної крові обчислюють на 100 клітин лейкопоезу;
2) метод Арінкіна. Вважають поспіль всі клітини кісткового мозку та обчислюють відсоток кожного виду клітин.
При оцінці пунктату кісткового мозку, крім кількості підрахованих клітин, необхідно враховувати і співвідношення між молодими та більш зрілими формами нейтрофілів – так званий кістковомозковий індекс дозрівання нейтрофілів. У нормі цей індекс менше 1 і дорівнює 06-08.
При оцінці мієлограми необхідно знати динаміку периферичної крові та стан хворого. Крім кількісних зрушень клітин лейкопоезу та еритропоезу, треба враховувати ступінь їх дозрівання. При збільшенні еритробластичних та лейкобластичних елементів із затримкою їх дозрівання у периферичній крові може спостерігатися зменшення кількості лейкоцитів та еритроцитів. В інших випадках (наприклад, при еритреміі) в кістковому мозку відзначається збільшена кількістьнормобластів без порушення їх дозрівання та збільшення числа еритроцитів у крові.
При оцінці пунктату кісткового мозку дуже важливе відношення кількості елементів лейкопоезу до ядерних елементів еритробластичного ряду. У здорових людей це співвідношення становить 4: 1 або 3: 1. Якщо кількість кістково-мозкових клітин збільшується в основному за рахунок клітин еритропоезу, це вказує на гіперплазію останнього, і співвідношення лейко/еритро зменшується, досягаючи величини 1: 1 і менше. Така картина спостерігається при різних формах недокрів'я (постгеморагічна, гемолітична та В12-дефіцитна анемія).
При нелікованій анемії Аддісона-Бірмера кількість клітин збільшується переважно за рахунок мегалобластів, а на початку ремісії – за рахунок еритронормобластів. При цьому співвідношення лейко/еритро досягає 1:8. При повній ремісії воно наближається до норми.
При зменшенні кількості клітин у кістковому мозку зменшення співвідношення лейко/еритро може бути і не пов'язане з гіперплазією еритропоезу, а є наслідком зменшення утворення клітин гранулопоезу. Така картина зустрічається при агранулоцітозі.
При одночасному зменшенні числа клітин лейкопоезу та еритропоезу може зберегтися нормальне співвідношення між ними, і в той же час обидва вказані вище паростки будуть пригнічені. Подібний стан зустрічається при гіпо- та апластичних процесах. Різке збільшення кількості кістково-мозкових елементів зі збільшенням співвідношення лейко/еритро свідчить про гіперплазію мієлоїдних елементів, зустрічається при лейкозах, інфекціях, інтоксикаціях та інших станах.
Для кількісної оцінки мегакаріоцитів використовують такі методи:
1) підрахунок у камері;
2) підрахунок у мазках: за полями зору, стосовно кількостівсіх ядерних клітин кісткового мозку
Всі ці методи є досить точними. Найбільш точне кількісне уявлення дає підрахунок в зрізах кісткового мозку, отриманого при трепанобиопсии.
Підрахунок у лічильній камері. При розведенні пунктату кісткового мозку оцтовою кислотою (1: 20) відбувається гемоліз еритроцитів, що дозволяє проводити підрахунок мегакаріоцитів у лічильній камері. Розведення пунктату кісткового мозку та методика підрахунку аналогічні підрахунку лейкоцитів у крові. Підрахунок роблять на всій поверхні сітки, потім число мегакаріоцитів, що порахували, множать на розведення (20) і ділять на об'єм камери (3,2).
Підрахунок у мазках по полях зору. У мазках пунктату кісткового мозку підраховують мегакаріоцити за малого збільшення мікроскопа з виведенням середніх цифр.
Неточність методу обумовлена тим, що в мазках мегакаріоцити розташовуються нерівномірно, зосереджуючись більше на краях препарату і в кінці мазка. У здорової людини в мазках пунктату кісткового мозку у 250 полях зору міститься 5-12 мегакаріоцитів.
Підрахунок у мазках по відношенню до всіх ядерних клітин. У мазках пунктату кісткового мозку при виведенні мієлограми (підрахунок щонайменше 500 клітин) відзначається відсоток мегакаріоцитів. Недолік методу той самий, що й підрахунку в мазках по полях зору.
Різке збільшення кількості мегакаріоцитів у кістковому мозку спостерігається при мієлопроліферативному синдромі, особливо при поліцитемії, а також при ідіопатичній тромбоцитопенічній пурпурі (хвороби Верльгофа), при цирозі печінки з явищами гіперспленізму. Збільшення числа мегакаріоцитів виявляється при злоякісних новоутвореннях, при симптомі геморагічної тромбоцитемії після гострої крововтрати. Зменшення кількості мегакаріоцитів характерне длябільшості системних гіперпластичних процесів