Глюкозооксидазний метод - Студопедія
Сьогодні найбільшого поширення набули методи, що ґрунтуються на використанні ферменту – глюкозооксидази. В основі методу лежить наступна реакція:
Глюкозооксидаза каталізує перенесення двох водневих атомів з першого вуглецевого атома глюкози на кисень, розчинений у рідкому реагенті. При цьому в ході реакції утворюється в еквімолярних кількостях перекис водню. Тобто. концентрація перекису водню, що утворилася, точно дорівнює визначеній концентрації глюкози. Отже, використання глюкозооксидазної реакції трансформувало завдання визначення концентрації глюкози в завдання визначення концентрації перекису водню, яка, як буде показано нижче, значно простіше першої. І тут є кілька способів, які широко використовуються сьогодні в лабораторній практиці (див. схему).
Серед перерахованих вище способів реєстрації найбільшого поширення набувфотометричний біохімічний метод, в якому молекули перекису водню під дією ферменту пероксидази розщеплюються з утворенням активної форми кисню – супероксид аніон-радикала – О2 - , який у свою чергу окислює хромоген, що наводить до значної зміни спектру поглинання хромогену.
Велика популярність цього методу визначення глюкози пояснюється його високою специфічністю та простотою виконання. Метод можна реалізувати як із застосуванням звичайного фотометра, так і за допомогою автоматичних біохімічних автоаналізаторів.
Глюкозооксидазний метод визнаний сьогодні одним із найточніших кількісних методів визначення глюкози. Як біологічний матеріал використовується як сироватка крові, так і цільна кров. Працюючи з останньою слід враховувати те що, що з взяття капілярної крові часткасироватки (плазми) залежить від величини гематокриту, що може негативно вплинути на точність результату. Тому для визначення глюкози вищеописаним методом переважно використовувати сироватку крові пацієнта.
Поряд з методом фотометрування по кінцевій точці, кілька років тому з'явилися набори, в яких реалізований кінетичний метод фотометрування. Суть методу полягає в тому, що при певному співвідношенні активностей глюкозооксидази та пероксидази швидкість утворення забарвленої сполуки деякий час після внесення проби в робочий розчин буде пропорційна концентрації глюкози в пробі. Перевага такого методу полягає в тому, що результат не залежить від наявності в пробі інших сполук, оскільки поглинання останніх є стабільним у часі. Цей метод вимагає застосування кінетичного фотометра, напівавтоматичних аналізаторів чи автоматичних біохімічних аналізаторів. Вимір концентрації глюкози з цільної крові зручно виконувати за допомогою приладів, робота яких заснована на амперометрическом принципі вимірювання, за допомогою спеціальних ферментних датчиків. Перекис водню є вкрай нестабільною хімічною сполукою, і вона може бути джерелом заряджених частинок. Саме це використовується в ферментних датчиках мембранного типу або електрохімічних елементах портативних глюкометрів.
На закінчення слід згадати і про недоліки глюкозооксидазного методу. Перекис водню, що утворюється, і супероксид аніон-радикал можуть окислювати не тільки хромоген, але й інші речовини, присутні в біологічній рідині: аскорбінову кислоту, сечову кислоту, білірубін. При цьому відповідно частка перекису, що бере участь в окисленні хромогену, знижується, що призводить до заниження результату по глюкозі. Цейметод лінійний, як правило, до 20-30 ммоль/л глюкози.
Чи не знайшли те, що шукали? Скористайтеся пошуком: