Комплексна діагностика Helicobacter pylori інфекції у хворих на хронічний холецистит

Статті. Робота з контентом

Огляд минулих заходів

Комплексна діагностика Helicobacter pylori інфекції у хворих на хронічний холецистит

Проведено вивчення ефективності різних методів виявлення H.pylori у жовчі у 50 хворих на хронічний холецистит. H.pylori виявлено у 50-52% випадків цитологічним методом, ПЛР для детекції ureC гена H.pylori, проведена за допомогою комерційного набору, була позитивною у 50% випадків (n=38). Ген 16S рДНК роду Helicobacter був виявлений у 50% зразків жовчі, при цьому ДНК H.pylori виявлена ​​у 25% зразків, стільки ж зразків були позитивними щодо H.rappini. Усі зразки щодо генів cdtB H.pullorum та cdtB H.bilis були негативними. Для діагностики H.pylori у хворих на хронічний холецистит можна рекомендувати комплексний метод, що включає морфологічні та молекулярно-генетичні дослідження.

Комплексні diagnostics of Helicobacter pylori infection in pacients with chronic cholecystitis

Study ofeffectiveness different methods for detection of H.pylori in bile in 50 patients with chronic cholecystitis was conducted. H.pylori були засновані в 50-52% cytological method, PCR для визначення ureC gene H.pylori, отриманий з використанням комерційного kit був позитивний в 50% випадків (n = 38). Gene 16S rDNA Helicobacter genus був виявлений в 50% зразків білих, H.pylori DNA був знайдений в 25% з зразків, самі amples були positive for H.rappini. Всі тексти для gene cdtB H.pullorum і cdtB H.bilis були negative. Для diagnosis H.pylori в пацієнтів з хронічною cholecystitis може бути поєднаний з активним прикладом, що включає morphological і molecular genetic studies.

Helicobacter pylori як найбільш вивчений таВідомий представник роду Helicobacter визнаний збудником запальних гастродуоденальних захворювань (гастриту, гастродуоденіту, виразкової хвороби шлунка та 12-палої кишки). Встановлення зв'язку між інфікованістю Н.рylori та раком шлунка дало підставу Міжнародному агентству з вивчення раку віднести його до канцерогенів І групи. Але в наукових доповідях останніх років все активніше обговорюється питання участі цих бактерій у запальних захворюваннях гепатобіліарної системи [8, 18].

Хронічний холецистит - одне з найпоширеніших захворювань у різних популяціях індустріально розвинених країн [7]. Існує кілька теорій виникнення запальних захворювань біліарної системи. Згідно з однією з них, основна роль належить інфекції. У здорових людей мікроорганізми у жовчному міхурі зазвичай відсутні. У жовчі хворих з патологією біліарної системи виявляються патогенні (сальмонели, лептоспіри та ін.) та умовно-патогенні (кишкова паличка, клебсієли, протей, ентеробактер, стафілококи, ентерококи та ін.) бактерії, віруси гепатиту А, гриб та глистних інвазій. У пресі останніх років з'явилися повідомлення про виявлення бактерій роду Helicobacter у хворих на хронічний холецистит в органах гепатобіліарної системи [3, 4, 10, 11, 15]. Розшифрування патогенетичних механізмів за участю цих мікроорганізмів відкриває перспективу застосування протихелікобактерної терапії для лікування та профілактики захворювань жовчного міхура і печінки, а також запобігання персистенції хелікобактерів у жовчних шляхах і повторної колонізації слизової оболонки шлунка при закиданні.

Відсутність «золотого» стандарту мікробіологічного підтвердження виявленняхелікобактерів у тканинах печінки, жовчного міхура та жовчі може чинити стримуючий ефект у дослідженнях з вивчення етіологічної значущості цих бактерій у патогенезі захворювань гепатобіліарної системи. Крім того, існує проблема диференціювання H.pylori від інших бактерій роду Helicobacter, особливо ентерогепатичних видів, що колонізують жовчний міхур тварин і людини, зокрема Helicobacter bilis, Helicobacter hepaticus, Helicobacter pullorum, Helicobacter muridarum, Helicobacter rappini. Тому назріла потреба у розробці алгоритму комплексного методу діагностики H.pylori інфекції у хворих на хронічний холецистит.

Мета дослідження - оцінка ефективності різних методів виявлення H.pylori в органах гепатобіліарної системи хворих на хронічний холецистит.

Матеріал та методи дослідження. Обстежено 50 хворих на хронічний некалькульозний холецистит, які звернулися до лікувальних закладів м. Казані (чоловіків — 12, жінок — 38). Середній вік пацієнтів становив 42,5 року. Всім хворим було проведено дуоденальне зондування з відбором порцій жовчі, що відображають вміст жовчного міхура та жовчних проток (В та С). Після відбору матеріалу пробірки одразу ж відправляли до лабораторії. Проби жовчі були використані для цитологічного та молекулярно-генетичного досліджень. Зі зразків жовчі готували мазки, фіксували в 96%-ном етиловому спирті і фарбували катіоновим синім О (основним) [2]. Бактерії H.pylori виявляли за типовою морфологією - з-подібно вигнуті палички спіралеподібної форми. Ступінь обсіменіння у мазках визначали за параметрами, встановленими Сіднейською системою.

Рисунок 1. Детекція ДНК Helicobacter pylori у клінічних зразках за допомогою ПЛР. 1-3 - досліджувані зразки; До —негативний контроль; К + - Позитивний контроль; М - маркер

комплексна

Для детекції ДНК бактерій роду Helicobacter використовували молекулярно-генетичний метод, що з кілька етапів. Перший етап включав проведення універсальної ПЛР F2/R4 для ампліфікації фрагмента 16S рРНК. Наступним етапом було проведення родоспецифічної ПЛР C97/C98 з позитивними реакції F2/R4 зразками ДНК для виявлення фрагмента 16S рРНК бактерій роду Helicobacter. Потім зразки ДНК, що мають позитивний результат у специфічній ПЛР для роду Helicobacter, піддавали видоспецифічної ПЛР з метою детекції чотирьох видів Хелікобактер H.bilis, H.pullorum, H.pylori і H. (Flexispira) rappini. Праймери, умови ПЛР та розміри ампліконів представлені в таблиці 1.

Праймери та умови ПЛР для різних ДНК-мішеней

Розмір амплікону (п.о.)

F2-16S-CHPEC

R4-16S-CHPECУніверсальна16S rRNA(94°C; 30 сек, 60°C; 30 сек, 72°C; 80 сек)×401456Rocha М. та співавт. (2005) [20]С97

С98Рід Helicobacter16S rRNA(94°C; 30 сек, 54°C; 90 сек 72°C; 60 сек)×35398Fox JG. та співавт. (1998) [9]HPY S

HPY AHelicobacter pylori23S rRNA(94°C; 1 хв, 55°C; 1 хв, 72°C; 1 хв)×40267A. Menard та співавт. (2002) [12]F1-cdtB-pullorum

R2-cdtB-pullorumHelicobacter pullorumcdtB94°C; 30 сек, 60°C; 1 хв, 72°C; 20 сек)×40140

148Rocha М. та співавт. (2005) [20]F2-cdtB-bilis

R2-cdtB-bilisHelicobacter biliscdtB(94°C; 30 сек, 60°C; 1 хв, 72°C; 30 сек)×40151Rocha М. та співавт. (2005) [20]F1-ureB-rappini

R2-ureB-rappiniHelicobacter rappiniureB(94°C; 30 сек,60°C; 30 сек,72°C; 10 сек)×40101Rocha М. та співавт. (2005) [20]