Лабораторія генетичного моделювання хвороб людини - Інститут загальної генетики
Завідувач лабораторії – д.б.н. Олексій Петрович Галкін
Метод заснований на стійкості амілоїдних фібрил до обробки іонними детергентами, такими як сульфат додецил (SDS). Метод дозволяє ідентифікувати всі білки, що утворюють SDS-стійкі агрегати у будь-яких тканинах різних організмів із секвенованим геномом.
Малюнок 1. Схема методу ідентифікації білків, що формують SDS-стійкі амілоїдоподібні агрегати
ОСНОВНІ НАПРЯМКИ РОБОТИ
- Ідентифікація функціональних амілоїдів у мозку ссавців та у тканинах репродуктивної системи різних організмів.
За допомогою методу протеомного скринінгу ідентифіковані білки, які формують SDS-стійкі амілоїдоподібні агрегати в мозку молодих самців щура, а також у тканинах репродуктивної системи таких модельних об'єктів, як курка та дрозофіла. Амілоїдні властивості виявлених кандидатів досліджуються в експериментах in vivo та in vitro. Ведеться робота з виявлення білків, які розбирають хвороботворні амілоїдні агрегати. У роботі використовується широкий спектр генетичних, біохімічних, цитологічних та протеомних методів (методи генної інженерії, аналіз колокалізації білків з амілоїд-специфічними барвниками на кріосрізах тканин, різні модифікації Вестерн-блот, аналіз формування амілоїдних фібрил in vitro за допомогою конфокальної та).
2.Аналіз взаємодії пріонів та амілоїдів.
Виникнення пріону (інфекційного амілоїду) призводить до зміни конформації білка та його інактивації. В одноклітинних організмах, таких як дріжджі S. cerevisiae, змінена форма білка передається з клітини в клітину, і це викликає успадкованезміна ознаки. Відповідно до концепції білкової спадковості пріонізація білка викликає спадкові зміни без зміни послідовності відповідного гена.
За допомогою методу протеомного скринінгу ми показали, що епігенетичний фактор [NSI+], що викликає наскрізне прочитання стоп-кодонів, визначається взаємодією двох пріонів [SWI+] та [PIN+].
Таким чином, поряд з моногенним та полігенним успадкуванням, у рамках концепції білкового успадкування, ми виділяємо «монопріонний» та «поліпріонний» типи успадкування ознак. Поліпріонний тип успадкування охарактеризовано вперше. Приклад ознаки, що детермінується взаємодією пріонів, представлений малюнку 2.
Малюнок 2. Аналіз впливу взаємодій пріонів [SWI+] та [PIN+] на супресію прояву нонсенс-мутацій ade1-14 (UGA).
Склад лабораторії
Зав. лаб., д.б.н. А.П. Галкін, н.с. Т.А. Рижова, к.б.н., н.с. Ю.В. Сопова, к.б.н., с.н.с. С.Ю. Москаленка, к.б.н., м.н.с. Т. Рогоза, м. н. А.А. Шенфельд