Лабораторна діагностика кліщового енцефаліту

Заняття № 2.1.3.

Вірусні нейроінфекції. Лабораторна діагностика сказу, кліщового енцефаліту

МЕТА ЗАНЯТТЯ:

вивчити біологічні властивості збудників кліщового енцефаліту, сказ та принципи їх вірусологічної діагностики; класифікувати антимікробні препарати для ідентифікації, лікування, профілактики кліщового енцефаліту та сказу.

СТУДЕНТ ПОВИНЕН ЗНАТИ:

1. Таксономія нейровірусних інфекцій. Основні клінічні прояви захворювань, що викликаються нейровірусами.

2. Патогенез, епідеміологія, сприйнятливість та імунітет, механізм передачі збудників.

3. Принципи лабораторної діагностики кліщового енцефаліту та сказу.

4. Профілактичні, лікувальні та діагностичні препарати, які застосовуються при кліщовому енцефаліті та сказі.

СТУДЕНТ ПОВИНЕН ВМІТИ:

аналізувати результати лабораторної діагностики кліщового енцефаліту та сказу;
класифікувати лікувальні, профілактичні та діагностичні препарати, що застосовуються при кліщовому енцефаліті та сказі.

СТУДЕНТ ПОВИНЕН ВОЛОДІТИ: алгоритмом лабораторної діагностики інфекційних хвороб;

методами аналізу та оцінки результатів лабораторної діагностики щодо виявлення збудників вірусних нейроінфекцій.

Робота № 1. Принципова схема лабораторної діагностики кліщового енцефаліту

Ситуаційне завдання

До інфекційної лікарні надійшов хворий М., 27 років, зі скаргами на озноб, лихоманку (39,5 0 С), болісний головний біль, біль у кінцівках і поперековій ділянці, нудоту і неодноразове блювання. Хворий загальмований. При обстеженні виявлено менінгеальні симптоми та ознаки осередкового ураження ЦНС: парези шиї, м'язівплечового пояса, верхніх кінцівок. З анамнезу відомо, що пацієнт живе у сільській місцевості, часто допомагає у роботі єгерю. Приблизно 3 тижні тому виявив на собі кліща, що присмоктався. Проти кліщового енцефаліту не вакцинувався. Після огляду хворого лікар поставив попередній діагноз: «Кліщовий енцефаліт, менінгоенцефалітична форма»?

Мета: розібрати принцип лабораторної діагностики кліщового енцефаліту, обґрунтувати методи, представлені у схемі «Лабораторна діагностика кліщового енцефаліту».

Досліджуваний матеріал: кров, СМР, тканина органів від трупів

Зараження курячого ембріона 7-8 денного віку в амніон або алантоїсну порожнину; або культури клітин – ФЕК, ССПЕВ, ПЕМ

Зараження одноденних мишей-сосунд, білих мишей масою 7-8 гр. інтрацеребрально, внутрішньочеревно, підшкірно

Серодиагностика (сироватки пацієнта виявлення антитіл): РСК, РТГА, РН, РПГА

Ідентифікація у РСК, РТГА, РІФ, РН на мишах, РП, РІА

Ідентифікація в РЗК, РТГА, РН у культурі клітин, РП, РТГадсорбції, ІФА, РІА, реакція інтерференції

Робота № 2. Вірусологічна діагностика кліщового енцефаліту

А) Визначити наявність вірусу кліщового енцефаліту в алантоїсній рідині курячого ембріона за допомогою постановки реакції гемаглютинації (РДА).

Б) Визначити наявність вірусу кліщового енцефаліту в культурі клітин нирок ембріона свині, що перевивається, за результатом ЦПД вірусу. Описати ЦПД вірусу.

В) Провести ідентифікацію вірусу кліщового енцефаліту за допомогою постановки РН в культурі клітин, що перевивається, (КК) нирок ембріона свині по ЦПД.

Досліджуваніпробірки з культурою клітин	Досвід	Контролі досвіду
Контроль вірусу	Контроль культури клітин	Контроль спец. сироватки
Результат РН у культурі клітин ПЕМ

Робота № 3. Серологічна діагностика кліщового енцефаліту

В) Врахувати результат постановки ІФА з парними сироватками хворого з підозрою на кліщовий енцефаліт.

Титри 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 контроль контроль

______________________________________________________________________________

Робота № 4. Принципова схема лабораторної діагностики сказу

Мета: розібрати принцип лабораторної діагностики сказу, обґрунтувати методи, представлені у схемі «Лабораторна діагностика сказу».

Серодиагностика лише визначення поствакцинального імунітету: РН, РСК,РИФ,ИФА

Вірусологія: 1. Зараження білих мишей, щурів, морських свинок, кроликів інтрацеребрально 2. Індикація за клінічними симптомами та загибеллю тварин. 3. Ідентифікація виявлення тілець Бабеша-Негрі, специфічного антигену в мазках-відбитках (РІФ), РН.

Вірусоскопія: 1. Виявлення тілець Бабеша-Негрі; 2. Виявлення специфічного антигену в мазках-відбитках – РІФ

Досліджуваний матеріал: слина, мозкова тканина загиблих тварин та людей

Робота № 5. Основні методи індикації та ідентифікації вірусу сказу

А) Визначити наявність вірусу сказу у уражених нервових клітинах загиблого хворого на наявність цитоплазматичних включень.

Б) Накреслити схему постановки прямої РІФ, що використовується для ідентифікації вірусу сказу в досліджуваному матеріалі.

Підписвикладача_________________________________________________________

Самостійна робота студента у позаурочний час:

1. Класифікувати запропоновані антимікробні препарати відповідно до їх призначення (профілактичні, діагностичні, лікувальні).

Вакцина «Енцепур»

Імуноглобулін проти кліщового енцефаліту

Антирабічний імуноглобулін

Вакцина антирабічна культуральна інактивована

Заповнити контрольні карти за запропонованими нозоформами:

КЛІЩОВИЙ ЕНЦЕФАЛІТ

Таксономія збудника:

Будова віріона __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенна структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивування та репродукція

_____________________________________________________________________________

Резистентність ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Епідеміологія

Патогенність длятварин ____________________________________________________________________

Патогенез та клініка

Основні фази патогенезу___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Імунітет___________________________________________________________________

Лабораторна діагностика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифічна профілактика (заходи) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфічна профілактика (препарати) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лікування (препарати) ___________________________________________________________

Сказ

Таксономія збудника:

Культивування та репродукція

_____________________________________________________________________________

2. Пояснітьепідеміологічнуланцюг сказу (резервуар у природі, шляхи передачі, вхідні ворота)

3. Опишіть патогенез сказу. Яка залежність між локалізацією укусу та тривалістю інкубаційного періоду?

4. Як протікає сказ? (Стадії, результат)

5. Принципи лабораторної діагностики на сказ (мети, методи).

Підпис викладача_________________________________________________________

СИТУАЦІЙНІ ЗАВДАННЯ

1. До травматологічного пункту звернулася жінка з приводу рваної рани правої кисті. Рана – результат укусу бездомного собаки. Вказати, які профілактичні заходи має провести лікар травматологічного пункту.

2. На фельдшерський пункт звернувся молодик із приводу рваної рани правої кисті. Рана була результатом важких укусів, нанесених власним мисливським собакою, який загинув через 5 днів. З мозку (аммонів ріг) загиблої собаки був приготовлений препарат, пофарбований Манном. Оцінити результати дослідження. Вказати які препарати можна використовувати для профілактики сказу у укушеного.

3. Серед працівників лісгоспу захворіло кілька людей. Захворювання супроводжувалося високою температурою, ураженням нервової системи у вигляді парезів та паралічів. Було поставлено діагноз вірусного кліщового енцефаліту. Для підтвердження діагнозу було досліджено сироватку крові хворого на РТГА. Врахувати результат, оформити протокол, зробити висновки.

Виділяється для обліку результатів дослідження планшет з РТГА для вивчення наявності антитіл у сироватці хворого на віруси кліщового та японського енцефалітів.

Діагностикум	Розведення сироватки хворого
1/20	1/40	1/80	1/160	1/320	До
З вірусу кліщового енцефаліту З вірусу японського енцефаліту	+ (Відсутність гемаглютинації) - (Наявність склеєних еритроцитів)	+ –	+ –	+ –	+ –	– _

Питання 1. Яка етіологія вірусного енцефаліту у обстеженого хворого? Чому? 2. Інгредієнти РТГА у цьому дослідженні?

Теоретична довідка

Лабораторна діагностика кліщового енцефаліту

Лабораторна діагностика кліщового енцефаліту проводиться у двох напрямках: 1) виділення вірусу та його ідентифікація; 2) серодіагностика. Вірусологічна діагностика передбачає накопичення вірусу в організмі білих мишей або курячому ембріоні з подальшою ідентифікацією вірусу. Для накопичення вірусу використовують культуру клітин фібробластів курячих ембріонів. У цих клітинах вірус накопичується, але клітини у процесі репродукції вірусу не руйнуються. У культурі клітин, що перевивається, нирок ембріона свині репродукція вірусу супроводжується деструкцією клітин. Тому спостерігається ЦПД (осередкова дрібнозерниста деструкція клітин).

Індикаціювірусу проводять на лабораторних тварин (білих мишах) за клінічними проявами хвороби, а в культурі клітин нирок ембріона свині (ПЕМ) з цитопатичної дії (ЦПД) та бляшкоутворення.

Ідентифікаціявірусів кліщового енцефаліту проводиться на підставі вивчення антигенної структури виділених вірусів (як антигенні маркери використовуються антитіла до різних антигенів вірусу).

Геном вірусу кліщового енцефаліту складається з однонитчастої, лінійної, "плюс-ниткової" РНК. Антигенна структура вірусу представлена одним загальним NP-антигеном, який виявляється у РСК. У ліпопротеїновій оболонці вірусу міститься 3антигену: E1, E2 та Е3. Поверхневі антигени вірусу визначають його видову специфічність. E1 - гемагглютинуючий антиген, антигени Е2 і Е3 беруть участь у проникненні вірусу в сприйнятливу клітину і виявляються в РН. Антигени Е2 і Е3 мають імуногенну активність і забезпечують формування в організмі клітинного і гуморального (утворюються віруснейтралізуючі антитіла) імунітету.

Ідентифікація вірусів кліщового енцефаліту проводиться на підставі постановки серологічних реакцій: РЗК, РТГА, в РН на лабораторних тваринах або в культурі клітин, в нРІФ та РП у гелі.

Серодіагностика.Антитіла в крові хворого виявляють у РСК, РТГА та РН. За відсутності позитивного результату реакції проводять додаткове дослідження сироватки, взятої через 2-3 місяці від початку захворювання. Одночасно визначають різні класи імуноглобулінів для діагностики гострих та хронічних форм захворювань. Наявність IgM свідчить про гостру інфекцію, IgG та IgA – про хронічний перебіг захворювання після перенесеної інфекції. Комплементзв'язуючі антитіла в крові перехворіли зберігаються протягом 4 місяців, антигемагглютинуючі - до 3 років, а віруснейтралізуючі - до 10 років.