Оріальні властивості бактерій
Методи фарбування. Забарвлення мазка роблять простими чи складними методами. Прості заключаються у фарбуванні препарату одним барвником; складні методи (за Грамом, Цилем — Нільсеном та ін.) включають послідовне використання кількох барвників і мають диференційно-діагностичне значення. Ставлення мікроорганізмів до барвників розцінюють як тинкторіальні властивості. Існують спеціальні методи фарбування, які використовують для виявлення джгутиків, клітинної стінки, нуклеоїду та різних цитоплазматичних включень.
При простих методах мазок забарвлюють будь-яким одним барвником, використовуючи барвники анілінового ряду (основні або кислі). Якщо барвник іон (хромофор) - катіон, то барвник має основні властивості, якщо хромофор - аніон, то барвник має кислі властивості. Кислі барвники – еритрозин, кислий фуксин, еозин. Основні барвники - генціановий фіолетовий, кристалічний фіолетовий, метиленовий синій, основний фуксин. Переважно для фарбування мікроорганізмів використовують основні барвники, які інтенсивніше зв'язуються кислими компонентами клітини. З сухих барвників, що продаються у вигляді порошків, готують насичені спиртові розчини, а з них водно-спиртові, які служать для фарбування мікробних клітин. Мікроорганізми фарбують, наливаючи барвник на поверхню мазка на певний час. Забарвлення основним фуксином ведуть протягом 2 хв, метиленовим синім - 5-7 хв. Потім мазок промивають водою доти, поки струмені води, що стікають, не стануть безбарвними, висушують обережним промоканням фільтрувальним папером і мікроскопують в імерсійній системі. Якщо мазок правильно забарвлений і промитий, то поле зору абсолютно прозоре, а клітини інтенсивнопофарбовані.
Складні методизабарвлення застосовують для вивчення структури клітини та диференціації мікроорганізмів. Забарвлені мазки мікроскопують в імерсійній системі. Послідовно нанести на препарат певні барвники, що розрізняються за хімічним складом і кольором, протрави, спирти, кислоту та ін.
Існують кілька основних забарвлень: за Грамом (генціан віолет на 2 хвилини, не промиваючи водою р-р Люголя на 1 хв, промиваємо водою, наносимо спирт на 20-30сек, і фуксин на 2 хв фіолет +, червоний-), по Цилю- Нільсону (кислотостійкі забарвлення в червоний колір, кислоточутливі в синій), по Нейсснеру (зерна волютину в синій, цитоплазма в жовтий), Бурі-Гінсу (капсула у вигляді блого обідка на чорно-коричневому фоні), по Романовському - Гімзе (цитоплазма ядра-червоно-фіолет), по Ожешко (спори-червоні, тіло-синє).
2.Реакція аглютинації. Компоненти, механізм, методи постановки. Реакція аглютинації- проста по постановці реакція, при якій відбувається зв'язування антитілами корпускулярних антигенів (бактерій, еритроцитів або інших клітин, нерозчинних частинок з адсорбованими на них антигенами, а також макромолекулярних агрегатів). Вона протікає за наявності електролітів, наприклад, при додаванні ізотонічного розчину натрію хлориду.
Застосовуютьсярізні варіанти реакції аглютинації: розгорнута, орієнтовна, непряма та ін. Реакція аглютинації проявляється утворенням пластівців або осаду (клітини, «склеєні» антитілами, що мають два або більше антигензв'язуючих центри — рис. 13.1). РА використовують для:
1)визначення антитілу сироватці крові хворих, наприклад, при бруцельозі (реакції Райта, Хеддельсона), черевному тифі та паратифах (реакція Відаля) та інших інфекційних хворобах;
2визначення збудника, виділеного від хворого;
3)визначення груп кровіз використанням моноклональних антитіл проти алло-антигенів еритроцитів.
Для визначення у хворого антитілставлятьрозгорнуту реакцію аглютинації:до розведень сироватки крові хворого додають діагностикум (суспіль убитих мікробів,) і через кілька годин інкубації при 37 ˚С відзначають найбільше розведення сироватки (титр сироватки), у якому відбулася аглютинація, т. е. утворився осад.Характер і швидкість аглютинаціїзалежать від виду антигену та антитіл. Прикладом є особливості взаємодії діагностикумів (О та H-антигенів) зі специфічними антитілами. Реакція аглютинації з О-діагностикумом (бактерії, вбиті нагріванням, що зберегли термостабільний О-антиген) відбувається у вигляді дрібнозернистої аглютинації. Реакція аглютинації з Н-діагностикумом (бактерії, убиті формаліном, що зберегли термолабільний джгутиковий Н-антиген) - великобавовняна і протікає швидше.
Якщо необхідно визначити збудник, виділений від хворого, ставлять орієнтовну реакцію аглютинації, застосовуючи діагностичні антитіла (аглютинуючу сироватку), тобто проводять серотипування збудника. Орієнтовну реакцію проводять на предметному склі. До краплі діагностичної аглютинуючої сироватки у розведенні 1:10 або 1:20 додають чисту культуру збудника, виділеного від хворого. Поруч ставлять контроль: замість сироватки наносять краплю розчину хлориду натрію. При появі в краплі з сироваткою і мікробами пластівеподібного осаду ставлять розгорнуту реакцію аглютинації в пробірках з розведеннями аглютинуючої сироватки, що збільшуються, до яких додають по 2-3 краплі суспензії збудника. Аглютинацію враховуютьза кількістю осаду та ступенем просвітлення рідини. Реакцію вважають позитивною, якщо аглютинація відзначається у розведенні, близькому до титру діагностичної сироватки. Одночасно враховують контролі: сироватка, розведена ізотонічним розчином натрію хлориду, має бути прозорою, завись мікробів у тому ж розчині — рівномірно каламутною, без осаду. Різні споріднені бактерії можуть аглютинуватися однією і тією ж діагностичною аглютинуючою сироваткою, що ускладнює їх ідентифікацію. Тому користуються адсорбованими аглютинуючими сироватками, з яких видалені перехресно реагують антитіла шляхом адсорбції їх родинними бактеріями. У таких сироватках зберігаються антитіла, специфічні лише до цієї бактерії.
3.Збудник дифтерії. Таксономія та характеристика. Умовно-патогенні корінебактерії. Мікробіологічна діагностика Виявлення антитоксичного імунітету. Специфічна профілактика та лікування.Дифтерія – інфекційна хвороба, що викликається Corynebacterium diphtheriae, що характеризується фібринозним запаленням у зіві, гортані, трахеї, рідше в інших органах та явищами інтоксикації. Збудник дифтерії було відкрито 1883.1884 гг. Т. Клебсом та Ф. Леффлером.Таксономія.Corynebacterium diphtheriae відноситься до відділу Firmicutes, роду Corynebacterium.Морфологія та тинкторіальні властивості.Збудник дифтерії характеризується поліморфізмом - поряд з найбільш поширеними тонкими, злегка вигнутими паличками довжиною 1-5 мкм зустрічаються коккоподібні і розгалужені форми. Розташовуються бактерії нерідко під кутом одна до одної. Вони не утворюють суперечки, не мають джгутиків, у багатьох штамів виявляють мікрокапсулу. Характерною особливістю С. diphtheriae є наявність на кінцях палички зерен волютину, щообумовлює нерівномірне фарбування клітин аніліновими барвниками. Позитивний.
Культивування.С. diphtheriae - факультативний анаероб, оптимальна температура для зростання 37ºС, рН середовища - 7,6. Зростає на спеціальних живильних середовищах (зокрема, на елективному середовищі – згорнутій сироватці); на середовищі Клауберга, що містить кров і телурит калію, утворює колонії трьох типів: великі сірі з нерівними краями, радіальною смугастістю, що нагадують маргаритки; дрібні чорні, опуклі з рівними краями; колонії, схожі на колонії обох типів. Залежно від культуральних та ферментативних властивостей розрізняють 3 біологічні варіанти С. diphtheriae: gravis, mitis та intermedius.Ферментативна активність.Біохімічна активність збудника дифтерії досить висока. Поряд з іншими ферментами він має цистиназу, яка відсутня в інших корі небактерій. Біовар gravis ферментує крохмаль та глікоген на відміну від біовара mitis.Антигенна структура.На підставі будови О- і К-антигенів розрізняють 11 сероварів збудника дифтерії.Фактори патогенності.Основним фактором патогенності є екзотоксин, що вражає м'яз серця, надниркові залози, нирки, нервові ганглії. Здатність виробляти токсин пов'язана з наявністю в клітині профагу, що несе ген tox+, відповідальний за утворення токсину V, M. (розділ 3.7). Крім того, С. diphtheriae продукує ферменти агресії - гіалуронідазу, нейрамінідазу, корд-фактор.
Резистентність.Дифтерійна паличка стійка до висушування, дії низьких температур. Може зберігатись на дитячих іграшках до 15 днів, у воді – 6-20 днів.Сприйнятливість тварин.Моделі для культивування С. di phtheriae немає, проте до токсину чутливі морські свинки, кролики та іншітварини.Умовно-патогенні коринебактерії.До роду Corynebacterium, крім збудника дифтерії, належать інші види, здатні за певних умов викликати гнійно-запальні захворювання - C.pseudodiphtheriticum (hofTmanii), С. xerosis і т. д. Ці бактерії мешкають там же, де й збудники дифтерії, - у зіві, на кон'юнктиві, шкірі.Епідеміологія.Джерело інфекції - хворі люди та носії. Основний шлях передачі інфекції – повітряно-краплинний, але можливий і контактно-побутовий – через білизну, посуд, іграшки. Сприйнятливість до дифтерії висока, найбільш чутливі до збудника діти, проте останніми роками спостерігається «подорослішання» хвороби. Захворювання найчастіше зустрічається восени.Патогенез.Вхідні ворота інфекції - слизові оболонки.
..».а поживних шляхів і т. д. На місці вхідних воріт спостерігається фібринозне запалення, утворюється характерна дифтерична плівка, яка важко відокремлюється від тканин, що підлягають. Екзотоксин, що виділяється бактеріями, потрапляє у кров, у результаті розвивається токсинемія. Токсин уражає міокард, нирки, надниркові залози, нервову систему.Клінічна картина.Існують різноманітні по локалізації форми дифтерії: дифтерія зіва, носа, гортані, очей, зовнішніх статевих органів, шкіри, ран та ін. У 85-90% випадків спостерігається дифтерія зіва. Інкубаційний період – від 2 до 10 днів. Захворювання починається з підвищення температури тіла, болю при ковтанні, плівки на мигдаликах, збільшення лімфатичних вузлів. У дорослих дифтерія може протікати як лакунарну ангіну. У дітей раннього віку нерідко одночасно з зіванням і носом у патологічний процес залучається гортань, і в результаті набряку гортані розвивається дифтерійний круп, який може призвести до асфіксії та смерті. Інші важкіускладнення, які також можуть стати причиною смерті, - токсичний міокардит, гостра недостатність гіпофізарно-надниркової системи, параліч дихальних м'язів.Імунітет.Після перенесеного захворювання виробляється стійкий імунітет. Досить тривалим є поствакцинальний імунітет (до 3-5 років). Виявляють наявність антитоксичних антитіл за допомогою РПГА.Мікробіологічна діагностика.Для бактеріологічної діагностики дифтерії беруть матеріал із зіва і носа. Для встановлення попереднього діагнозу можливе застосування
бактеріоскопічного методу Основний метод – бактеріологічний. У процесі ідентифікації виділеної чистої культури С. diphtheriae диференціюють від інших корінебактерій. Внутрішньовидова ідентифікація полягає у визначенні біовара, що має лише епідемічне значення.Лікування.Основний метод лікування - негайне введення антитоксичної протидифтерійної сироватки. Проводять також антибіотикотерапію.Профілактика.Специфічна профілактика полягає у введенні грудним дітям, починаючи з тримісячного віку (до цього часу у них зберігається плацентарний імунітет), дифтерійного анатоксину, що входить до складу препаратів АКДС (адсорбованої коклюшно-дифтерійно-АДСибня) (Адсорбованого дифтерійно-правцевого анатоксину). Ревакцинацію проводять за допомогою АДС-анатоксину не лише у дитячому віці, а й дорослим людям кожні 10 років. При контакті з хворою людиною людям, які не мають напруженого антитоксичного імунітету, вводять дифтерійний анатоксин (АТ). Крім даних препаратів, випускають АКДС-М, АДС-М, АД-М – анатоксини, що містять малу кількість антигену та використовуються для імунізації людей зі схильністю до алергії, проте ці препарати єменш імуногенними.