Правила роботи в мікробіологічній лабораторії
Лабораторна робота №1
Правила роботи у мікробіологічній лабораторії.
Методи вивчення морфології мікроорганізмів та будови клітин
1. Вивчити правила роботи у мікробіологічній лабораторії та методи вивчення морфології мікроорганізмів.
2. Ознайомитись із пристроєм мікроскопа. Встановити світло по Келеру. Вибрати об'єктив, промікроскопувати та замалювати отримані зображення фіксованих препаратів:
а) Евглена Зелена;
б) Цвіль Мукор;
в) бактеріальна клітина.
1. Правила роботи в мікробіологічній лабораторії та методи вивчення морфології мікроорганізмів
1.1 Правила роботи у мікробіологічній лабораторії
Робота в мікробіологічній лабораторії потребує суворого дотримання спеціальних правил, що визначається двома основними положеннями.
Перше- в мікробіологічній практиці використовують, головним чином, чисті культури мікроорганізмів, тобто популяції мікроорганізмів одного виду, які часто є потомством однієї клітини.
Оскільки в повітрі, на поверхні навколишніх предметів, на одязі, руках, волоссі завжди є велика кількість різноманітної мікрофлори, то для забезпечення стерильності досліджень та уникнення забруднення культур робота повинна проводитися з дотриманням правил асептики.
Друге- при дослідженнях з не ідентифікованими мікроорганізмами, при їх виділенні з об'єктів навколишнього середовища та техногенних потоків, можуть бути виділені патогенні та умовно-патогенні мікроорганізми.
Крім того, клітини як сапрофітних, так і патогенних мікроорганізмів можуть бути алергенами.для певних індивідуумів. Таким чином, для отримання достовірних результатів досліджень, для забезпечення особистої безпеки та безпеки оточуючих необхідне дотримання певних правил.
Підготовка приміщення для проведення мікробіологічних робіт включає мокре прибирання та ретельну вентиляцію з подальшим опроміненням ультрафіолетовими променями бактерицидних ламп. Поверхню столу, де безпосередньо проводиться робота з культурами мікроорганізмів, слід дезінфікувати шляхом протирання 3% розчином хлораміну або 70% розчином ізопропілового або етилового спирту.
Підготовку лабораторії до занять проводить лаборант; студенти, виконуючи завдання, повинні дотримуватись наступних правил.
1. Кожен студент у мікробіологічній лабораторії працює на постійному місці, виконуючи завдання індивідуально.
2. На робочому місці не повинно бути сторонніх предметів (у тому числі портфелів та сумок).
3. Студент повинен працювати тільки в чистих халатах, волосся має бути підібране, не падати на плечі.
4. Під час роботи з культурами мікроорганізмів необхідно дотримуватися всіх правил мікробіологічної техніки. На пробірках, колбах, чашках Петрі, матрацах має бути зроблений напис, що містить родові та видові назви культури, дату засіву, прізвище студента та номер групи.
5. Всі предмети, використані при роботі з живими культурами, повинні бути знезаражені або випалюванням в полум'ї пальника (петлі, голки), або занурені в дезінфікуючий розчин (предметне та покривне скло, піпетки, шпателі).
6. Усі засіяні пробірки, чашки збожеволіють у термостат або здаються лаборанту. Відпрацьований матеріал (пробірки, чашки Петрі) також міститься у певні ємності за вказівкою лаборанта для подальшого знезараження.
7. У лабораторії забороняється куріння, прийом їжі, зайве ходіння лабораторією.
8. Наприкінці заняття студент повинен упорядкувати робоче місце, вимити руки. Необхідно мати індивідуальний рушник, серветки для витирання рук.
1.2 Методи вивчення морфології мікроорганізмів
При вивченні морфології мікробних клітин використовують різні види мікроскопії, оскільки око людини влаштоване так, що не може чітко розглянути дрібні предмети.
Неозброєним оком розглядаються предмети найчастіше з відстані так званого кращого бачення
250 мм. При нормальній гостроті зору очей може цій відстані розрізняти деталі розміром щонайменше 0,15 мм. Розміри мікробних клітин може бути менше 0,1 мм. Для спостереження дрібніших деталей необхідно використання спеціальних засобів. Такими засобами є лупа та мікроскоп.
2. Пристрій мікроскопа
2.1 Мікроскопія у світлому полі. Пристрій мікроскопа
Мікроскопія в світлому полі здійснюється в світлі, що проходить. За виконання завдань справжнього практикуму кожен студент працює з мікроскопом (рис. 1).
Мал. 1. Мікроскоп
У мікроскопі розрізняють механічну, оптичну та освітлювальну частини.
Механічна частина включає штатив, предметний столик, тубус та систему гвинтів для пересування елементів мікроскопа. Штатив складається з основи та нерухомо пригвинченого тубусоутримувача. У верхній частині штатива розташовані тубус 2, куди вставляється окуляр 3 і револьверний пристрій 4, що складається з двох пластин. Нижня пластина обертається і має гнізда для 5 об'єктивів, верхня закріплена нерухомо.
Предметний столик 6 пересувається у вертикальному напрямку за допомогою макро- мікрогвинта 7.Слід зазначити, що користуватися цим гвинтом треба дуже обережно, оскільки у мікроскопі макро- та мікрофокусування поєднані. Діапазон переміщення грубого наведення становить 20мм, що відповідає 4,5 обороту макро-мікрогвинта. Механізм точного наведення можна привести в дію у будь-якому положенні грубого наведення за допомогою зміни напрямку обертання того ж гвинта.
На предметному столику є об'єктоводитель для предметного скла 8. За допомогою коаксіальних кнопок, що висять, розташованих зліва під предметним столиком, здійснюється переміщення об'єктоводія в поздовжньому і поперечному напрямках. Поруч із макро-мікровинтом розташований гвинт конденсора 9, що забезпечує його розташування на потрібній висоті.
У мікроскопі є об'єктиви, що дають збільшення у 3,2, 10 та 40 разів, призначені для роботи з сухими системами, та об'єктив з чорною смугою для імерсійної системи, що дає збільшення у 100 разів.
При роботі з іммерсійним об'єктивом, після встановлення світла, при малому збільшенні вибирають ділянку на препараті, на обране місце наносять краплю кедрової олії та обережно занурюють у неї фронтальну лінзу об'єктива 100х. Після закінчення роботи залишки олії з цієї лінзи видаляють, ретельно протираючи її м'якою тканиною.
Освітлювальний апарат знаходиться під предметним столиком та включає (див. рис. 1):
- Джерело світла у вигляді міньйону. Дана лампочка вмонтована всередині підставки, її яскравість можна регулювати за допомогою реостата 10, розташованого на задній панелі, там розташований тумблер включення мікроскопа в мережу;
- конденсор Аббе; апертуру конденсора можна регулювати, відкриваючи та закриваючи діафрагму конденсора за допомогою важеля 12. Конденсор Аббе складається з двох лінз, укладених у металеву оправу та призначених длязбирання променів світла, що йдуть від дзеркала;
- дзеркало, що відображає, яке можна побачити у віконце 13. Кількість променів, що потрапляє на дзеркало, можна регулювати за допомогою діафрагми світлового поля. Важель діафрагми позначений позицією 14.
2.2 Встановлення світла по Келеру
Найкращі результати під час роботи з мікроскопом можна отримати лише за умови правильного освітлення об'єкта. Найкращий спосіб освітлення заснований на системі Келера. Остання включає наступні основні прийоми: а) отримання різкого зображення джерела світла (спіралі лампи на діафрагмі конденсора; б) отримання різкого зображення ірисової діафрагми освітлювача у площині препарату.
Порядок встановлення світла по Келеру:
1. Включити до мережі.
2. Увімкніть тумблер лампи.
3. Підняти конденсор вгору до упору гвинтом конденсора.
4. Відвести лампу широких полів та нейтральний світлофільтр.
5. Збільшити яскравість лампи реостатом 10.
6. Закрити апертурну діафрагму конденсора 12.
7. Відкрити діафрагму світлового поля до упору (настановний важіль 14).
8. Перевірити симетричність зображення світлової плями на нижній стороні апертурної діафрагми конденсора. поправити орієнтацію).
9. Поставити об'єктив 10х.
10. Зменшити яскравість лампи реостатом 10.
11. Встановити препарат.
12. Відкрити апертурну діафрагму конденсора на 2/3 (важіль 12).
13. Сфокусувати мікрооб'єкт за допомогою механізму наведення (макро-мікровінт 7). Для цьогорозташувати об'єктив з відривом 1 див препарату і, дивлячись в окуляр, повільно опустити препаратний столик, знаходячи зображення.
14. Закрити польову та апертурну діафрагму. У полі зору видно різке зображення країв діафрагми світлового поля.
15. Сфокусуйте зображення світлового поля за допомогою конденсора.
16. Відцентрувати світлову пляму за допомогою гвинтів.
17. Відкрити діафрагму світлового поля, щоб краї світлої плями трохи заходили на поле зору (на 2/3 діаметра).
2.3 Зображення фіксованих препаратів
В результаті дослідження методу вивчення морфології та будови клітин методом мікроскопії було досліджено 3 фіксовані препарати.
1. Евглена Зелена
2. Цвіль Мукор
3. Бактеріальна клітина
Отримано такі зображення:
Висновки: У ході даної лабораторної роботи було вивчено всі правила роботи в мікробіологічній лабораторії та методи вивчення морфології мікроорганізмів. Ознайомились із пристроєм мікроскопа. Навчилися встановлювати світло за Келером, вибирати об'єктив для кожного препарату та мікроскопувати фіксовані препарати.