Препарат інтерферону альфа у формі стабільного водного розчину для ін’єкцій

Власники патенту UA 2255729:

Винахід відноситься до галузі медицини, фармації та стосується препаратів, призначених для профілактики та лікування різних вірусних, проліферативних захворювань та розладів імунітету. Раствор для инъекций содержит высокоочищенный альфа-интерферон, инертный полимерный наполнитель, представляющий собой декстран или реополиглюкин с молекулярной массой декстрана 30-50 кДа, неионогенное поверхностно-активное вещество - твин 80, этилендиаминтетрауксусную кислоту или ее динатриевую соль, буферную систему, включающую натрия ацетат для забезпечення рН розчину 4,5-5,5, натрію хлорид як регулятор осмотичного тиску і воду для ін'єкцій при певному співвідношенні компонентів. Винахід забезпечує високу активність та стабільність препарату при тривалому терміні зберігання (30 місяців), а також високі якісні показники препарату за відсутності побічних ефектів. 1 з.п. ф-ли, 5 табл.

Інтерферони є білковими молекулами з молекулярною масою від 15000 до 21000 дальтон, які продукуються і секретуються клітинами у відповідь на вірусну інфекцію або інші збудники. Виділяють три основні групи інтерферонів: альфа, бета та гама. Ці три групи самі також є однорідними і можуть містити кілька різних молекулярних різновидів інтерферону. Виділено понад 14 генетичних різновидів інтерферону альфа.

В даний час широко використовують препарати високоочищеного інтерферону альфа, переважно альфа-2b, при виробництві якого використовуються рекомбінантні технології.ДНК. Рекомбінантний інтерферон альфа-2b є водорозчинним білок з молекулярною масою близько 19 300 дальтон. Його виробляють з клону Escherichia coli, що містить плазмідний гібрид, отриманий методами генної інженерії і включає ген інтерферону альфа-2b з лейкоцитів людини.

Препарати інтерферону альфа мають антипроліферативну дію як щодо культури клітин людини і тварин, так і щодо ксенотрансплантатів пухлин людини та тварин. Показано їх значну імуномодулюючу активність. Крім того, інтерферон альфа також пригнічує реплікацію вірусів in vitro та in vivo. Хоча точний механізм противірусної дії невідомий, встановлено, що інтерферон порушує метаболізм клітини, до якої проник вірус. Це призводить до придушення реплікації вірусу, а у випадках, коли реплікація все ж таки відбувається, віріони з пошкодженим геномом не здатні залишити клітину.

Препарати інтерферону мають важливе практичне значення в медичній практиці, їх застосовують для лікування онкологічних захворювань, вірусних захворювань, у тому числі таких, як хронічний гепатит В і С, які нині мають серйозну проблему. Тому розширення асортименту препаратів указної групи та розробка нових удосконалених препаратів на основі інтерферону є актуальним завданням галузі фармації.

p align="justify"> При розробці препаратів на основі інтерферону основні проблеми, з якими стикаються розробники, пов'язані з біологічною нестабільністю інтерферонів, що мають пептидну структуру.

При виготовленні та зберіганні препаратів на основі інтерферонів можлива зміна їх властивостей, що протікає з різною швидкістю та ступенем прояву. Такі зміни впливають термін придатності (зберігання).

Яквідомо, стабільність лікарських препаратів залежить багатьох чинників: температури, рН, умов зберігання, освітленості, складу навколишньої атмосфери, способу приготування, допоміжних речовин, виду лікарської форми, особливо її агрегатного стану, упаковки тощо.

Як правило, з метою стабілізації прийнято використовувати як хімічні методи – додавання стабілізаторів, антиоксидантів та консервантів, так і фізичні – захист від впливу факторів зовнішнього середовища, застосування високоочищених препаратів та допоміжних речовин, а також комбінації зазначених методів.

У кожному конкретному випадку використання стабілізаторів вимагає ретельного вивчення при введенні до їх складу, особливо у разі ін'єкційних розчинів.

Під час створення лікарських форм інтерферону як водного розчину робилися спроби використання різних стабілізаторів, зокрема альбуміну, полімерів, поверхнево активних речовин, буферних розчинів, консервантів, поліолів і вуглеводів.

Як видно з джерел, що характеризують рівень техніки, останнім часом у світі активно розробляються та патентуються фармацевтичні композиції на основі інтерферону, зокрема інтерферону альфа-2. Однак їм властива низка недоліків.

Завданням винаходу є одержання препарату альфа інтерферону у формі водного розчину для ін'єкцій, що має високу активність та стабільність при зберіганні та не викликає побічних ефектів.

Вказана задача вирішується тим, що пропонується нова композиція складу препарату на основі високоочищеного альфа-інтерферону, що містить інертний полімерний наповнювач, що являє собою декстран або реополіглюкін з молекулярною масою декстрану 30-50 кД, неіоногенна поверхнево-активна речовина - твін 80етилендіамінтетраоцтову кислоту або її динатрієву сіль, буферну систему, що включає натрію ацетат для забезпечення рН розчину 4,5-5,5, натрію хлорид як регулятор осмотичного тиску і воду для ін'єкцій при наступному співвідношенні компонетів в мкг/мл:

Інтерферон альфа (1-15)× 10 6 ME

Натрію ацетат 1230-1640

ЕДТА або її динатрієва сіль 60-80

Натрію хлорид 5800-7500

Декстран або реополіглюкін

(у перерахунку на дестран) 40000-100000

Вода для ін'єкцій до 1 мл

Як інтерферон альфа використовують високоочищені препарати, переважно інтерферон альфа-2 або ще більш переважно альфа-2b людський рекомбінантний інтерферон.

Як буфер пропонується використовувати ацетатний буфер, що включає натрію ацетат. Використання буферних розчинів для створення певного рН, як правило, що має істотне значення для стабілізації розчинів, добре відоме у фармації. Однак, як показали біофармацевтичні дослідження, їх застосування обмежене, оскільки багато з них реагують з лікарськими речовинами. Даним винаходом було виявлено, що створення оптимального значення рН розчину за допомогою ацетату натрію значно покращує стабільність препаратів інтерферону і не знижує активності препарату.

Твін 80 відноситься до ПАР неіоногенним і гальмує дію на процеси гідролізу, впливаючи на кінетику реакцій в розчині.

ЕДТА та його натрієві солі відносяться до хелаторів, що побічно надають антиоксидантну дію. Даний компонент пов'язує небажані домішки зі скла, технічного обладнання та допоміжних речовин, що використовуються у виробництві, запобігає окислювальним реакціям. Крім того, має емульгувальну дію всистемі, що також підвищує стабільність складу.

Як один із стабілізаторів включений також інертний полімерний наповнювач, що являє собою декстран або реополіглюкін. Серед високомолекулярних полімерів уповільнюється окислення. Введення декстрану також має важливе значення для покращення стану при інтоксикаціях, що супроводжують вірусні захворювання.

Пропонований склад допоміжних компонентів дозволив досягти значного підвищення ефективності стабілізації, обумовленого використанням нового поєднання різних механізму своєї дії стабілізаторів, взятих при певному кількісному поєднанні.

Отриманий препарат нетоксичний та апірогенний при випробуваннях на гостру та хронічну токсичність та пірогенність у мишей та кроликів, має контрольовану антивірусну активність при випробуваннях на культурах клітин людини. Не чинить побічних ефектів.

Можливість здійснення винаходу може бути проілюстрована наступними нижче представленими прикладами:

Приклад 1. Склад препарату однією дозу:

Інтерферон альфа 3× 10 6 ME

Натрію ацетат 1640

ЕДТА динатрієва сіль 70

Натрію хлорид 5800

Декстран 40 50000

Вода для ін'єкцій до 1 мл

Для приготування зазначеного розчину змішують 200 мл 1М розчину ацетату натрію, 100 мл 1 М натрію хлориду і 10 мл 0.02 м розчину етилендіамінтетраоцтової кислоти динатрієвої солі, приготованих на воді для ін'єкцій. Розчин доводять до 400 мл водою ін'єкцій. До розчину додають 10 мл 1% розчину Tween 80 і 500 мл 10% розчину декстрану 40. При необхідності доводять значення рН до 4,5-%% 0,1 М оцтовою кислотою. Розчин охолоджують до 4 град.С, після чого до нього додають розчин субстанції інтерферону альфа-2b доконцентрації 3,6 млн. МО/мл в л кінцевого розчину. Отриманий розчин доводять до 1 л водою для ін'єкцій, піддають стерилізації фільтрації на мембранному фільтрі 0,22 мкм і розливають в ампули по 1 мл або флакони по 2 мл.

Отриманий розчин стабільний при зберіганні при 2-8 ° С протягом 30 місяців.

Вивчення стабільності методом "прискореного старіння"

Зразки розчинів запропонованого препарату на основі інтерферону альфа-2b людського рекомбінантного закладали на зберігання при температурі 37° С, визначали експериментальний термін зберігання, при якому зберігалися показники якості, що пред'являються згідно з нормативними документами (НД) та розраховували еквівалентний термін зберігання у звичайних умовах:

Розраховують термін за такою формулою:

Се - експериментальний термін зберігання, на добу

С - термін зберігання при температурі, зазначеній у ФС, на добу

А - температурний коефіцієнт швидкості хімічної реакції, прийнятий А=2

txp - температура зберігання методом "прискореного зберігання", °С

tфс - температура зберігання з НД, °С