Сказ (додаток до ст.
. тисячі років йде ця тиха невидима війна людини та вірусів.
Сказ (додаток до ст. "Сказ", БМЕ, вид. II, т. 3).
Сказ (додаток до ст. "Сказ", БМЕ, вид. II, т. 3).
Збудник, лабораторна діагностика, специфічна профілактика. Найважливішим досягненням у вивченні сказу за останні роки слід вважати вирощування його збудника в культурі тканини (in vitro), на відміну від методу культивування, що застосовувався досі в організмі тварин (in vivo). Нові дані з морфології та фізіології вірусу сказу, взаємодії вірусу з сприйнятливими клітинами, титрування антигену та антитіл in vitro і, нарешті, антирабічної вакцині, вільної від баластних речовин, пов'язані гол. обр. із впровадженням у практику лабораторних досліджень методики культури тканини.
Вирощування вірусу сказу у культурі тканини виявилося важчим завданням, ніж вирощування збудників інших нейровірусних захворювань. У наст. Час можна говорити про розмноження в культурі тканини лише окремих попередньо адаптованих штамів вуличного та фіксованого вірусів сказу. При цьому штами вуличного вірусу можуть бути адаптовані до культури тканини трохи легше та швидше, ніж штами фіксованого вірусу. Прямими серійними пасажами (зараження моношару культуральним вірусом з попереднього пасажу) штами вуличного вірусу адаптовані і успішно вирощуються в культурі первинних трипсинізованих клітин нирки сирійського хом'яка, нирки новонароджених собак, слинних залоз собак, в культурі ліній М13 , епендіоми мишей (ЄрО), ендотелію кролика
Велику увагу було приділено адаптації штамівфіксованого вірусу сказу до культури тканини. Проте спроби прямої адаптації (зараження моношару культуральним вірусом попереднього пасажу) виявилися безуспішними. Завдання було вирішено застосуванням пасажів, що чергуються (мозок миші - культура тканини - мозок миші і т. д.) і суміші клітин (перевивка інфікованих клітин у суміші з нормальними трипсинізованими клітинами). Штами фіксованого вірусу сказу (Paris, Pitman-Moore, Sad, CVS) успішно адаптовані і тепер добре розмножуються в первинно трипсинізованих клітинних культурах нирки сирійського хом'яка, нирки новонароджених собак, лімф, вузлів собак, слинних залоз новонароджених собак, в культурі нирка ембріона сирійського хом'яка, ретикулоендотеліома кролика, епендіома мишей, легені людини (диплоїдні клітини, штам WI-38). Штами фіксованого і вуличного вірусів сказу, попередньо адаптовані до клітин нирки сирійського хом'яка, мають ширший спектр тканинної активності, вони інтенсивно розмножуються в культурі первинних клітин нирки ембріона вівці, свині, морської свинки і клітин, що перевиваються, нирки ембріона свині (ПЕС, ембріона людини (шкіра, м'язова та ниркова тканина: штами ЧЕ-1, ПЧЕ-1). Так зв. авіанізований штам фіксованого вірусу сказу Флюрі добре розмножується в культурі первинних клітин курячого ембріона та сирійського хом'яка.
Вірус сказу зазвичай викликає у культурі тканини інфекцію хронічного типу. Після ряду серійних пасажів або при перевивках вірусу методикою суміші клітин відтворено гостру інфекцію з цитопатогенним ефектом, що викликається як вуличним, так і фіксованим вірусом у культурі клітин сирійського хом'яка, епендіоми мишей, легень людини (штам WI-38). Через регулярну невоспроизводимость феноменцитопатогенної дії ще не отримав застосування для титрування вірусу та віруснейтралізуючих антитіл. Поки що залишаються безуспішними спроби відтворення феномену бляшко-освіти, гемаглютинації у культурі тканини, зараженої вірусом сказу.
У культурі тканини вірус сказу інтерферує з багатьма вірусами, які містять як РНК, і ДНК (вірус хвороби Ньюкасла, західного кінського енцефаломієліту, везикулярного стоматиту, помилкового сказу, осповакцини). Феномен інтерференції успішно використовується для титрування вірусу сказу та антитіл у культурі тканини. Механізм інтерферуючої дії вірусу сказу залишається невивченим.
У культурі нирки сирійського хом'яка, інфікованої вірусом сказу, виявлені цитоплазматичні включення, подібні з тільцями Бабеша - Негрі, від яких вони відрізняються гомогенною структурою і характерним світлим пояском, що відокремлює їх від цитоплазми. Ці включення забарвлюються кислими фарбами, містять антиген вірусу сказу, що виявляється методом флюоресціюючих антитіл (МФА). При електронно-мікроскопічному вивченні зрілі вірусні частинки (віріони) вірусу сказу в них не виявлені.
У зв'язку з вирощуванням вірусу сказу у культурі тканини виявилося можливим отримання електронномікроскопічних фотографій вірусу. Під електронним мікроскопом віріони вірусу сказу мають округлу форму або вигляд коротких паличок, що нагадують кулю, з одним прямокутним та іншим закругленим кінцем. Простежено, що на початку інфекції вірусні частинки у вигляді бутонів виявляються у внутрішньої оболонки цитоплазми, а потім у зовнішньої оболонки і відкидаються від неї у вільний екстрацелюлярний простір, подібно до міксовірусів. Зрілі вірусні частинки мають подвійну оболонку та внутрішній компонент спіральної структури. Зовнішняоболонка, подібно до міксовірусів, покрита дрібними виступами у вигляді бахроми. Виявлено також ниткоподібні утворення із сегментованою структурою. Діаметр овальних віріонів варіює від 80 до 120 мк, паличкоподібні віріони мають довжину 120-300 мк і ширину 60-100 мк, ниткоподібні утворення досягають довжини 1900 мк. Вважається, що у культурі тканини подовжені вірусні частки асоційовані найчастіше з вуличним вірусом сказу, а короткі віріони - з фіксованим вірусом. Дослідами із застосуванням антирабічного гамма-глобуліну, навантаженого феритином, доведено; що описані вище освіти є специфічними для вірусу сказу.
За морфологічними та біологічними властивостями вірус сказу багато в чому подібний до міксовірусів. Він містить РНК; 5-бромдезоксиуридин у культурі тканини не пригнічує розмноження вірусу сказу, але сильно гальмує розмноження вірусів герпесу, псевдобешенства, аденовірусів, що містять ДНК [Кіслінг, Різ (R. Kissling, D. Reese), 1963].
З нових методів швидкісної та економічної (in vitro) індикації вірусу сказу або антирабічних антитіл найціннішим є МФА. Для титрування антитіл використовується непрямий МФА, а прямий МФА успішно застосовується в лабораторній практиці для індикації та титрування вірусу сказу, що вирощується в культурі тканини. Прямий МФА має досить широке практичне застосування для прискореної діагностики сказу людини та тварин. Препарати-відбитки готують на предметних стеклах зі шматочків амонового рогу, кори великих півкуль і мозочка, що зберігалися на холоді без будь-яких консервуючих рідин. Далі препарати фіксують у холодному ацетоні при t° -20° протягом 4 год., просушують при кімнатній температурі і забарвлюють антирабічним гамма-глобуліном, кон'югованим флюоресцеїнізотиоціанатом(1 мг флюорохрому на 100 мг сироваткового білка) у вологій камері при t° 37° протягом 20 хв. Після дворазового промивання у буферному розчині препарати обполіскують дистильованою водою, просушують. Під люмінесцентним мікроскопом у препаратах, що містять антиген вірусу сказу, виявляються гранули, включення округлої, овальної, неправильної форми величиною від 0,5 до 20 мк або тяжі, нитки довжиною до 15-60 мк з характерним блискучим, яскравим зеленувато-жовтим. При високій концентрації імунологічно активного антигену все поле зору може бути усеяне утвореннями, що специфічно світяться.
Висока специфічність та чутливість МФА дозволяє отримувати відповідь за 4-6 годин. Однак у окремих випадках результат МФА виявлявся негативним, попри позитивні результати біопроби, і навпаки. Виявлення в досліджуваному препараті включень із характерним свіченням дозволяє поставити діагноз сказу. При негативній відповіді рекомендується поставити біопроб: інтрацеребральне зараження молодих або новонароджених білих мишей з подальшим дослідженням їх МФА. Біопроба на новонароджених білих мишах разом із МФА дозволяє поставити діагноз сказу за 5-6 днів.
Для прискореної діагностики сказу запропоновано реакцію дифузії в агаровому гелі по Оухтерлоню (О. Ouchterlony). Вона заснована на імунній преципітації при з'єднанні антигену з антитілами, що дифузують назустріч один одному через агаровий гель. У мозковій суспензії вірусу сказу виявлено дві фракції розчинного антигену, що утворюють дві лінії преципітації. Нормальна мозкова тканина з відповідною гомологічною антисироваткою також спричиняє утворення двох ліній преципітації.
З метою видалення антимозкових антитіл рекомендується виснаження нормальної сироваткимозковою суспензією або отримання імунної сироватки на яєчну культуру вірусу сказу Флюрі. Реакція преципітації в агаровом гелі досить чутлива лише за високому вмісті антигену в досліджуваному матеріалі [Лепін (P. Lepine), 1966]. Реакція потребує вдосконалення, щоб бути використаною у широкій практиці.
Вакцини, що готуються з мозку новонароджених щурів і мишей, пройшли деяке практичне випробування. У СРСР цю вакцину виготовляють із мозку новонароджених щурів (Московський науково-дослідний інститут вірусних препаратів) за тією ж методикою, що і фенолову вакцину типу Фермі (див. Антирабічні вакцини, т. 2). Препарат ліофілізується з желатино-цукророзним наповнювачем. У Чилі вакцину готують із мозку новонароджених мишей та інактивують ультрафіолетовими променями. У СРСР при застосуванні щурової вакцини зареєстровані як місцеві та загальні шкірно-судинні алергічні реакції, так і окремі випадки неврологічних ускладнень різної тяжкості. З'ясувалося, що вакцина із мозку новонароджених тварин не є безалергенним препаратом.
У стадії експериментальної розробки знаходяться вакцини, які готуються на культурі тканини. Відомі три типи культуральних антирабічних вакцин, що розробляються для лікувально-профілактичної імунізації людей: вакцина, що готується в культурі первинних клітин нирки сирійського хом'яка (штам CVS), інактивована формаліном (Кіслінг, Різ, 1963); вакцина, що готується у культурі диплоїдних клітин людини [штам Флюрі ХЕП; Віктор, Копровський (Т. Wiktor, Н. Koprowski), 1965], і вакцина, що готується на культурі первинних клітин нирки сірійського хом'яка, інактивована фенолом (вакцинний штам Sad) та ліофілізована з желатино-цукровим наповнювачем (М. А. С.). , 1965).Показано, що культуральна антирабічна вакцина може серійно виготовлятися у великих обсягах; у дослідах на лабораторних тварин вона має таку ж імуногенну та антигенну активність, як зразки стандартної мозкової вакцини. У зарубіжній літературі ще немає даних про випробування культуральної антирабічної вакцини в людини. В Інституті поліомієліту та вірусних енцефалітів АМН СРСР при випробуванні культуральної антирабічної вакцини у досвіді на добровольцях відзначено низьку реактогенність та високу антигенну активність препарату.