Способи зберігання та транспортування сперми
1.Короткострокове зберігання сперми при плюсових температурах
Середовища – молочно-жовтні суміші та синтетичні середовища.
ГЦЖ - глюкозо-цитарні жовткові - не більше 3-х діб зберігання для бугаїв, не більше 1 доби для баранів.
ЛХЦЖ – лактозо-хелато-цитарне жовткове середовище – не більше 2 діб
Розбавляють невеликими порціями, сперму бика розбавляють у 2-6 разів, кнура - до 10 разів, жеребця - 4-5, барана 2-4 рази. Потім розфасовують поліетиленові ампули, пробірки, флакони. Обгортають ватою чи синтепоном, поміщають у термос чи холодильник. Нині таке зберігання застосовують рідко.
Для зберігання насіння кнурів застосовують середовища з хелатоном: ГХУЖ - глюкозо-хелато-цитратно-жовткова або ГХУС - сульфатна. Зберігають трохи більше 3 діб, +2-5 ºС. Не повинно бути коливань температури. Насіння кнура розливають у вузькогорлі скляні колби на 2/3 об'єму, закривають папером і ватно-марлевою пробкою, зберігають у холодильнику, 2 рази на добу струшують. Транспортування - сперма розфасовується в ємності, що входять до складу інструменту, що осіменяє.
*Хелатон – кислота етилен-діамін-тетраоцтова
2.Тривале зберігання сперми.
У рідкому азоті –196 ºС. У гранулах (облицьованих, необлицьованих, або в соломинках – паєтах).
Кріоконсервування сперми бугаїв.
а). у вигляді необлицьованих гранул
Свіжоотриману сперму (еякулят) поступово розбавляють (2-5 хв) лактозо-гліцерин-жовтковим середовищем або глюкозо-гліцерин-жовтковим середовищем, співвідношення 1:2 або 1:6.
Через 30 хвилин розбавляють основним середовищем (сім'я: середа 1 до 19 або 1:49). Після 2-го розведення поміщають у холодильник +4-5 ºС на 3-4 години, де відбувається еквілібрація - гліцерин проникає всередину сперміїв. Колбу обертають теплоізоляційнимматеріалом. Після еквілібрації перевіряють активність сперміїв – д.б. щонайменше 8 балів.
Після цього заморожують на фторпластовій пластині, не допускаючи нагрівання. Активних сперматозоїдів у дозі для заморожування д.б. не менше 37,5 млн. Зазвичай закладають із концентрацією 50 млн. з активністю 8 балів.
Заморожують сперму на пластині з лунками 0,5 см і об'ємом 0,1-0,2 мл. Пластину опускають у посудину з бурхливим кипінням рідкого азоту, потім піднімають до краю судини і витирають із неї випаровування стерильними серветками. За допомогою приладу або поліетиленових крапельниць-шприців сперму закопують у лунки (0,15-0,2 мл). Пластину витримують у парах азоту 1-2 хв. З відривом 5-10 див від поверхні рідкого азоту. Сперма твердне, потім пластину поміщають у рідкий азот для кращого відділення гранул.
Гранули зсипають у пенал або марлевий мішечок чи склянку і поміщають у посудину Дьюара для зберігання.
Повторне розморожування та заморожування не допускається, т.к. це призводить до зниження якості.
Контроль на виживання. Перед закладкою на зберігання по 2 дози з кожного еякуляту розморожують. Оцінюють активність (не нижче 4 балів), кількість патологічних сперміїв, концентрацію, виживання, поміщають у термостат (38-40 ºС), періодично спостерігаючи активність щонайменше 5 годин. Усі спермії повинні зберігати прямолінійний поступальний рух протягом цього часу. За виживання судять про здатність сперми, що запліднює.
Після заморожування сперма проходить карантин не менше 20 днів, не вирушає до господарств.
Недолік методу – висока частка ручної праці. Гранули немає маркування, м.б. утруднена ідентифікація сперми, т.к. немає покриття гранул, відбувається контакт з охолоджувачем (азотом). На поверхні гранул можуть адсорбуватисямікроорганізми.
Маркування. На пакувальному одиниці (мішок, склянку, пенал) обов'язково вказують вид продукції, № і серія, кличка і № виробника, кількість доз насіння, дата заморозки, підприємство-виробник та його товарний знак, штамп, підпис контролера.
б). у вигляді фанерованих гранул
Розведену сперму розфасовують полімерні трубки діаметром 3,8-4 мм. За допомогою автомата ПРЖ (зварювальний пристрій) трубку поділяють на порції по 0,25-0,33 мм до 1 мл у кожній дозі. Проводиться маркування. Дози поміщають туби, пенали, де відбувається еквілібрація (4-6 годин). Потім поміщають у рідкий азот. Недолік методу – при введенні сперми чи розриві гранул спермії травмуються, знижується активність.
б). у пайєтах – соломинах
Розведену сперму під вакуумом розфасовують поліпропіленові трубочки, об'ємом 0,25 мл. Один кінець запайують, інший кінець закривають пробкою з полівінілового спирту. Маркують, проводять еквілібрацію та заморожують – до 750 спермодоз на мідному щиті 5 хвилин. Зберігають у склянках у судинах Дьюара.
Кріоконсервування насіння кнурів
Особливості – великий обсяг еякуляту. Насіння кнурів гірше переживає низькі температури, ніж насіння биків. При центрифугуванні еякуляту відокремлюється плазма від сперміїв. Розбавляють насіння середовищем (еякулят кнурів бідний на поживні речовини). Протягом 2 годин проводять еквілібрацію насіння, заморожують по 0,2 мл.
Кріоконсервування насіння баранів
Розводять середовищами лактозо-жовточно-гуміарабік або трис-цитратна-хелатон в 3-4 рази, еквілібрація протягом 2-9 годин, заморожують по 0,2 мл на фторпластової пластини.
Кріоконсервування насіння жеребців
Розбавляють лактозо-хелато-цитратною сумішшю з жовтком. Розбавляють у4-5 разів. Розфасовують поліпропіленові трубки (10 мл) або алюмінієві пакети (по 20 мл). Герметизують тару, потім еквілібрація та розфасовка.
Транспортування
Якщо насіння зберігають за +t, то транспортують у термосах. Якщо заморожене насіння, то судинах Дьюара. Щоб уникнути вибуху, склянки (каністри) зафіксовані, пробка не повинна бути герметично закрита. Не можна нахилятися над горловиною судини. При закипанні може статися викид азоту. При відкритій кришці може статися випаровування азоту, заправка азоту в посудину проводиться в окулярах та рукавичках. Концентрація азоту в повітрі понад 16% викликає непритомність, тому повинні працювати дві людини в приміщенні, що добре провітрюється.
Щоб не травмувати спермії, потрібно працювати охолодженими інструментами. У посудині поступово накопичується О2. При високій температурі азот приймає газоподібний стан, що призводить до накопичення О2. При концентрації кисню понад 15% – вибухонебезпечна суміш. 1 раз на місяць проводять дозаправку судин. Транспортування насіння супроводжується документами: ордери на відправлення насіння. У них вказуються прізвисько, № виробника, дата взяття, заморожування насіння, якісні показники (активність у балах) та якість насіння перед відправкою.