С-реактивний білок
…є найчутливішим (збільшення у 20-100 разів, в окремих випадках у 1000 разів) та найшвидшим (у перші 6-8 годин) показником будь-якого пошкодження (запалення).
СРБ складається з п'яти окремих субодиниць, що утворюють за рахунок нековалентних зв'язків циклічну пентамерну структуру з молекулярною масою, що варіює від 110000 до 140000 Да. СРБ, синтезується у печінці і є у крові гаразд практично в усіх здорових осіб (близько 1 мкг/мл) за відсутності запального процесу. У здорових індивідуумів рівень сироваткового СРБ зазвичай нижче 5-10 мг/л (нормальні значення СРБ індивідуальні та варіюють від 1 до 6 мг/л; ці значення залежать від віку, статі, фізіологічного стану, наявності хронічних захворювань).
Крім того, що СРБ є білком гострої фази [запалення], він також є одним з найбільш чутливих маркерів гострого запалення; однак, у зв'язку з низькою специфічністю та значною його міжіндивідуальною варіацією, необхідно з великою обережністю підходити до інтерпретації даних з урахуванням отриманих раніше значень та рівня вмісту у сироватці інших маркерів, а також з урахуванням повної оцінки анамнезу пацієнта. Таким чином, хоча підвищення рівня СРБ у сироватці крові не є характерною ознакою якогось певного (тобто конкретного) захворювання, він є важливим індикатором запального процесу. Підвищені концентрації СРБ відзначаються через 6-12 годин після початку запальної реакції та досягаютьмаксимальних значень у межах 48-72 годин. СРБ має відносно короткий період напівжиття (1-2 дні) і зазвичай повертається до норми через 5-10 днів після початку запалення (та його припинення). Слід зазначити, що визначення СРБ є більш надійним та чутливим показником запального процесу, ніж підрахунок швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ), на яку можуть впливати й фізіологічні зміни, не пов'язані із запальним процесом. Основним стимулятором (або регулятором) його синтезу є інтерлейкін-6, фактор некрозу пухлини, інтерлейкін-1.
Фізіологічна роль СРБ визначається такими пов'язаними з ним механізмами : 1. зв'язується із залишками фосфорил-холіну фосфоліпідів і особливо з пневмококовим полісахаридом C шляхом кальційзалежного механізму; 2. зв'язується з хроматином та гістоном, беручи участь у кліренсі клітинних залишків; 3. є основним фактором опсонізації: СРБ зв'язується з фагоцитами та прискорює фагоцитоз антигенів та мікроорганізмів; 4. зв'язується з фракцією «C1q» комплементу, зумовлюючи активацію комплементу класичним шляхом.
Підвищення вмісту (концентрації) СРБ є ранньою ознакою інфекції. Підвищення вмісту СРБ найбільше виражено при бактеріальних, а не вірусних інфекціях. Збільшення вмісту відзначається при активному ревматичному процесі, ревматоїдному артриті, інфаркті міокарда, гострому панкреатиті та панкреонекрозі, сепсисі, при злоякісних пухлинах. Також визначення концентрації СРБ застосовується з метою оцінки тривалості призначення антибіотиків при антибактеріальної терапії. Існує кореляція між підвищенням ШОЕ та СРБ, проте СРБ з'являється та зникає раніше, ніж змінюєтьсяШОЕ.
Визначення СРБ у первинній медичній ланці проводять двомнайбільш значущим групам пацієнтів - лихоманливим пацієнтам з ймовірністю наявності інфекційного захворювання та пацієнтам з хронічними запальними захворюваннями. У стаціонарі (шпиталі) тест на СРБ також застосовується для ранньої діагностики інфекційних ускладнень та ефективності антибактеріальної терапії. На ускладнення вказуватиме той факт, що у наступні 4–5 днів після операції концентрація СРБ продовжуватиме залишатися високою (або збільшуватись).
Показано прогностичну значущість СРБ (залежно від його вмісту в крові навітьв межах нормальних значень ) в оцінці ризику розвитку серцево-судинних захворювань та пов'язаних з ними ускладнень (при інфаркті міокарда СРБ підвищується через 18-36 годин після початку захворювання, до 18-20 дня знижується і до 30-40 дня приходить до норми (при рецидивах інфаркту СРБ знову підвищується). Для цих цілей застосовується імуноферментний тест для кількісного визначення in vitro С-реактивного білка (СРБ) у сироватці крові людини, що позначається як метод «С-реактивний високочутливий білок» (або hsCRP ELISA), який здатний визначати навіть невеликі концентрації даного білка в сироватці крові (Відображають млявий запалення в інтимі судини) і дозволяє проспективно визначати ризик розвитку серцево-судинних ускладнень, доповнюючи прогностичну інформацію, яку дають класичні фактори ризику, такі як куріння, ожиріння, інсулінорезистентність та ін.
Тест [hsCRP ELISA] ґрунтується на принципі твердофазного непрямого імуноферментного аналізу. У тесті використовуються унікальні моноклональні антитіла, спрямовані на особливу антигенну детермінанту в молекулі СРБ. Ці моноклональні антитіла адсорбовані у лунках стандартного мікропланшету. При цьому ферментний кон'югат єантитіла кози до СРБ, мічені ферментом (пероксидазою хрону). При внесенні контролів та розведених досліджуваних сироваток у лунки присутній у СРБ одночасно зв'язується і з іммобілізованими антитілами та з ферментним кон'югатом, утворюючи «сендвіч». Після 45-хвилинної інкубації, мічені антитіла, що не зв'язалися, видаляються промиванням. Додавання субстрату тетраметилбензидину (ТМБ) та 20[двадцяти]-хвилинна інкубація призводять до розвитку блакитного забарвлення, яке зупиняється додаванням 1N HCl, при цьому забарвлення змінюється з блакитного на жовте. При цьому інтенсивність фарбування прямо пропорційна концентрації СРБ у зразку, і може бути виміряна спектро-фотометрично при довжині хвилі 450 нм. (! ) Кожна лабораторія повинна отримати свої власні дані та калібрувальну криву.
Для практикуючого лікаря (наприклад, терапевта на прийомі) через швидкість розвитку багатьох захворювань, при яких важливим є визначення СРБ, виникає необхідність у швидкому, легко інтерпретованому, безінструментальному та кількісному тесті, придатному для роботи як з сироваткою/плазмою, так і з цільною. кров'ю. Цим вимогам відповідає діагностична система "НікоКард - СРБ" [NycoCard® C-РБ] ("Нікомед-Діагностик", Норвегія). Тест «НікоКард – СРБ» працює за імунометричним / імунофільтраційним принципом і складається з: (1) кроворозвідної та лізуючої (для цільної крові) рідини; (2) 4 або 8 карток з шістьма отворами, що містять специфічні моноклональні антитіла проти СРБ, іммобілізовані на порах мембрани, яка розташована на абсорбуючому папері, і (3) СРБ-специфічних моноклональних антитіл, кон'югованих з ультрачастинками колоїдного золота. Для забору крові з пальця використовують скляні капіляри, попередньо оброблені антикоагулянтом (цитратом,гепарином або ЕДТА) та висушені в сушильній шафі. Отриману кров розводять реагентом (25 до 1000 мкл мкл), ретельно перемішують і витримують 40-60 сек для лізису клітин. Потім 25 мкл розведеного зразка крові вносять в один з отворів пористої мембрани, і після її повної сорбції наносять по черзі краплю кон'югату і потім промивного розчину для видалення компонентів, що не прореагували. Стійке пурпурово-червоне фарбування діаметром 3,5 мм з'являється відразу, якщо проба містила СРБ (5-10 мг/л). Концентрацію СРБ можна визначити напівкількісно візуально. Швидке та точне визначення концентрації СРБ в мг/л здійснюється за допомогою універсального портативного денситометра "НікоКард - Рідер". Вся процедура аналізу зазвичай триває 2-3 хв. Таким чином, діагностична система «НікоКард – СРБ» дозволяє швидко (протягом 2-3 хв) і точно (кількісно за допомогою «НікоКард – Рідер») оцінити наявність запалення та ступінь його виразності, відрізнити бактеріальні інфекції від вірусних, вибрати адекватне лікування запалення (антибіотики, стероїди, протизапальні засоби) та контролювати сам процес лікування. Тест-система показує хорошу кореляцію з такими широко поширеними лабораторними методами дослідження, як турбідиметрія, нефелометрія та імуноферментний аналіз, але значно перевершує їх за ергоємністю, тобто простотою, економічності та ефективності.
При інтерпретації отриманих даних за змістом СРБ можна дотримуватися наступних алгоритмів : (1) для вірусних інфекцій, метастазів пухлин, млявих хронічних та деяких системних ревматичних захворювань характерне збільшення концентрації СРБ до 10-30 мг/л; (2) бактеріальні інфекції, загострення деяких хронічних запальних захворювань, наприклад, ревматоїдногоартриту, а також пошкодження тканин (хірургічна операція, гострий інфаркт міокарда) зазвичай супроводжуються збільшенням концентрації СРБ до 40-100 мг/л, а в ряді випадків і до 200 мг/л; (3) важкі генералізовані інфекції, опіки, сепсис призводять до збільшення концентрації СРБ до 300 мг/л та більше.