Виявлення та дослідження в сироватках людей антитіл до аглютиногенів Р, S, Le, Lu, К, Fy
Надійшла до редакції 16/V 1959 р.
Виявлення та дослідження у сироватках людей антитіл до аглютиногенів Р, S, Le, Lu, К, Fy / Аржелас Л.К., Лутчева Є.С., Резнікова М.М., Потапов М.І., Соловйова Н.А. // Судово-медична експертиза. - М., 1960. - №1. - С. 27-32.
бібліографічний опис:Виявлення та дослідження у сироватках людей антитіл до аглютиногенів Р, S, Le, Lu, К, Fy / Аржелас Л.К., Лутчева Є.С., Резнікова М.М. , Потапов М.І., Соловйова Н.А. // Судово-медична експертиза. - М., 1960. - №1. - С. 27-32.
код для вставки на форум:
Поряд із виготовленням різних видів імунних сироваток: преципітуючих та гемаглютинуючих, що застосовуються в судовомедичній практиці, сироватковий відділ Інституту судової медицини приступив до виготовлення нових видів сироваток, отримання яких дозволить набагато розширити межі судовомедичної експертизи крові та наблизити вирішення питання індивідуально.
Над проблемою індивідуальної групової характеристики людського організму вже давно працює багато дослідників.
За останнє десятиліття закордонними вченими було виявлено цілу низку нових антитіл у сироватках крові хворих, які перенесли велику кількість гемотрансфузій, у крові жінок, діти яких хворіли на гемолітичну жовтяницю, а також у крові деяких донорів. Ці антитіла більшою частиною названі на прізвища осіб, у яких вони виявлені. В еритроцитах відповідно до антитіл пізніше були знайдені аглютиногени.
Вже налічується кілька нових ізосерологічних систем: Р, S, Льюїс, Лассеран, Келл, Даффі, Кідд та ін. (Lewis, Lusseran, Kell, Duffy, Kidd). Ці системи» самостійні, які не залежать від систем ABO, MN, Rh, за винятком S, якавходить до ізосерологічної системи MN, і Келл, пов'язаної з системою Резус. Різне поєднання аглютиногенів в крові у кожної людини має велике значення для діагностики крові, і в судовій медицині воно може надати допомогу в розслідуванні деяких злочинів.
Питання необхідності вивчення систем крові, які виходять межі систем AB0, MN, Ph, у Радянському Союзі вперше поставила в Інституті судової медицини в 1956 р. М. А. Бронникова зі співробітниками; В. А. Багдасаров, Л. О. Барсегянц та Т. М. Масіс виявили ряд аглютиногенів у рідкій та сухій крові.
Щоб підійти до вивчення цих нових для нас факторів, були потрібні відповідні сироватки, яких досі в СРСР не виготовляли.
Після вивчення методики та техніки визначення факторів крові, що виходять за межі систем AB0, MN, Rh, було досліджено 790 зразків рідкої крові, отриманої від різних донорів та хворих, які перенесли неодноразові гемотрансфузії.
Кров ця надалі частково була використана для ідентифікації та абсорбції досліджуваних сироваток.
Присутність в еритроцитах аглютиногенів Р, Льюїс (а+), Льюїс (в+), Лассеран (а+), S встановлювалося в сольовому середовищі за допомогою реакції аглютинації при різних температурах - від 4 до 37 °. Фактори Келл та Даффі визначалися непрямою реакцією Кумбса (Coombs).
Визначення аглютиногенів в еритроцитах крові донорів передувало основне і найважче завдання — виготовлення стандартних сироваток шляхом виявлення нормальних та ізоімунних антитіл у сироватках людей.
Визначення аглютиногенів в еритроцитах крові людини
Відсоток позитивних результатів
Усього досліджено зразків крові
З літературних даних відомо, що у сироватках здорових осіб дуже рідко можна виявити антитіла до аглютиногенів, що не входять до системи AB0. MN та Rh. Однак серед цих антитіл відносно часто виявляються аглютиніни анти-Р. Враховуючи велику доступність отримання сироваток від здорових осіб та зважаючи на літературні дані, ми розпочали пошуки антитіл анти-Р у нормальних сироватках. У процесі роботи вважали за доцільне дослідити кожну сироватку не тільки на наявність у ній анти-Р, а й інших аглютинінів, які ще рідше зустрічаються в нормальних сироватках.
Присутність аглютинінів анти-Р, анти-S, анти-Le (а + ), анти-Le (в + ) та анти Lu (а + ) встановлювалася в пробірках реакцією аглютинації відповідних стандартних еритроцитів з випробуваною сироваткою при оптимальних для кожного антитіла температурних умовах . Аглютинини анти-Келл і анти-Даффі як неповні антитіла виявлялися непрямою реакцією Кумбса. Реакція ця трудомістка, і результати не завжди виходили чіткими внаслідок наявності аглютинації еритроцитів у вигляді монетних стовпчиків. Згодом визначення неповних антитіл вироблялося в колоїдному середовищі «біогель» шляхом додавання до випробуваної сироватці стандартних еритроцитів з оксалатом натрію. Результати виявилися чіткішими.
Таким чином, кожна сироватка досліджувалась з 8-12 стандартними еритроцитами. Постановка реакцій велася за наступних температур: 4°, 12°, 15°, 18°, 25° та 37°. Для виявлення аглютинінів до аглютиногенів однієї ізосерологічної системи застосовували не менше 4-6 позитивних та 2-4 негативних стандартних еритроцитів кожного фактора крові.
Основні труднощі дослідження полягали, по-перше, у малихкількостях випробуваних сироваток, одержуваних від хворих, внаслідок чого ці сироватки не могли бути повністю досліджені на наявність усіх аглютинінів, по-друге, у недостатній кількості донорів різних груп, що мають аглютиногени Лассеран і Келл, внаслідок чого не всі сироватки могли бути піддані відповідному вивченню.
Спочатку з'ясовувалась можливість виявлення вищезгаданих антитіл у сироватках здорових осіб — донорів.
Спочатку сироватки досліджували лише наявність агглютининов анти-Р, згодом вони одночасно вивчалися на наявність та інших антитіл. Для виявлення анти-Р-антитіл всього нами було досліджено 900 таких сироваток. Пізніше, коли була виявлена одна сироватка анти-Р про титр 1:18, перш ніж шукати антитіла анти-Р у кожній сироватці, визначали фактор Р в еритроцитах даної крові і потім шукали антитіла анти-Р тільки в сироватках P-негативних осіб.
Враховуючи, що аглютиніни анти-Р у більшості випадків є холодними, виявлення їх починалося зазвичай після абсорбції неспецифічних холодних антитіл (Хеннінгсеном) Р-негативними еритроцитами. До випробуваної сироватці додавали полоб'єму ОР-негативних еритроцитів і залишали протягом 18-20 годин при 4°. Потім за тієї ж температури ставили реакцію аглютинації, для чого в пробірку з краплею абсорбованої сироватки поміщали краплю 2% суспензії ОР-позитивних, в іншу пробірку - краплю тієї ж сироватки з краплею 2% суспензії ОР-негативних еритроцитів. Другого дня реакція враховувалася під мікроскопом. При отриманні позитивного результату визначався титр антитіл. Титрування проводили з 2% суспензією еритроцитів 0(1) групи, що містять сильний, середній і слабкий аглютиноген Р. Як контроль застосовували ОР-негативні еритроцити.
Результатипроведених досліджень наведено у табл. 2.
У зв'язку з тим, що частина досліджених сироваток походила від осіб Oap(I), Ар(II) та Ва(Ш) груп крові і, отже, вони містилиа-та р-ізоаглютинини, від останніх необхідно було звільнитися. Після абсорбції їх сироватки значно знижували або зовсім втрачали титр антитіл анти-Р, що змусило нас згодом здебільшого досліджувати сироватки крові AB(IV) групи (без додаткового аглютиніну а), які в позитивному випадку можна було б використовувати неабсорбованими. Вважають, що застосування сироваток з титром 1 : 8 не завжди дає правильні результати і точність визначення фактора Р збільшується зі збільшенням титру антитіл, тому для роботи застосовувалися сироватки з титром не нижче 1:16.
Таким чином, отримані результати повністю підтверджують дані зарубіжних дослідників про рідкісні випадки знаходження аглютинінів анти-Р, які мають досить високий титр, у сироватках крові здорових людей. З 900 сироваток лише 6 мали антитіла анти-Р з титром 1: 16-1: 32.
Що стосується частоти виявлення антитіл анти-Льюїс, анти-Лассеран, анти-S та ін, то можна вказати на наступні цифри. Петтенко-фер, вивчаючи 1763 сироватки породіллі, в 19 виявив аглютиніни анти-Льюїс (а +) і в 2-анти-Льюїс (в +). При дослідженні 18613 сироваток донорів лише у 3 були виявлені аглютиніни анти-Лас-серан. Антитіла анти-Келл були знайдені лише у 8 випадках при дослідженні 10 000 сироваток. Також дуже рідко зустрічаються антитіла анти-S та анти-Даффі.
Як відомо, ці антитіла можуть бути причиною гемолітичних жовтяниць новонароджених і при переливанні крові можуть викликати посттрансфузійні реакції.
Продовжуючи пошуки антитіл у сироватках, що випробувані, крімдослідження їх на наявність антитіл анти-Р, в 605 сироватках ми намагалися виявити присутність антитіл анти-Льюїс (а +) і в 588 - анти-Льюїс (в +). Ці антитіла вперше були виявлені Морантом (Mourant) у 1947 р. у сироватці жінки, яка народила дитину, хвору на еритробластоз. Ці антитіла можуть бути віднесені до холодного з температурним оптимумом від 4 до 20°. Є імунні антитіла, активні при 37°, а також і неповні. Грубб (Grubb) показав, що люди, які мають аглютиноген Льюїс (a-j-), є «невидільниками» субстанцій А, В і О і, навпаки, — Льюїс (в+) «виділювачами».
Крім зазначених антитіл, у 613 сироватках визначалися і аглютиніни анти-S. Останні були відкриті в 1947 р. Уолшем і Монтгомері (Walsh a. Montgomery), пізніше-Левіним (Levine) та ін. Виявлені антитіла анти-S в сироватках жінок, які мають дітей, хворих на гемолітичну жовтяницю. Піккельс (Pfckels) вважає антитіла анти-S імунними. Спроба отримати відповідні аглютинини від 61 донора, імунізованих кров'ю групи MS, не мала успіху.
У 620 сироватках ми шукали антитіла анти-Лассеран (а+ ). Вони були знайдені Каллендером і Рейсом (Callender, Race) у 1946 р. у сироватці хворого на вовчак, якому неодноразово переливали кров. Пізніше, Грінволтом і Сазакі (Greenwalt a. Sasaki) у крові хворої, що перенесла посттрансфузійну лихоманку, були виявлені аглютиніни анти-Лассеран (+), що володіють властивостями імунних антитіл. Трапляються і нормальні аглютинини, активні при температурі 10-15 °. Аглютинація характерна - поряд з великими аглютинатами спостерігаються неаглютиновані еритроцити.
Випробовувалося 570 сироваток на наявність аглютинінів анти-Келл.
Останні знайдені Кумбсом у 1946 р. у жінки, яка народила дитину з гемолітичною жовтяницею.Сенджер описує випадок появи аглютинінів анти-Келл після трансфузії. Сіммонс (Simmons) спостерігав, що в результаті імунізації II людина Келл (+) позитивною кров'ю у 5 з них виробилися антитіла анти-Келл.
І, нарешті, у 570 сироватках визначалися антитіла анти-Даффі, які були виявлені у 1950 р. Катбушем, Моллісоном та Паркіним (Cutbush, Mollison a. Parkin). Антитіла анти-Даффі, як і анти-Келл, відносяться до неповних аглютинінів. В основному, ці антитіла імунні і можуть з'являтися після гемотрансфузій.
В результаті виконаної роботи з дослідження антитіл у сироватках здорових людей наші пошуки лише 1 у невеликій кількості випадків увінчалися успіхом.
Визначення антитіл у сироватках крові здорових людей
Кількість досліджених сироваток