Визначення СРБ

Визначення концентрації С-реактивного білка в сироватці крові імунотурбідиметричним методом

Принцип методу:С-реактивний білок (СРБ) сироватки взаємодіє з моноспецифічними антитілами, присутніми в надлишку в реакційній суміші з утворенням преципітату, посиленого ПЕГ.

Турбідиметричне визначення концентрації СРБ засноване на реєстрації оптичної густини аналізованої проби при довжині хвилі 340 нм.

Діапазон виміру методу: 8-150 мг/л.

Норма: до 10 мг/л (37С);

СРБ у сироватці зберігає стабільність при заморожуванні (-20С) протягом 6 місяців.

Обладнання та реагенти:

Спектрофотометр із термостатованою кюветою, довжина хвилі 340 нм, довжина оптичного шляху 1 см; температура реакції 37С;

Автоматичні піпетки на 75 мкл, 200 мкл та 1000 мкл;

Сироватка крові негемолізована/плазма;

СРБ-буфер (ТРІС-буфер 0,01 моль/л, що містить 5% ПЕГ);

Антисироватка проти СРБ;

Калібрувальні розчини №№ 1-5 із зазначеною на етикетках концентрацією СРБ;

Фізіологічний розчин (хлорид натрію 0,9%).

Антисироватка розлучається в 3 рази (1:2) СРБ буфером з ПЕГ (поліетиленгліколем). Розведена антисироватка придатна для застосування за умови його зберігання при температурі 2-8С протягом 30 днів.

Перед аналізом реагенти слід прогріти до температури вимірювання (37С).

Додати в кювету

3. Буфер для СРБ

Перемішати протягом 15 с. Інкубувати 10 хвилин при температурі 37С. Виміряти оптичну густину холостої проби.

4. Антисироватка проти СРБ

Перемішуйте вміст пробірок протягом 15 секунд. Виміряти оптичну густину пробпри довжині 340 нм через 5 хвилин після додавання антисироватки.

Розрахунок концентрації СРБ проводять за нелінійною калібрувальною кривою:

Оптична щільність при 340 нм

Якщо концентрація СРБ проби вище найвищої концентрації стандартного розчину СРБ(точка поза робочою зоною калібрувального графіка), сироватку слід розвести 1:4 фізіологічним розчином і повторити вимірювання, а отриманий результат помножити на 5.

Клініко-діагностичне значення:СРБ – це2-глобулін і компонент неспецифічної імунної відповіді на ранніх стадіях проникнення антигену в організм. СРБ сприяє видаленню з крові ендогенних речовин, що утворюються в результаті руйнування клітин організму (полісахариди, глікопротеїни, нуклеїнові кислоти, фосфатидилхолін та ін.).

СРБ відноситься до білків гострої фази. При тяжких запаленнях синтез його в печінці зростає більш ніж у тисячу разів. Рівень СРБ у крові збільшується протягом 6-10 годин у реакціях гострої фази (руйнування тканин, запалення).

Концентрація СРБ у курців може досягати 25 мг/л. Після хірургічного втручання (якщо немає ускладнень), СРБ тримається протягом 2 днів на рівні до 150 мг/л, а потім повертається в норму.

Поганою прогностичною ознакою є СРБ 200 мг/л протягом 10 днів і більше після хірургічного втручання. За 1-2 дні до смерті СРБ помітно збільшується.

Визначення концентрації СРБ використовують на відміну бактеріальних інфекцій від вірусних. Концентрація СРБ до 50 мг/л зазвичай спостерігається при легких вірусних інфекціях та місцевих бактеріальних інфекціях; 50-150 мг/л – в основному при бактеріальних інфекціях та в окремих випадках при тяжких віруснихінфекції; 150 мг/л – при тяжких бактеріальних інфекціях.

Максимальна концентрація СРБ може сягати 400 мг/л у новонароджених і приблизно 850 мг/л у дорослих.