Загальні закономірності серологічних реакцій
Реакції виявляються при імунологічній відповідності антигену та антитіло у відповідних оптимальних умовах температури та кислотності середовища.
Імунні діагностичні сироватки одержують від великих тварин шляхом багаторазового зараження або введення токсинів.
До діагностичних антигенів відносяться суспензії живих і вбитих мікроорганізмів або їх токсини.
Виявлення специфічних антитіл за допомогою відомого антигену.
Методи дуже поширені і застосовуються з великим успіхом вже понад 100 років. Але, на жаль, оцінка серологічного дослідження у ряді випадків становить певну труднощі.
По-перше, в більшості випадків антитіла починають синтезуватися тільки на 5-7 день хвороби, по-друге – для більшості методів необхідне дослідження парних сироваток і, нарешті, сама імунна відповідь може бути мало напруженою, що дуже часто спостерігається у маленьких дітей та у пацієнтів із імунною депресією.
Необхідно також враховувати, що реакції не є абсолютно специфічними через наявність загальних антигенів у збудників, що належать до одного і навіть різних видів. Специфіка серологічних тестів залежить
також від якості діагностикумів, правильності отримання, зберігання, транспортування та обробки сироватки. Не можна використовувати кров, що має бактеріальне забруднення, гемоліз, сторонні домішки і тривалий час зберігається при кімнатній температурі.
Для діагностики найчастіше використовуються РА, РНГА, РСК, РТГА та РЛ.
Реакція аглютинації. (РА).
При використанні беруть 5мл. крові пацієнта і отримують сироватку, яку розводять в ізотонічному розчині від 1:50 до 1:1600, оскільки в концентрованому розчині можуть бути нормальні антигени у здорових людей або хворих зі схожимихворобами і витримують термостаті протягом 20 хвилин для інактивації сторонніх білкових домішок.
Як антиген використовують завись відомих вбитих мікроорганізмів (діагностикум) з якими безпечно працювати. Реакцію ставлять у пробірках.
Діагностичне значення мають розведення титру 1:200-1:400 та більше. Що більше розведення, то реакція достовірніша. Зазвичай використовують метод парних сироваток – проводячи ідентичну реакцію через 5-7 днів і порівнюють отримані результати. Титр аглютинації повинен підвищуватись і реакція має відбуватися у більших розведеннях, ніж попередня, т.к. відбувається накопичення антитіл.
РА використовується для лабораторної діагностики багатьох інфекційних хвороб.
Реакція непрямої гемаглютинації (РНГА)
Для РНГА готують у НДІ еритроцитарні антигенні діагностикуми.
Для цього на еритроцити барана, після їх попередньої обробки, штучно насаджують антигени. Для проведення реакцій використовують спеціальні луночкові пластмасові пенали. Сироватку хворого розводять від 1:10 до 1:1280 і далі розливають по луночкам, туди ж додають по 0,25 мл діагностикуму. Результати читають через 2 години та оцінюють у +.
Реакції зв'язування комплементу. (РСК)
Складна двоетапна реакція. Використовують 5 інгредієнтів, що становлять 2 системи.
РСК, незважаючи на її складність, дуже чутлива специфічна реакція та широко застосовується для діагностики вірусних, мікоплазмозних, рикетсіозних інфекцій, а також цитомегалії, токсоплазмозу, бруцельозу, гонореї та сифілісу.
Реакція гальмування гемаглютинації
Метод заснований на здатності деяких вірусів (грип та ін) викликати аглютинацію еритроцитів. Сутністю реакції є феномен запобіганнягемаглютинації еритроцитів вірусами під дією імунної сироватки
Реакції лізису (розчинення)
Антиген – лізис має здатність розчиняти відповідні мікробні клітини. Лізи здатні цього лише у присутності комплементу.
Радіоімунологічний метод (РІМ)
Метод високочутливий, ґрунтується на застосуванні мічених радіоактивним йодом антигенів. Найчастіше використовують метод, при якому мічені антигени адсорбовані на твердому носії (твердофазовий варіант). Сутність методу полягає у визначенні кількості зв'язаного антитілами сироватки крові пацієнта, міченого радіоактивним йодом антигену.
Виявлення антигенів збудників, за допомогою діагностичних сироваток
Виявлення антигенів збудників – це перебування у сироватці крові токсинів збудників. Методи виявлення антигенів збудників дуже інформативні і через легкість проведення та швидкість отримання кінцевого результату і відносяться до швидких методів (експрес-методів) лабораторної діагностики.
Для діагностики найчастіше використовуються: РІФ; РНДФ; РА; РП; ПЛР; ІФА:
Реакція імунофлюоресценції та реакція непрямої імунофлюоресценції.
Пряма РИФ
На знежиреному предметному склі із сироватки крові роблять тонкі мазки-відбитки, підсушують та фіксують, потім наносять діагностичну сироватку та поміщають у вологу камеру на 20-30 хвилин при температурі 37 градусів. Виймають, приділяють надлишок діагностичної сироватки, промивають 10-15 хвилин фізіологічним розчином, прополіскують дисцильованою водою і сушать, після чого досліджується в люмінесцентному мікроскопі.
Оцінку роблять у +.
РНІФ
При РНІФ з метою виявлення антигенів мазок-відбиток обробляють специфічною не міченоюсироваткою. Потім наносять сироватку люмінесцентну і поміщають у вологу камеру на 20-30 хвилин при температурі 37 градусів. Виймають, приділяють надлишок діагностичної сироватки, промивають 10-15 хвилин фізіологічним розчином, обполіскують дисцильованою водою та сушать, після чого досліджується у люмінесцентному мікроскопі.
Оцінку роблять також у +.
Методи прості, високочутливі і дозволяють отримати результат через 1-2 години навіть в умовах поліклініки.