4. Поживні середовища
4.1. Склад та приготування поживних середовищ
Для випробування використовують рідке тіогликолеве середовище, рідке соєво-казеїнове середовище або рідке середовище Сабуро. Рідке тіоліколеве середовище застосовують для виявлення аеробних та анаеробних бактерій. Рідке соєво-казеїнове середовище або рідке середовище Сабуро застосовують для виявлення грибів.
Використовують живильні середовища, виготовлені в лабораторії, або сухі живильні середовища промислового виробництва. І тут слід суворо дотримуватися методики приготування, рекомендованої виробником.
Якщо немає інших вказівок у приватній фармакопейній статті, середовища стерилізують в автоклаві протягом 15 хв при температурі 121 ºС за умови валідації процесу стерилізації.
Усі середовища перевіряють на стерильність та визначають їх ростові властивості.
Рідке тіогіколеве середовище:
L-цистину (Ц35) – 0,5 г
Натрію хлориду (Н125) – 2,5 г
Глюкози моногідрату (Г49) – 5,5 г
Агара гранульованого (вологість не більше 15%) – 0,75 г
Дріжджового екстракту (водорозчинного) – 5,0 г
Панкреатичного гідролізату казеїну – 15,0 г
Натрію тіогліколяту (Н113) – 0,5 г
або кислоти тіогліколевої (Т58) – 0,3 г
Розчин резазурину натрію (1:1000) – 1,0 мл
рН після стерилізації – 7,1±0,2
Додають у воду L-цистин, агар, хлорид натрію, глюкозу, водорозчинний дріжджовий екстракт і панкреатичний гідролізат казеїну і нагрівають до повного розчинення. Додають натрію тіогліколят або тіогликолеву кислоту і, якщо необхідно, доводять рН середовища 1 М розчином їдкого натру. Додають розчин резазурину, перемішують та розливають у пробірки відповідного об'єму. Стерилізують в автоклаві, валідуючи процес стерилізації.
Рідкасоєво-казеїнове середовище:
Панкреатичного гідролізату казеїну – 17,0 г
Папаїнового гідролізату соєвого борошна – 3,0 г
Натрію хлориду (Н125) – 5,0 г
Калію фосфату двозаміщеного (К95) – 2,5 г
Глюкози (Г48) – 2,5 г
рН після стерилізації – 7,3±0,2
Компоненти розчиняють у воді, якщо потрібно при нагріванні. Охолоджують за кімнатної температури. Якщо потрібно, додають 1 М розчин їдкого натру (Н33), щоб після стерилізації рН середовища був 7,3 ± 0,2. Фільтрують для отримання прозорого середовища, розливають пробірками і стерилізують в автоклаві.
Рідке середовище Сабуро:
Пептону ферментативного – 10,0 г
Глюкози моногідрату (Г49) – 40,0 г
рН після стерилізації – 5,6±0,2
Пептон та глюкозу додають у воду і повністю розчиняють при слабкому нагріванні. Охолоджують до кімнатної температури і рН доводять до необхідного значення. Фільтрують, якщо потрібно, і розливають у пробірки. Стерилізують в автоклаві, валідуючи процес стерилізації.
Для визначення стерильності деяких антибіотиків (пеніцилінів, цефалоспоринів) методом прямого посіву асептично вносять у живильні середовища певну кількість β-лактамази, зазначену у приватній фармакопейній статті, для інактивації антибіотика.
4.2. Стерильність поживних середовищ
Після стерилізації не менше 5% пробірок від кожної партії живильного середовища поміщають у термостат та інкубують протягом як мінімум 14 діб. паралельно із посівом на стерильність.