Буркуна трава
Вміст (Table of Contents)
ФС.2.5.0011.15 Буркуну трава
МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'ЯукраїнськоїФЕДЕРАЦІЇ
ФАРМАКОПЕЙНА СТАТТЯ
Донник траваФС.2.5.0011.15
Melilotiherba Вводиться вперше
Зібрана у фазу цвітіння, висушена трава дикорослих та культивованих дворічних трав'янистих рослин буркуну лікарського – Melilotus officinalis (L.) Desr. і буркуну рослого - Melilotus altissimus Thuil., сем. бобових – Fabaceae.
СПРАВЖНІСТЬ
Зовнішні ознаки
Цілісна сировина. Цілісні або частково подрібнені облистнені квітучі верхівки і бічні гілочки з ребристим стеблом діаметром до 3 мм і довжиною до 30 см. Прилистки ланцетні або шилоподібні, майже завжди цілокраї, рідко у нижніх листочків з 1 - 2 зубчиками. Нижнє листя зворотнояйцевидне, верхнє - довгасте або ланцетове, по краю з обох боків з 10 - 13 нерівними зубчиками у буркуну лікарського і з 8 - 20 зубчиками у буркуну рослого.
Квітки метеликові дрібні завдовжки від 5 до 7 мм. Чашка дзвінкова п'ятизубчаста, що залишається при плоді, гола у буркуну лікарського і опушена у буркуну рослого. Іноді зустрічаються в незначній кількості дрібні незрілі плоди – боби довжиною від 3 до 5 мм, неясносетчасті або поперечно-зморшкуваті, голі або вкриті рідкими волосками. Насіння одне, рідше два.
Колір стебел зелений, жовтувато-зелений, зеленувато-жовтий, на зламі - сірувато-або жовто-білий, листя і плодів - зелений, жовтувато-зелений, зеленувато-жовтий, квіток і бутонів - жовтий. Запах ароматний (кумариновий). Смак водного вилучення гіркуватий або солонувато-гіркуватий.
Подрібнена сировина. При розглядіподрібненої сировини під лупою (10×) або стереомікроскопом (16×) видно шматочки листя, стебел та суцвіть різної форми, окремі квітки, бутони, плоди та їх частини, що проходять крізь сито з отворами розміром 5 мм. Колір стебел зовні зелений, жовтувато-зелений, зеленувато-жовтий, на зламі - сірувато-або жовтувато-білий, листя і плодів - зелений, жовтувато-зелений, зеленувато-жовтий з коричневими вкрапленнями бобів, квіток і бутонів - жовтий. Запах ароматний (кумариновий). Смак водного вилучення гіркуватий або солонувато-гіркуватий.
Порошок. При розгляді порошку під лупою (10×) або стереомікроскопом (16×) видно шматочки листя та стебел різної форми, окремі бутони, частини квіток та плодів, що проходять крізь сито з отворами розміром 2 мм. Колір сірувато-зелений, зеленувато-жовтий із сірувато- або жовтувато-білими, жовтими, темно-зеленими, коричневими вкрапленнями. Запах ароматний (кумариновий). Смак водного вилучення гіркуватий або солонувато-гіркуватий.
Мікроскопічні ознаки
Цілісна сировина, подрібнена сировина. При розгляді листа з поверхні видно ізодіаметричні клітини верхнього епідермісу зі слабкими звивистими стінками, нижнього – з більш звивистими стінками. Складчаста кутикула – на верхівках зубчиків. Продихання овальні, оточені 2 - 5 околоустьичними клітинами (аномоцитний тип), розташовані на верхньому і нижньому епідермісі. Зустрічаються волоски 2 типів: прості одноклітинні, тонкостінні та товстостінні із загостреним кінцем і бородавчастою кутикулою; головчасті волоски з овальною багатоклітинною головкою на короткій 1-2-клітинній ніжці, навколо місця прикріплення волоска клітини епідермісу утворюють розетку. Жилки листа оточені кристалоносною обкладкою.
При розгляді пелюсток з поверхні видноклітини епідермісу із сосочкоподібними виростами. Клітини епідермісу чашолистків і квітконіжок поздовжньо витягнуті і мають прямі або слабозвивисті стінки, іноді зі складчастою кутикулою. Продихання аномоцитного типу, розташовані із зовнішнього боку чашолистків. На поверхні чашолистків і квітконіжок є численні прості одноклітинні волоски та головчасті волоски та їх фрагменти. Жилки чашолистків оточені кристалоносною обкладкою.
При розгляді тиску стебла видно поздовжньо витягнуті клітини епідермісу з прямими стінками, продихи аномоцитного типу, рідкісні, на поверхні зустрічаються волоски, характерні для даної сировини, але часто більші. Паренхіма складається з клітин овальної або витягнутої форми, зустрічаються механічні волокна, кристали кальцію оксалату, судини спірального типу.
Порошок. При розгляді мікропрепаратів видно фрагменти епідермісу з клітинами зі звивистими і звивистими стінками, продихами овальними, оточеними 2 - 5 приустівними клітинами (аномоцитний тип). У фрагментів епідермісу пелюсток спостерігаються сосочкоподібні вирости. На деяких фрагментах листа і чашолистків зустрічаються характерні волоски: прості одноклітинні, тонкостінні та товстостінні із загостреним кінцем і бородавчастою кутикулою, навколо місця прикріплення волоска клітини епідермісу утворюють розетку; головчасті волоски з овальною багатоклітинною головкою на короткій 1-2-клітинній ніжці та їх фрагменти. Фрагменти мезофілу включають жилки із кристалоносною обкладкою. Пучки, що проводять, представлені спіральними судинами.
Малюнок – Буркуну трава.
Малюнок – Буркуну трава.
1 - фрагмент епідермісу стебла з головчастим волоском (400×);
2 - клітини нижнього епідермісу листа з звивистими стінками, продихів аномоцитноготипу (400×); 3 – фрагмент пелюстки (зовнішня сторона): клітини епідермісу з сосочкоподібними виростами (400×); 4 – проста одноклітинна бородавчаста волосинка (200×); 5 – фрагмент листа: клітини епідермісу зі складчастою кутикулою на зубчастому краї листка (200×); 6 - головчаста волосинка, радіально розташовані клітини епідермісу в місці прикріплення волоска, кристалоносна обкладка вздовж жилки (200×).
Визначення основних біологічно активних речовин
Тонкошарова хроматографія
Розчин для детектування. Калію гідроксиду 2 М розчин спиртовий.
Близько 1,8 г подрібненої сировини до величини частинок, що проходять крізь сито з отворами розміром 0,5 мм, поміщають у колбу зі шліфом місткістю 100 мл, додають 10 мл спирту 96 % і нагрівають зі зворотним холодильником на киплячій водяній бані протягом 3 . Після охолодження отримане вилучення фільтрують через паперовий фільтр (випробуваний розчин).
На лінію старту високоефективної хроматографічної пластинки з шаром силікагелю на алюмінієвій підкладці розміром 10 × 10 см наносять 20 мкл випробуваного розчину і 20 мкл розчину стандартного зразка (СО) кумарину (див. розділ «Кількісне визначення» розчин А СО кумар Пластинку з нанесеними пробами сушать при кімнатній температурі, поміщають в камеру попередньо насичену протягом не менше 30 хв сумішшю розчинників оцтова кислота розведена 12 % - ефір - толуол (10:50:50), і хроматографують висхідним способом. Коли фронт розчинників пройде близько 80 - 90% довжини платівки від лінії старту, її виймають з камери, сушать до видалення слідів розчинників, обробляють розчином для детектування і переглядають в УФ світлі при довжині хвилі 365 нм.
На хроматограмі розчину СО кумарину має виявлятися зонаадсорбції з флуоресценцією зеленого, блакитно-зеленого або жовтувато-зеленого кольору.
На хроматограмі випробуваного розчину повинні виявлятися зони адсорбції з флуоресценцією: зеленого, блакитно-зеленого або жовтувато-зеленого кольору на рівні зони на хроматограмі розчину CO кумарину, зона синьо-блакитного кольору нижче зони кумарину; можливе виявлення зони адсорбції з флуоресценцією зеленого, блакитно-зеленого або жовтувато-зеленого кольору нижче за зону кумарину; допускається виявлення інших зон адсорбції.
Високоефективна рідинна хроматографія
Час утримання основного піку на хроматограмі випробуваного розчину, отриманого для кількісного визначення, повинен відповідати часу утримання основного піку на хроматограмі розчину кумарину СО (див. розділ «Кількісне визначення»).
Вологість
Цілісна сировина, подрібнена сировина, порошок – не більше 14%.
Зола загальна
Цілісна сировина, подрібнена сировина, порошок - не більше 10%.
Зола, нерозчинна в хлористоводневій кислоті
Цілісна сировина, подрібнена сировина, порошок - не більше 2%.
Подрібненість сировини
Цілісна сировина: частинок, що проходять крізь сито з отворами розміром 3 мм, - не більше 5%. Подрібнена сировина: частинок, що не проходять крізь сито з отворами розміром 5 мм, – не більше 5 %; частинок, що проходять крізь сито з отворами розміром 0,5 мм, не більше 5 %. Порошок: частинок, що не проходять крізь сито з отворами розміром 2 мм, – не більше 5 %; частинок, що проходять крізь сито з отворами розміром 0,18 мм, не більше 5 %.
Сторонні домішки
Стебла діаметромпонад 3мм. Цілісна сировина - не більше 2%.
Сировина, що змінила забарвлення(потемніле і почорніле). Цілісна сировина, подрібнена сировина - не більше 2%.
Органічна домішка. Цілісна сировина, подрібнена сировина - не більше 1%.
Мінеральна домішка. Цілісна сировина, подрібнена сировина, порошок - не більше 0,5%.
Важкі метали
Радіонукліди
Відповідно до вимог ОФС «Визначення вмісту радіонуклідів у лікарській рослинній сировині та лікарських рослинних препаратах».
Залишкові кількості пестицидів
Мікробіологічна чистота
Кособисте визначення
Цілісна сировина, подрібнена сировина, порошок: кумарину - не менше 0,3%.
Розчин СО кумарину. Близько 0,025 г (точна навішування) СО кумарину розчиняють у спирті 96 % у мірній колбі місткістю 50 мл, доводять об'єм розчину спиртом 96 % до мітки та перемішують (розчин А СО кумарину). Термін придатності розчину не більше 30 діб при зберіганні в добре закупореній упаковці, в прохолодному захищеному від світла місці.
1,0 мл розчину А СО кумарину переносять у мірну колбу місткістю 10 мл, доводять об'єм розчину спиртом 96 % до мітки і перемішують (розчин Б СО кумарину). Розчин Б використовують свіжоприготованим.
Перевірка придатності хроматографічної системи.
Хроматографічна система вважається придатною, якщо виконуються такі умови:
- фактор асиметрії піку (Т) кумарину не менше 0,8 та не більше 1,5;
- ефективність хроматографічної колонки, розрахована з піку кумарину, – не менше 1500 теоретичних тарілок;
- відносне стандартне відхилення площі піку кумарину – трохи більше 3 %.
Аналітичну пробу сировини подрібнюють до розміру частинок, що проходять через сито з отворами розміром0,5мм. Близько 1,8 г (точна навішування) подрібненої сировини поміщають у колбу зі шліфом місткістю 100 мл, додають 50 мл спирту 96 %, нагрівають із зворотним холодильником на киплячій водяній бані протягом 30 хв. Після охолодження надосадову рідину фільтрують через паперовий фільтр мірну колбу місткістю 100 мл. Витяг повторюють двічі, використовуючи 30 і 25 мл спирту 96% відповідно, при цьому при останньому вилученні паперовий фільтр переносять колбу для екстракції. Об'єм вилучення в мірній колбі доводять до мітки спиртом 96%, одночасно промиваючи колбу, в якій проводили екстракцію, і перемішують. Отримане вилучення фільтрують через фільтр з розміром пір 0,45 мкм, відкидаючи перші 1 - 2 мл фільтрату (розчин А випробуваного розчину).
Умови хроматографування
| Колонка | 125 × 4,0 мм, ендкепований октадецилсиліл (С18) силікагель для хроматографії, 5 мкм. |
| Передколонка | 4×4 мм, ендкепований октадецилсиліл (С18) силікагель для хроматографії, 5 мкм. |
| Рухома фаза | Ацетонітрилу розчин 25% у фосфорній кислоті розчині 0,3%. |
Фосфорної кислоти розчин 0,3%. 3,0 мл концентрованої фосфорної кислоти поміщають в мірну колбу місткістю 1 л, доводять об'єм розчину водою для хроматографії до мітки і перемішують. Отриманий розчин фільтрують та дегазують.
Термін придатності розчину 30 діб при зберіганні в добре закупореній упаковці, в прохолодному захищеному від світла місці.
Ацетонітрилу розчин 25% у фосфорній кислоті розчині 0,3%. 250 мл ацетонітрилу для хроматографії поміщають у мірну колбу місткістю 1 л, доводять до мітки фосфорної кислоти розчином 0,3% і перемішують. Отриманий розчин фільтрують тадегазують.
Термін придатності розчину 7 діб при зберіганні в добре закупореній упаковці, прохолодному захищеному від світла місці.
колонки, про С
довжина хвилі 275 нм
Хроматографують поперемінно випробуваний розчин і розчин кумарину, отримуючи не менше 3 хроматограм. Результати вважаються достовірними, якщо виконуються вимоги тесту "Перевірка придатності хроматографічної системи". Розрахунок вмісту кумарину проводять методом зовнішнього стандарту.
Вміст кумарину в абсолютно сухій сировині у відсотках (Х) обчислюють за формулою:
S – площа піку кумарину на хроматограмі розчину А випробуваного розчину;
Sо – площа піку кумарину на хроматограмі розчину Б СО кумарину;
- навішування сировини, г;