Цитохімічне дослідження ліпідів

Ліпіди локалізуються в цитоплазмі клітин головним чином мембранах органел і виявляються переважно в нейтрофільних гранулоцитах. Відіграють важливу роль проникності мембран. Цитохімічне дослідження ліпідів засноване на застосуванні барвників, що розчиняються в жирах (судан III, судан IV, чорний судан та ін.). Для виявлення нейтрального жиру користуються суданом III, що забарвлює жир помаранчевий колір. Ліпоїди виявляються краще чорним суданом (чорне фарбування).

Забарвлення суданом ІІІ (метод Гольдмана)

Розчинення жирів та забарвлення суданом III у помаранчевий колір.

Посуд та обладнання

  • хімічні склянки чи кювети
  • мірні циліндри
  • піпетки
  • воронки
  • пальник
  • Формаліновий спирт (1 частина формаліну та 4 частини 96% спирту)
  • 70% етиловий спирт (до 100 мл 96% спирту додати 39,18 мл дистильованої води)
  • Альфа-нафтол
  • Розчин судана (до 100 мл 70% спирту додають 20 мл дистильованої води, 1,2 г альфа-нафтола і надлишок судан III. Розчин кип'ятять протягом 10 хв і фільтрують)
  • Барвник Романівського-Гімзи

Хід забарвлення

  • Мазки крові фіксують у формаліновому спирті протягом 1-3 хв.
  • Фарбують у розчині судану III протягом 10 хв.
  • Поміщають у 70% етиловий спирт на 1 хв. Дофарбовують барвником Романовського-Гімзи або гематоксиліном протягом 5 – 10 хв.
  • Промивають дистильованою водою.
  • Ліпіди виявляються як помаранчевих зерен.

Забарвлення чорний судан. Метод Шихана, Сторі

  • Розчин судана чорного Ст. Розчиняють 0,3 г судана в 100 мл абсолютного спирту. Залишити при кімнатній температурі на 1-2 дні до повного розчинення.
  • Буферний розчин: а) 16 гкристалічно чистої карболової кислоти розчиняють у 30 мл абсолютного спирту; б) 0,3 г двозаміщеного фосфату натрію розчиняють у 100 мл дистильованої води. Розчини "а" та "б" змішати. Перед вживанням готують забуферений розчин судана, змішуючи 60 мл розчину судана та 40 мл буферного розчину.
  • 0,2% розчин однозаміщеного фосфату калію.
  • Барвник Романівського-Гімзи.
  • 70% етиловий спирт (до 100 мл 96% спирту додати 39,18 мл дистильованої води).

Хід забарвлення

  • Мазки фіксують у парах формаліну 10 хв.
  • Занурюють у буферний розчин судану на 30 хв.
  • Промивають кілька разів у 70% етиловому спирті.
  • Фарбують барвником Романовського-Гімзи 30 хв.

Нормальні величини (обидві реакції)

Клінічне значення

Зазначено підвищення СЦК ліпідів в осіб похилого віку. Підвищення вмісту ліпідів у нейтрофілах спостерігається при гострих лейкозах та загостренні хронічних лейкозів. При гострих лейкозах ліпіди в бластних клітинах виявлені у хворих при мієлобластному та монобластному варіантах та не виявлені при лімфобластному гострому лейкозі. При недиференційованому гострому лейкозі бластні клітини лише у невеликій кількості (1,38 – 3,02%) містять ліпіди.

Зменшення ліпідів у нейтрофілах виявлено при ревматизмі, запальних процесах, лікувальному голодуванні.

Мікрофотографії (ліпіди):

Література:

  • Довідник з клінічних лабораторних методів дослідження за ред. Є. А. Кост. Москва "Медицина" 1975 р.
  • Довідник "Лабораторні методи дослідження у клініці" під ред. проф. В. В. Меньшикова Москва "Медицина" 1987
  • В.Г. Палагнюк - Цитохімічна діагностика гострих лейкозів

Схожі статті

Цитохімічнедослідження мієлопероксидази

Мієлопероксидаза є лізосомальним ферментом, що каталізує в присутності перекису водню окислення різних субстратів. Вона локалізується переважно у специфічних азурофільних гранулах у цитоплазмі гранулоцитів та є маркером клітин мієлоїдного ряду. Мієлопероксидаза виявляється в клітинах гранулоцитарного ряду, починаючи з мієлобласту.

Розділ:Цітохімія

Цитохімічне дослідження глікогену

Глікоген локалізується у цитоплазмі клітин та відіграє важливу роль в енергетичному метаболізмі клітин. При цитохімічному дослідженні глікогену використовують переважно PAS-реакцію або ШИК-реакцію (за назвою реактивів - шифф-йодна кислота).

Розділ:Цітохімія

Підрахунок ретикулоцитів у мазку після фарбування їх спеціальними барвниками

Підрахунок ретикулоцитів у мазку після фарбування їх спеціальними барвниками є практично найбільш використовуваним методом підрахунку кількості ретикулоцитів. Це з тим, що метод простий, досить дешевий і вимагає спеціального дорогого устаткування, у зв'язку з ніж може застосовуватися у будь-якій клинико-диагностической лабораторії.

Розділ:Гемоцитологія

Цитохімічні методи дослідження

Цитохімічні дослідження проводять у препаратах (мазках чи відбитках) кісткового мозку, крові, різних органів та новоутворень, пунктатів; вони засновані на використанні специфічних хімічних кольорових реакцій для визначення в клітинах різних речовин (під дією спеціально підібраних реактивів відбувається забарвлення тих чи інших речовин у цитоплазмі, а за ступенем та характером забарвлення судять про кількість або активність досліджуваних речовин). Цитохімічні дослідження відносно нескладні, але поступаються вточності кількісного аналізу, проведеного з допомогою біохімічних методів.

Розділ:Цітохімія

Підрахунок кількості ретикулоцитів за допомогою люмінесцентної мікроскопії

Метод підрахунку кількості ретикулоцитів за допомогою люмінесцентної мікроскопії відрізняється простотою і вимагає небагато часу, більш точний у порівнянні зі звичайним методом, оскільки при люмінесцентній мікроскопії виявляються дрібні зерна сітчасто-нитчастої речовини.

Розділ:Гемоцитологія