ДЕЯКІ ОСОБЛИВОСТІ ЗАЛИВКИ НЕРВОВОЇ ТКАНИНИ - Студопедія
Методи виявлення елементів нервової, жирової. Еластичні структури. Гістохімія.
Забарвлення нервової тканини При морфологічних дослідженнях нервової тканини на світлооптичному рівні застосовують велику кількість методів фарбування, багато з яких модифіковані. Найчастіше це вибіркові (елективні) методи, що використовуються виявлення одного чи двох елементів. З певною метою застосовують комбіновані методи.
ФІКСАЦІЯ При вивченні нервової тканини з простих фіксаторів найчастіше використовують 10 - 20% розчин формальдегіду і 96% і 100% спирт, з фіксуючих сумішей - сулему та піридин. Існують також специфічні фіксатори, що застосовуються лише для дослідження елементів нервової тканини.
Фіксуюча суміш Рамон-і-Кахаля (для виявлення глії):
нейтральний формалін 15 мл бромід амонію 20 г
дистильована вода 85 мл
Суміш застосовують для сріблення глії по Рамон-і-Кахалю-Хортеге. Тривалість фіксації тонких (до 1,5 см) шматочків матеріалу 2-15 днів. Промивання у проточній воді.
Фіксуюча суміш Рамон-і-Кахаля (для виявлення нейро-фібрил):
піридин 40 мл? 96% спирт 30 мл
Тривалість фіксації 2 год. Промивання у проточній воді протягом 1 год.
ЗНЕЗВОЖЕННЯ
Особливістю обробки нервової тканини є її ретельне зневоднення. Для зневоднення шматочків товщиною 5-б мм використовують таку схему:
100% спирт I 6 год
100% спирт II 6 год
Тривалість зневоднення 32 год
ДЕЯКІ ОСОБЛИВОСТІ ЗАЛИВКИ НЕРВОВОЇ ТКАНИНИ
Нервову тканину для гістологічного дослідження заливають у парафін, целоїдин та желатин. Методика заливання в парафін та целоїдинніяких особливостей обробки нервової тканини на цій стадії немає.
Заливання в желатин по Снесареву Метод придатний для ембріологічних досліджень. Перевага його полягає в тому, що він не викликає зморщування матеріалу. Рекомендується для виявлення тонкої міжклітинної структури сполучної тканини, а також деяких цитологічних досліджень.
Для заливки беруть прозорий безбарвний харчовий желатин і спочатку з нього готують 25% розчин. Для цього дрібно нарізають потрібну кількість желатину, насипають у широкогорлу банку та ставлять у термостат при 37 ° С до розчинення. Після цього частину приготовленого желатину розводять навпіл теплим 1% розчином фенолу (карболової кислоти) і таким чином одержують 12,5% розчин. Розчини желатину краще готувати в невеликих кількостях при необхідності. Після фіксації ретельно промитий матеріал переносять у 12,5 % розчин желатину, де тримають залежно від величини шматочків від 1 - 2 год до 1 - 2 діб, потім на такий самий час переносять у 25 % розчин желатину при 37 °С. Після заливання слідують швидке охолодження в холодильнику та ущільнення в 5-10% формаліні. Блоки ріжуть тільки на мікротомі, що заморожує.
Перші спеціальні гістохімічні дослідження належать французькому вченому Ф. Распайль (1825-34). Інтенсивно Р. стала розвиватися з 40-х років. 20 ст, коли з'явилися надійні методи визначення клітини білків, нуклеїнових кислот, ліпідів, полісахаридів, деяких неорганічних компонентів. За допомогою гістохімічних методик вдалося, наприклад, вперше показати зв'язок змін кількості РНК із синтезом білка та сталість вмісту ДНК у хромосомному наборі.
4.Види мікроскопії.
Методи світлової мікроскопії Методи світлової мікроскопії (освітлення та спостереження).Методи мікроскопії вибираються (і забезпечуються конструктивно) залежно від характеру та властивостей об'єктів, що вивчаються, оскільки останні, як зазначалося вище, впливають на контрастність зображення.
Метод світлого поля та його різновиди Метод світлого поля в світлі, що проходить, застосовується при вивченні прозорих препаратів з включеними в них абсорбуючими (поглинаючими світло) частинками і деталями. Це можуть бути, наприклад, тонкі пофарбовані зрізи тварин та рослинних тканин, тонкі шліфи мінералів тощо.
Метод темного поля та його різновиди Використовують спеціальний конденсор, що виділяє контрастирующие структури незабарвленого матеріалу. При цьому промені від освітлювача падають на препарат під косим кутом, і об'єкт дослідження проявляється освітленим у темному полі.
Метод фазового розмаїття При проходженні світла через пофарбовані об'єкти змінюється амплітуда світлової хвилі, а при проходженні світла через незабарвлені - фаза світлової хвилі, що й використовують для отримання високо контрастного зображення.
Поляризаційна мікроскопія Поляризаційна мікроскопія дозволяє вивчати ультраструктурну організацію тканинних компонентів на основі аналізу анізотропії та/або подвійного променезаломлення
Метод інтерференційного розмаїття Метод інтерференційного розмаїття (інтерференційна мікроскопія) полягає в тому, що кожен промінь роздвоюється, входячи в мікроскоп. Один з отриманих променів прямує крізь частки, що спостерігається, інший - повз неї по тій же або додаткової оптичної гілки мікроскопа. В окулярній частині мікроскопа обидва промені знову з'єднуються та інтерферують між собою. Один з променів, проходячи через об'єкт, запізнюється по фазі (набуває різниці ходу в порівнянні з другим променем). Величинацього запізнення вимірюється компенсатором
Метод дослідження у світлі люмінесценції Метод дослідження у світлі люмінесценції (люмінесцентна мікроскопія, або флуоресцентна мікроскопія) полягає у спостереженні під мікроскопом зелено-жовтогарячого світіння мікрооб'єктів, яке виникає при їх освітленні синьо-фіолетовим світлом або оком ультрафіолетовими променями.
Ультрафіолетова мікроскопія. Заснована на застосуванні ультрафіолетових променів з довжиною хвилі менше 380 нм, що дозволяє збільшити роздільну здатність об'єктивів з 0,2. 0,3 мкм до 0,11 мкм. Вимагає застосування спеціальних ультрафіолетових мікроскопів, в яких використовуються ультрафіолетові освітлювачі, кварцова оптика та перетворювачі ультрафіолетових променів у видиму частину спектра. Багато речовин, що входять до складу клітин (наприклад, нуклеїнові кислоти), вибірково поглинають ультрафіолетові промені, що використовується для визначення кількості цих речовин у клітині.
Чи не знайшли те, що шукали? Скористайтеся пошуком: