Гістологічні методи дослідження - Медична енциклопедія - все про здоров’я серця
Гістологічні методи дослідження застосовуються для вивчення будови та функції клітин та тканин людини, тварин та рослинних організмів у нормі, патології та експерименті. Основою Р. м. в. є гістологічна техніка - комплекс методичних прийомів, що використовуються при виготовленні препаратів клітин та тканин для їх мікроскопічного дослідження. Мікроскопічне вивчення клітин і тканин може проводитися двома основними шляхами залежно від стану об'єкта, що досліджується: дослідження живих клітин і тканин, дослідження неживих клітин і тканин, що зберігають структуру завдяки спеціальним прийомам фіксації. Вивчення живих об'єктів — вітальне (суправітальне) — дає можливість спостерігати фізіологічні процеси в клітинах та тканинах, їхню прижиттєву будову. Воно проводиться на клітинах, вільно зважених у рідкому середовищі (клітинах крові, епітеліальних клітинах зіскрібків та ін), а також на культурах клітин і тканин, вирощених на спеціальних живильних середовищах. Об'єктом прижиттєвого спостереження може бути тонкі, прозорі тканинні плівки (брижа, плавальна перетинка).
В експериментальних дослідженнях використовується метод біологічних вікон (вживлення прозорих камер) та вивчення тканинних імплантатів у природному прозорому середовищі, наприклад, у передній камері ока тварин. Залежно від поставленого завдання при вітальних дослідженнях застосовують різні спеціальні методи мікроскопії: темнопольна, фазово-контрастна, флюоресцентна, поляризаційна, ультрафіолетова. Вітальні гістологічні методи застосовуються в основному для біологічних та медико-біологічних досліджень. Їх широке застосування обмежене великими технічними труднощами, пов'язаними з властивостями тканин, що переживають. У медичнихдослідженнях, особливо у практиці патологоанатомічних лабораторій, використовуються методи дослідження фіксованих об'єктів. Мета фіксації зберегти прижиттєву структуру клітин та тканин шляхом швидкого впливу на них хімічними агентами, що запобігають розвитку посмертних змін. Вибір методу фіксації залежить від завдань дослідження та особливостей фіксованого матеріалу. Так, виявлення тонких клітинних структур застосовують фіксуючі суміші, містять солі важких металів (наприклад, сулему).
Кращим фіксатором для цитологічних цілей служить чотирикіс осмія, що часто використовується і електронної мікроскопії. Універсальним фіксатором є формальдегід, який застосовується у вигляді 10% розчину формаліну. Щоб фіксація була рівномірною і повною, шматочки тканини повинні бути невеликими, а об'єм фіксуючої рідини - у багато разів перевищувати обсяг фіксованого матеріалу. Після закінчення фіксації шматочки зазвичай промивають у воді чи спирті. Тверді компоненти тканин (наприклад відкладення солей кальцію) видаляють за допомогою методів декальцинації. Найбільш швидким і простим способом приготування зрізу тканини, що застосовується зазвичай при експрес-діагностиці, є заморожування шматочка і отримання зрізів тканини на мікротомі, що заморожує. Однак при цьому важко отримати досить тонкі зрізи, а також зрізи з дрібних об'єктів і тканин, що розпадаються. Тому шматочки тканин, як правило, заливають у ущільнюючі середовища - парафін або целоїдин. Фіксовану тканину зневоднюють у спиртах зростаючої міцності, проводять через проміжний розчинник (ксилол або толуол для парафіну, спирт-ефір для целоїдину) і просочують парафіном або целоїдином.
Заливання в парафін дозволяє отримати більш тонкі зрізи (від 5-8 до 1-2 мкм), ніж заливання в целоїдин. Зрізи длямікроскопічного дослідження готують за допомогою санного чи роторного мікротомів. Надтонкі зрізи (товщиною від 90-100 до 5-15 нм), необхідні для електронно-мікроскопічних досліджень, готують на ультратомі. Ультратоми використовують і у світловій мікроскопії для отримання напівтонких зрізів. Приготовлені зрізи фарбують для чіткого виділення структур клітин та тканин, які по-різному сприймають барвники. Основні барвники - барвники і їх солі (метиленовий синій, толуїдиновий синій, азури, гематоксилін, бісмарк коричневий) - забарвлюють так звані базофільні структури (ядра клітин, основна речовина сполучної тканини).
Кислі барвники - барвники та їх солі (пікринова кислота, еозин, еритрозин) - забарвлюють ацидофільні, або оксифільні, структури (цитоплазму клітин, колагенові, еластичні волокна). Від забарвлення слід відрізняти імпрегнацію - спеціальний метод, заснований на здатності певних ділянок клітин і тканин відновлювати важкі метали (наприклад, срібла, золота, осмію) з їх солей і за рахунок цього набувати інтенсивного забарвлення. Приготування гістологічного препарату завершується укладанням його в середовища, що забезпечують збереження структур об'єкта, його фарбування та прозорості. Найчастіше цих цілей застосовують органічні смоли, наприклад канадський бальзам.