Їлення лінійності
Лінійність методики- це наявність прямої пропорційної залежності оптичної щільності від концентрації або кількості речовини, що визначається в аналізованій пробі.
Лінійність виражається рівнянняму =ax+b. Це рівняння називають лінійною регресією. Параметрbградуювальної функції характеризує відрізок, що відсікається на осі ординат і відповідає значенню холостого досвіду, а коефіцієнтaхарактеризує нахил градуювальної кривої і є відображенням чутливості методики
Для перевірки лінійності слід брати щонайменше 5 експериментальних точок. При цьому найбільше правильно використовувати окремі навішування і потім готувати з них розчини відповідних концентрацій.
На характер градуювального графіка і лінійність значною мірою можуть впливати умови виконання аналізу: кількість реактивів, концентрації аналізованих розчинів та інших.
Таблиця 1. Залежність оптичної густини від концентрації.
Концентрація одержаного розчину, %
Отримані дані слід подавати у вигляді градуювального графіка з лінією тренда, рівняння графіка та величини коефіцієнта кореляції.
Основною характеристикою лінійності є коефіцієнт кореляції, міра взаємозв'язку змінюваних явищ (взаємозв'язок).
Коефіцієнт кореляції становив 0,999772
Формули та розрахунки коефіцієнтів градуйованого графіка:
Таблиця 2. Результати визначення оптичної щільності та концентрації. Розрахунки.
x-концентрація; y - аналітичний сигнал (оптична щільність);
Для аналітичних цілей можна використовувати тільки ту методику, для якої залежність функцій від аргументукорелюється з коефіцієнтомr,який має бути≥0,99.
Отже, отримані результати перебувають у межах допустимих відхилень, т.к. валідація за показником лінійність може змінюватись у незначних межах.
§2.3.Визначення прецизійності
Прецизійність- ступінь близькості один до одного незалежних результатів вимірювань, отриманих у конкретних встановлених умовах. Фактично це міра суми випадкових помилок.
Прецизійність залежить лише від випадкових чинників і пов'язані з істинним значенням чи прийнятим опорним значенням. Ця характеристика залежить лише від випадкових чинників і пов'язані з істинним чи умовно істинним значенням вимірюваної величини. Міра прецизійності зазвичай обчислюється як стандартне (середньоквадратичне) відхилення результатів вимірювань, виконаних у певних умовах. Кількісні значення заходів прецизійності істотно залежить від заданих умов. При встановленні прецизійності слід на увазі, що дана характеристика буває трьох рівнів:
-проміжна прецизійність (внутрішньолабораторна відтворюваність);
Однак, для цілей фармацевтичного аналізу буває достатньо першого рівня.
При встановленні повторюваності існує два методи її оцінки.
1. Не менше дев'яти визначень, що охоплюють діапазон застосування методики (наприклад, три концентрації/три визначення для кожної);
Для визначення прецизійності необхідно приготувати модельну суміш. Потім з неї готують по три паралельні розчини:
Розчини А1, А2, А3 три мірні колби місткістю 100мл поміщають по 3 мл розчину модельної суміші і доводять водою до мітки.
Розчини А4, А5, А6 інші три мірні колби місткістю 100мл по 5 млрозчину модельної суміші та доводять водою до мітки.
Розчини А7, А8, А9 наступні три мірні колби місткістю 100 мл поміщають 7 мл розчину модельної суміші і доводять водою до мітки.
Вимірюють оптичну густину кожного з 9 приготовлених розчинів на спектрофотометрі при довжині хвилі 445 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм.
Паралельно вимірюють оптичну густину розчину СО рибофлавіну. Розрахунок вмісту рибофлавіну в г/мл проводять за формулою:
де,
Ах-оптична щільність досліджуваного розчину
Ао-оптична щільність розчину СО рибофлавіну
Va- об'єм аліквоти розчину модельної суміші 2 взятий для розведення, мл.
X1 = 0.0205%
X2==0.0194%
X3==0.0185%
X4==0.020%
X5==0.0210%
X6 ==0.0195%
X7==0.0239%
X8==0.024%
X9==0.0248%
Далі обчислюють величину стандартного відхилення (SD) та відносного стандартного відхилення (RSD). Слід зазначити, що жоден нормативний документ не встановлює нижню межу прецизійності і вона визначається методом аналізу, що використовується:
У таблицю 3 заносяться всі отримані, під час проведення аналізу, дані.
Таблиця 3 – Результати визначення прецизійності методики визначення рибофлавну у розчині