Імуноферментний_аналіз definition of Імуноферментний_аналіз and synonyms of

Матеріал з Вікіпедії – вільної енциклопедії

Імуноферментний аналіз(скороченоІФА, англ.enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) - лабораторний імунологічний метод якісного визначення та кількісного вимірювання антигенів та антитіл.

В основі методу імуноферментного аналізу (ІФА) лежить принцип специфічної взаємодії між антигеном та відповідним йому антитілом. Виявлення комплексу проводять з використанням так званого кон'югату, який являє собою анти-антитіло, сполучене з ферментною міткою (зазвичай використовують пероксидазу хрону або інші пероксидази).

Кон'югат може бути отриманий з використанням поліклональних антивидових антитіл (наприклад, кролячі антитіла проти імуноглобулінів людини) або моноклональних антитіл, спрямованих проти людських імуноглобулінів певного класу (M, G, А).

Залежно від того, які антитіла використані, тест-система виявлятиме в досліджуваному зразку або специфічні антитіла незалежно від їх класу, або лише антитіла певного класу (наприклад, тільки імуноглобулін G або тільки імуноглобулін M).

Існує кілька методів постановки реакції, проте в даний час найчастіше для виявлення специфічних антитіл використовуються така схема (т.зв. сендвіч-метод ІФА):

На лунках тест-планшета зафіксовано антиген збудника, який інкубується з випробуваною сироваткою або плазмою крові. За наявності в них специфічних антитіл відбувається зв'язування їх з утворенням комплексу антиген-антитіло.

Надалі, при інкубації цього комплексу з кон'югатом відбувається приєднання анти-антитіл до наявних комплексів антиген-антитіло. Ферментативнареакція (кольорова реакція) проходить у присутності перекису водню та субстрату, представленого незабарвленим з'єднанням, яке в процесі пероксидазної реакції окислюється до забарвленого продукту реакції на заключному етапі проведення дослідження. Інтенсивність фарбування залежить кількості виявлених специфічних антитіл.

Результат оцінюється спектрофотометрично або візуально. За таким принципом побудовано велику кількість тест-систем для імуноферментної діагностики різних інфекцій: ВІЛ-інфекція, вірусні гепатити, цитомегаловірусна, герпесна, токсоплазмова та інші інфекції.

Однак слід зазначити, що імуноферментний аналіз може давати і хибні результати. Хибнопозитивні можуть виникнути за рахунок ревматоїдного фактора, що є імуноглобуліном M проти власних імуноглобулінів G людини; за рахунок антитіл, що утворюються при різних системних захворюваннях, порушення обміну або прийому лікарських препаратів; у новонароджених такі хибнопозитивні реакції можуть виникати за рахунок утворення в організмі дитини M-антитіл до імуноглобуліну G матері. Хибнонегативні результати реакції зумовлені конкуренцією між імуноглобулінами М та G, а також технічними помилками при постановці реакції.

Залежно від того, які використовуються антигени, всі імуноферментні тест-системи для виявлення антитіл поділяються на:

Лізатні – в яких використовується суміш нативних антигенів (лізований або оброблений ультразвуком збудник інфекції, одержаний у культурі);
Рекомбінантні – у яких використовуються отримані генно-інженерним способом білки-аналоги певних білкових антигенів збудника;
Пептидні - використовують хімічно синтезовані фрагментибілків.

Загальний напрямок розвитку ІФА-діагностикумів - це напрямок від лізатних тест-систем, які прийнято називати тест-системами першого покоління, до рекомбінантних і пептидних.

Технологія отримання рекомбінантних білків дозволяє отримати у досить чистому вигляді аналог будь-якого окремого антигену.

Для створення високоякісної рекомбінантної тест-системи необхідно з усього антигенного різноманіття збудника вибрати антигени, які були б високоімуногенними (тобто в організмі інфікованої людини повинні вироблятися антитіла до цих антигенів у досить великій кількості) і високоспецифічними (тобто характерними лише для даного збудника і такими, що не дають перехресних реакцій з антитілами іншої природи).

Крім того, велике значення має якість очищення рекомбінантних білків. В ідеальному випадку можливе отримання рекомбінантної тест-системи практично зі 100% специфічністю при високій чутливості.

На практиці цього не завжди вдається досягти, проте специфічність найкращих рекомбінантних тест-систем наближається до 100%.

Таким чином, за рахунок безперечних переваг імуноферментного аналізу: зручності в роботі, швидкості, об'єктивності за рахунок автоматизації обліку результатів, можливості дослідження імуноглобулінів різних класів (що є важливим для ранньої діагностики захворювань та їх прогнозу) в даний час є одним з основних методів лабораторної діагностики.