Інактивована емульсійна вакцина проти аденовірусного гепатиту із включеннями
С.І. Панкратов, Н.Д. Придибайло, Н.В Крон, НВП АВІВАК
Понад 20 років минуло відтоді, як у Пакистані поблизу п.р. Карачі та Лахор, де сконцентровано велике бройлерне виробництво, виникла нова хвороба. Вона виявлялася найчастіше у бройлерів у віці 3-5 тижнів, але випадки зараження були також у стадах ремонтного поголів'я. При цьому ознаки хвороби такі: млявість, скупченість, скуйовдженість оперення, жовтуватий слиз у посліді і відмінок птиці в перші дні до 20%, а в наступний період він міг зростати до 70-80%. На розтині спостерігали скупчення прозорого транссудату в перикардіальній порожнині, осередки некрозу в печінці у вигляді сіруватих плям, що перемежовуються з крововиливами.
Гістологічним методом виявляли базофільні та еозинофільні внутрішньоядерні тільця-включення в гепатоцитах та дегенеративні зміни у тканинах підшлункової залози, нирок та міокарда.
Незабаром був ідентифікований збудник – аденовірус І групи (в основному серотипи 4 та 8), який виділяли у культурі клітин печінки ембріона, із самого ембріона та від курчат. У зв'язку з наявністю тілець-включень у печінкових клітинах та рідини перикардіальної порожнини, хвороба отримала назву аденовірусного гепатиту з включеннями – гідроперикардит (синдром гідроперикардиту, синдром гідроперикардиту курей). Слід зазначити, що у етіології захворювання важлива роль відводиться імуносупресивним інфекціям – інфекційної бурсальної хвороби та інфекційної анемії.
У країнах, де синдром гідроперикардиту курей реєструється найчастіше (Пакистан, Індія, Мексика, Чилі, Україна та ін.), він завдає значної економічної шкоди. Тому для профілактики хвороби сліддотримуватись як загальних ветеринарно-санітарних заходів (розміщувати птицю різного віку по зонах, знезаражувати корми, здійснювати ефективну дезінфекцію, виключати контамінацію патогенів у застосовуваних вакцинах), так і проводити специфічну профілактику.
В Україні зареєстровано два біопрепарати: вакцина проти синдрому гідроперикардиту курей інактивована сорбована, виробництва ФДМ «ФЦОЗЖ», і вакцина рідка інактивована проти аденовірусного гепатиту – із включеннями – гідроперикардиту курей зі штам «Т-12», виробництва ВНІВІП. Однак реєстрований рівень синдрому гідроперикардиту в Україні (2,9% від інфекційних хвороб) вимагає як ширшого впровадження вже відомих вакцин, так і створення нових.
Метою нашої роботи було виготовлення та випробування в експерименті вакцини інактивованої емульсійної проти синдрому гідроперикардиту курей.
В одному з птахогосподарств РФ, де мав місце дане захворювання, був відібраний матеріал від полеглих птахів з характерними патологоанатомічними ознаками, виділено ізольят вірусу та отримано його виробничу розплодку.
Як біологічну модель для накопичення виробничого штаму вірусу використовували курчат-бройлерів у віці 15, 20 і 30 діб, серонегативних за даною інфекцією. Їх заражали виукраїнсодержащим матеріалом, обсягом 0,5 см3 в м'яз стегна. Від полеглих птахів з дотриманням усіх правил асептики та антисептики отримували печінку, яку гомогенізували з подальшим центрифугуванням. Після центрифугування надосадову рідину зливали та інактивували. Антиген контролювали на повноту інактивації, активність у РДП та стерильність, після чого на його основі були виготовлені дослідні серії інактивованих емульсійних вакцин.
Внаслідок лабораторних випробуваньоптимальною виявилася вакцина, виготовлена на основі масляного ад'юванту ISA-70. Отримана емульсійна вакцина на вигляд являє собою однорідну емульсію білого кольору, стерильну, з в'язкістю 31 мм2/с, визначеною за допомогою віскозиметра ВПЖ-2 по ГФ XI вип., стор. 87 і стабільністю 3,0 мм, певної центрифу об/хв протягом 30 хвилин.
Нешкідливість вакцини перевіряли на курчатах 14 та 50 добового віку, яких вакцинували в ділянку нижньої третини шиї, підшкірно, в об'ємі 2,0 см3. Термін спостереження – 15 днів. Клінічні ознаки будь-якої патології протягом усього періоду досліджень не спостерігалися. При розтині трупів вимушено вбитих після завершення досвіду птахів, встановлено, що у місці введення вакцини був ознак запальної реакції, значна частина вакцини розсмокталася і відзначаються як одиничних вкраплень розміром 0,1–1,0 мм під шкірою шиї та області зоба.
З метою визначення антигенної та імуногенної активності вакцини було сформовано дві групи курчат-бройлерів 14 добового віку, серонегативних до синдрому гідроперикардиту курей. Курчат першої групи імунізували емульсійною вакциною підшкірно в область нижньої третини шиї об'ємом 0,5 см3/на голову, одноразово. Друга група була інтактним контролем. Через 15 днів після вакцинації для визначення імуногенності було взято від першої та другої групи по 50% птиці, решта курчат залишилася для визначення антигенної активності вакцини. Антигенні властивості дослідної серії вакцини оцінювали за наявністю антитіл у РДП, а імуногенність – при контрольному зараженні піддослідної птахів патогенним ізолятом вірусу.
Мал. 1.Транссудат у перикардіальній порожнині курчат, експериментально заражених АДВГГ
Віруспреципітуючі антитілау РДП були встановлені у сироватці крові в титрі 1:8–1:16 у 80% вакцинованих курчат на 21 добу та у 100% – на 28 добу після імунізації. Контрольне внутрішньом'язове зараження, проведене патогенним штамом аденовірусу в дозі, що становить LD50 на курча через 15 днів після імунізації, показало, що смертність і клінічний прояв хвороби у вакцинованих птахів були відсутні, а в групі контрольних невакцинованих курчат клінічні ознаки становила 43%. При патологоанатомічному та гістологічному дослідженні були виявлені характерні ознаки: трансудат у перикардіальній порожнині (рис. 1) та базофільні тільця-включення в клітинах печінки (рис. 2).
Таким чином, розроблена в НВП «АВІВАК» інактивована емульсійна вакцина проти аденовірусного гепатиту нешкідлива для птахів і має високі антигенні та імуногенні властивості.
Мал. 2.Базофільні включення в гепатоцитах курчат, експериментально заражених АДВГГ