Інактивовані вакцини проти сальмонельозу птахів

Д. Смирнов, кандидат ветеринарних наук, головний ветеринарний лікар ППЗ СГЦ «Зміна»

Т. Різдвяна, кандидат ветеринарних наук, директор з науки,

Є. Кононенко, завідувач відділу діагностики, НВП «Авівак»

Е. Світоч, доктор ветеринарних наук, професор, завідувач відділу молекулярної мікробіології,

Державний науковий центр прикладної мікробіології та біотехнології

Анотація: Автора провели досвід, у якому порівнювали ефективність зарубіжної та вітчизняної

вакцини проти сальмонельозу птахів. Експеримент показав, що обидва препарати забезпечували стійке епізоотичне благополуччя за цією інфекцією.

Сальмонельоз птахів - інфекційне захворювання, що протікає в гострій або хронічній формі, може бути спричинене одним або кількома представниками роду Salmonella. Останніми роками значно розширився спектр сироваріантів сальмонел, які циркулюють в організмі птахів. Поряд із збільшенням частки виділень Salmonella enteritidis все частіше реєструються Salmonella gallinarum-pullorum та S. infantis. За даними Кафтирьової Л.А. (Санкт-Петербурзький НДІЕМ ім. Пастера), з м'яса, яєць, їх змивів виділяються до 7 сероварів сальмонел. Домінуючим є Salmonella enteritidis, яка досягає 81,3% у м'ясі курей та 88,3% – у яйцях.

Проблеми з проявом сальмонельозної інфекції пов'язані з двома причинами: птах може перехворіти у легкій формі без видимих клінічних ознак або є носієм сальмонел тривалий час, тобто резервуаром збудника. Крім курей, носієм інфекції служить і водоплавний птах (гуси, качки), голуби, а також гризуни (миші та щури), комахи (таргани), домашні тварини та людина (Аронов В.М., 1999). Всіце створює стійке епізоотичне неблагополуччя у навколишньому середовищі, пов'язане з високим ризиком контамінації сальмонелами промислового птаха.

При промисловому вирощуванні птиці антибактеріальна терапія проти сальмонельозу проводиться у стадах, де виявляються особи, що позитивно реагують на інфекцію, але при цьому не реєструються клінічні ознаки захворювання.

Однак, на думку багатьох дослідників та комітету експертів ВООЗ з сальмонельозу EFSA (Європейське агентство з харчової безпеки), проблема не може бути вирішена лише застосуванням антибіотиків та хіміопрепаратів. Їх постійне використання призводить до виникнення полірезистентних роз мікроорганізмів (Kolasa А. та ін., 2007). Інфіковані продукти птахівництва стають джерелом генів множинної стійкості до лікарських засобів для збудників, небезпечних для людини. З цієї причини у США та багатьох країнах Європи застосування антибіотиків у птахівництві суворо регламентується. У комплексі заходів активно рекомендуються методи специфічної профілактики.

У вітчизняному птахівництві для профілактики цієї інфекції птахів останніми роками все частіше використовуються інактивована вакцина та сальмофаги. На прикладі господарства м'ясного спрямування, де з позитивним ефектом протягом тривалого часу застосовується інактивована вакцина проти сальмонельозу птахів закордонного виробництва, було проведено порівняльні випробування ефективності імпортної вакцини та вітчизняної «АВІВАК-Сальмовак».

У двох пташниках було імунізовано 1 4000 несучок у віці 90 днів, в одному пташнику — імпортною вакциною, у другому — вітчизняною «Авівак-Сальмовак». За період утримання птиця обох груп була клінічно здорова і під час проведення бактеріологічних досліджень.культуру S. enteritidis не виділяли. З інкубаційних яєць отримали клінічно здорових курчат, з яких сформували дві групи 2-, 5-, 10-, 14-, 17- та 20-добового віку, по 72 особини в кожній. Курчата методом випадкової вибірки були поділені на шість підгруп, по 12 особин у кожній (1-6 та 7-12). Курчат кожної підгрупи містили в окремій клітині. До зараження у двох убитих курчат кожної підгрупи відбирали проби печінки, селезінки та кишечника, які досліджували на наявність сальмонел.

Для зараження досвідчених (імунних) і контрольних (неімунних) бройлерів використовували штам S. enteritidis 92 Rif/R, стійкий до рифампіцину (МПК 200 мкг/мл), вірулентний для білих мишей (LD 50=500 КУО) і здатний колонізувати , печінку та селезінку курчат-бройлерів у будь-якому віці. Штам отримано та підтримувався в музеї ФГУН ДНЦ ПМБ.

Попередньо готували суспензію штаму, використовуючи для цього стандарт каламутності (10 од., виробництво ДНКІ ім. Тарасевича, м. Москва). Остаточну концентрацію живих клітин (КОЕ), що вводяться птаху, визначали шляхом висіву суспензії сальмонел на щільні середовища з наступним підрахунком колоній, що виросли штаму S. enteritidis 92 Rif/R.

Курчат заражали перорально, вводячи кожній особині заздалегідь визначені дози штаму S. enteritidis 92 Rif/R: для 1-2-добових-1-2 млрд. КУО/гол. та 5-ЗО-добових — від 3 до 5 млрд. КУО/гол.

Як контроль взяли 30 курчат аналогічного віку з господарства, де не проводилася імунізація батьківських стад проти сальмонельозу. Бройлерів розділили б підгруп, по 5 голів у кожній, і в період всього експерименту містили в окремому ізоляторі. За курчатами з дослідних та контрольних груп, заражених штамом S. enteritidis 92 Rif/R спостерігали протягом 14 діб. У загиблихкурчат, а також залишилися живими і вбитими після закінчення терміну спостереження досліджували печінку, селезінку і клубову кишку на наявність штаму S. enteritidis 92 Rif/R.

Для вивчення антиінвазивних властивостей вакцин з печінки загиблого або вбитого птаха вирізали стерильними ножицями шматочки масою близько 1 г, селезінку відбирали повністю, а від клубової кишки відрізали шматок довжиною 1,5-2,0 см (масою близько 1 г) і розкривали його . Наважки печінки, селезінки та кишечника подрібнювали ножицями, поміщали в стерильні пробірки та зважували. У пробірки із зразками вносили 4,5 мл стерильного розчину ізотонічного хлориду натрію і гомогенізували вміст піпеткою. Приготовлену таким чином суспензію органів титрували методом десятиразових розведень – до 10

5 . Суспензію з розведень 10°, 1" 3 і 10"

5 висівали в об'ємі 0,1 мл на чашки з селективним живильним середовищем агар Ендо з додаванням рифампіцину в концентрації 100 мкг/мл для виявлення штаму S. enteritidis 92 Rif/R.

Посіви вирощували протягом 24 і 48 годин при температурі 7°С в умовах термостата. Після 24 годин інкубування проводили попередній облік результатів, а через 48 год — остаточний, підраховуючи кількість штаму S. enteritidis 92 Rif/R, що виросли. Потім визначали обсімененість внутрішніх органів курчат у КУО на 1 г навішування органу (КУО/г).

У тому випадку, коли в посівах на середовищі Ендо з рифампіцином не реєстрували колоній, притаманних сальмонел, зразки засівали в неселективні та селективні середовища збагачення.

За наявності хоча б однієї характерної для S. enteritidis 92 Rif/R колонії проводили їх подальше вивчення. Для підтвердження приналежності виділених культур до роду Salmonella та сероваріанту

Enteritidisвикористовували біохімічну тест-систему для ідентифікації ентеробактерій ENTEROtest 24 (Lachema, Чехія) та специфічні аглютинуючі сальмонеллезні сироватки (Санкт-Петербурзький інститут вакцин та сироваток).

Характерне для сальмонел зростання на середовищі Ендо, стійкість культури до рифампіцину, біохімічні та серологічні властивості дозволяли остаточно судити про належність виділеної культури до штаму S. enteritidis 92 Rif/R.

Середній титр бактерій (Т), його відносну помилку (8) в органах курчат, заражених штамом S. enteritidis 92 Rif/R, обчислювали загальноприйнятими методами (Лакін Г.Ф., 1990).

Ефективність застосуваних вакцинних препаратів оцінювали щодо відносного титру, який визначали за формулою:

Т ср - середній титр S.enteritidis 92 Rif/R в інфікованих органах курчат дослідних груп;

Тсро - відповідний середній титр у контролі.

Усі обчислення проводили за допомогою Microsoft Excel 2007.

Проведені дослідження проб печінки, селезінки та кишечника від курчат дослідних та контрольної груп до зараження їх штамом S. enteritidis 92 Rif/R не виявили наявності бактерій роду Salmonella spp.

Результати визначення антиінвазивних властивостей вакцин представлені малюнки 1-3.

Встановлено, що курчат, отриманих від стада щепленого вакциною зарубіжного виробництва після зараження патогенним штамом S. enteritidis 92 Rif/R в возе

? 1 6 діб, печінка та селезінка не були ін

фіковані бактеріями роду Salmonella spp., і тільки в одного курчати з 10 інфікований кишечник. При зараженні 10- та 14-добових курчат були інфіковані всі органи у 20-40% особин, а у віці 17 та 20 діб цей показник підвищився до 70-100 відсотків.

У групі курчат, батькияких імунізовані інактивованою вакциною «АВІВАК-Сальмовак», при зараженні у віці 2 та 5 діб інфіковані бактеріями роду Salmonella spp. печінка по 1 пробі та кишечник у 2 та 3 пробах з 10. У пробах селезінки в ці терміни дослідження бактерії не виділені. У пізніший період зараження відмінностей в інфікуванні внутрішніх органів обох груп не виявлено.

У контрольних курчат у перший термін зараження (вік 2 діб) була виявлена 100% інфікованість бактеріями роду Salmonella spp. печінки та кишечника, а також селезінки у 90% особин, однак у пізнішому віці у заражених курчат реєстрували 100%-ву інфікованість усіх досліджуваних органів.

У таблиці 1 представлені результати визначення середнього титру бактерій (КОЕ) та його середньої помилки (%), виділених з внутрішніх органів курчат, отриманих від вакцинованих батьківських стад при зараженні в різні вікові періоди (2, б, 10, 14, 17 та 20 діб) ) патогенним штамом S. enteritidis 92 Rif/R.

Показано, що найвищий інфекційний титр штаму S. enteritidis 92 Rif/R був встановлений у печінці при зараженні курчат контрольної групи у віці б діб - 5,8x1 О 6 , титр збудника в селезінці та кишечнику склав 2,8x10 б і 1,5x б КУО/г відповідно. У порівнянні з цими даними у курчат, батьки яких були щеплені вакциною «АВІВАК-Сальмовак», титр бактерій у печінці при зараженні у 2-добовому віці у 100 разів нижче, а до кінця експерименту у 50 разів.

Для додаткового порівняння ефективності застосуваних вакцинних препаратів проти сальмонельозу курей були визначені відносини середніх титрів бактерій S. enteritidis 92 Rif/R в інфікованих органах курчат (печінка, селезінка та кишечник), отриманих від батьківських стад, щепленихвакцинами «АВІВАК-Сальмовак» та закордонного виробництва до контрольних зразків (табл. 2).

Як видно з даних таблиці 2, за винятком показника інфікованості печінки та кишечника у заражених 2-добових курчат, отриманих від батьків, щеплених інактивованою вакциною «АВІВАК-Сальмовак», в інші терміни зараження у всіх досліджуваних органах достовірної різниці у порівнянні з не встановлено.

Висновки. В результаті проведення порівняльних випробувань вакцин проти S. interitidis птахів було показано, що вітчизняна вакцина «АВІВАК-Сальмовак» за антиінвазивними та протективними властивостями не поступалася імпортному аналогу та забезпечувала стійке епізоотичне благополуччя за цією інфекцією.

Вакцинація курей батьківських стад закордонною вакциною та «АВІВАК-Сальмовак» була ефективною і формувала напружений імунітет, який передавався курчатам трансоваріально і захищав їх у ранньому віці (до сут) при зараженні патогенним штамом S. enteritidis 92.

З віком рівень захищеності курчат, отриманих від щеплених батьків, достовірно знижувався після зараження S. enteritidis 92 Rif/R при використанні обох вакцин.