Клініко-морфологічні особливості різних молекулярно-генетичних типів раку молочної залози

З-за великого обсягу цей матеріал розміщено на декількох сторінках: 1 2 3 4

особливості

Обсяг та структура дисертації

МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ

У дослідження були включені 163 хворих на інвазивний рак молочної залози T 1-4 N 0-3M0 у віці від 21 до 80 років, які перебувають на лікуванні у відділенні загальної онкології ФГБУ НДІ онкології СО РАМН з 1999 по 2007 р. Передопераційного лікування. %) хворим була проведена радикальна мастектомія, %) – секторальна резекція молочної залози з аксілярною лімфаденектомією. У післяопераційному періоді 122 хворим проводилася ад'ювантна хіміотерапія за схемами CMF, FAC, CA Х. 41 хворий на постменопаузу призначалася антиестрогенна терапія тамоксифеном. 40 хворим у післяопераційному періоді додатково виконувалася дистанційна гамма-терапія у стандартному режимі на післяопераційний рубець та/або зони регіонарного лімфовідтоку. Терміни спостереження хворих склали від 5 до 10 років. Аналізувалися первинні документи – історії хвороби та амбулаторні карти хворих.

Середній вік хворих становив 55,9±11,1 років. Більшість представляли пацієнтки старше 50 років – їх було %). Найменшими за кількістю виявилися групи хворих віком від 35 до 50 років -%) та до 35 років – 3 (2%). У 53 хворих менструальну функцію було збережено (середній вік 43,6±6,9), у 110 визначалася менопауза (61,8±7,3). Поширеність захворювання визначалася згідно з міжнародною класифікацією за системою TNM (2003 р.). Найчастіше виявлялися I (у%) пацієнток), II А (у%) випадках та II Б (у%) хворих) стадії захворювання. III А, III В та IIIC стадіїдіагностувалися рідше.

Морфологічного дослідження піддавався операційний матеріал.

Виконувалося морфологічне вивчення операційного матеріалу. Макроскопічній оцінці піддавалася тканина первинної пухлини, тканина молочної залози поза новоутворенням (для визначення можливого прихованого мультицентричного зростання) та всі віддалені лімфовузли.

Матеріал фіксувався у 10-12% розчині нейтрального формаліну. Проведення матеріалу та виготовлення гістологічних препаратів здійснювалося за стандартною методикою. Препарати фарбувалися гематоксиліном та еозином. Дослідження виконувалося із застосуванням світлового мікроскопа Carl Zeiss Axio Lab. A 1» (Німеччина).

Для морфологічного дослідження тканини первинної пухлини було розроблено наступний алгоритм оцінки:

1. Визначення гістологічного типу раку.

2. Оцінка ступеня злоякісності новоутворення.

3. Визначення співвідношення паренхіматозного та стромального компонентів пухлини.

4. Характеристика паренхіматозного компонента:

а) характеристика протокового компонента;

б) характеристика інфільтративного компонента:

- Визначення типу структур інфільтративного компонента;

- Підрахунок кількості різних типів структур.

5. Характеристика стромального компонента:

а) оцінка вираженості гіалінозу строми пухлини;

б) оцінка виразності запальної інфільтрації строми.

6. Дослідження рецепторного статусу новоутворення.

7. Оцінка HER 2/neu статусу пухлини.

8. Визначення проліферативної активності.

9. Вивчення біологічних властивостей пухлинних клітин:

а) характеристика параметрів апоптозу;

б) характеристика міжклітинної адгезії пухлини;

в) визначення експресії трансформуючого фактора росту β та його рецептора.

Гістологічний тип раку встановлювався згідно з рекомендаціями ВООЗ, Женева, 2012. До дослідження включалися лише випадки з інвазивною карциномою неспецифічного типу. Ступінь злоякісності оцінювалася за модифікованою схемою P . Scarff, H. Bloom та W . Richardson. При цьому враховувалася кількість тубулярних структур, число мітозів та клітинний поліморфізм. Співвідношення паренхіматозного та стромального компонентів новоутворення оцінювалося за трьома бальною системою. Одним балом оцінювали випадки, коли частка паренхіматозного компонента перевищувала 70%, двома балами (помірно виражений фіброз) – коли частка паренхіматозного компонента становила 10-70%, трьома балами (різко виражений) – коли частка паренхіматозного компонента становила менше ніж 10%. В інфільтративному компоненті виділялися альвеолярні, трабекулярні, тубулярні, солідні структури та дискретні групи пухлинних клітин. Альвеолярні структури являли собою скупчення пухлинних клітин або округлої, або злегка неправильної форми, що нагадує округлу. Морфологічна будова клітин, що утворюють даний вид структур, варіювала від дрібних з помірно вираженою цитоплазмою та округлими ядрами, до великих з гіперхромними, неправильної форми ядрами та помірною цитоплазмою. Трабекулярні структури були або короткими, утвореними одним рядом дрібних досить мономорфних клітин, або широкими, що складаються з 2-3 рядів клітин середніх розмірів з помірною цитоплазмою, з округлими нормохромними або гіперхромними ядрами. Тубулярні структури були утворені одним рядом досить мономорфних клітин із нормохромними округлими ядрами. Солідні структури були різними за розміром та формою і складалися або з дрібнихклітин з помірно вираженою цитоплазмою та мономорфними ядрами або з великих клітин з рясою цитоплазмою та поліморфними ядрами. Групи клітин були або окремі пухлинні клітини, або скупчення з 1-4 клітин варіабельних за своєю морфологічною будовою. Найчастіше інфільтративний компонент мав змішану будову. У кожному випадку вказувалося кількість різних типів структур інфільтративному компоненті. Мінімально в пухлини міг визначатися тільки один будь-який тип структур, максимально - всі п'ять типів, що виділяються. Стромальний компонент пухлини характеризувався за вираженістю гіалінозу та запальної інфільтрації. Виразність гіалінозу та запальної інфільтрації строми також оцінювалися за трьома бальною системою (1 бал - слабо, 2 бали - помірно, 3 бали - різко виражений).

Визначення рецепторного, HER 2/neu статусу, проліферативної активності (експресія Ki 67) та таких біологічних властивостей пухлинної тканини, як параметри апоптозу (експресія р53, bcl 2), міжклітинної адгезії (експресія Е-кадхерину, α-катеніну), експресії трансформ зростання β та його рецептора виконувалося з використанням імуногістохімічного методу дослідження. Імуногістохімічне дослідження здійснювалося за стандартною методикою. Застосовувалися антитіла фірми «Dako» до рецепторів естрогену (клон 1 D 5, RTU, мишачі), до рецепторів прогестерону (клон PgR 636, RTU, мишачі), до онкопротеїну c – erbB – 2 (HER 2/neu статус) (робоче розведення 1:500, кролячі), до Ki 67 (клон MIB-1, RTU, мишачі), фірми «Novocastra» до р53 (клон CM 1, робоче розведення 1:150), до bcl 2 (клон bcl 2/100/D 5, робоче розведення 1:80), до Е - кадхерину (клон 36 B 5, робоче розведення 1:30), TGFβ (клон TGFβ 17, робоче розведення 1:40), до TDGβR 1 (клон 8А11,робоче розведення 1:50), фірми «Diagnostic Biosistem» до α-катеніну (поліклональні, робоче розведення 1:50). Оцінка експресії рецепторів до статевих гормонів проводилася кількісним методом гісто-рахунку (Histo-Score). При цьому підраховувався відсоток позитивних клітин та показник експресії в балах (2012). HER 2/neu негативними вважалися випадки з відсутністю фарбування або слабким переривчастим мембранним фарбуванням. До HER 2/neu позитивним відносили випадки з інтенсивним безперервним мембранним фарбуванням більш ніж 30% клітин. Випадки з помірним безперервним мембранним фарбуванням більш ніж у 30% клітин або інтенсивним безперервним мембранним фарбуванням менш ніж у 10% клітин, що вимагають виявлення наявності ампліфікації гена HER 2/neu методом FISH або CICH/SISH, не включалися до дослідження. Експресія рецепторів до р53, Ki 67, bcl 2, TGFβ , TGFβR , Е - кадхерину, α-катеніну оцінювалася у відсотковому вмісті позитивно забарвлених клітин у кожному варіанті структур паренхіматозного компонента первинної пухлини інвазивної карцином0 на 1000 клітин зі збільшенням х400).

На підставі поєднання експресії рецепторів до естрогенів, прогестерону, HER 2/neu статусу та Ki 67 визначалися 4 основні молекулярно-генетичні типи: люмінальний А (позитивна експресія рецепторів до естрогенів та/або до прогестерону, негативний HER 2/neu статус, експресія Ki 67 HER 2/neu статус, експресія Ki 67 ≥20%), трипл-негативний (негативна експресія рецепторів до естрогенів, прогестерону, негативний HER 2/neu статус), тип з гіперекспресією HER 2/neu (негативна експресія рецепторів до естрогенів, до прогестерону, позитивний HER 2/neu статус). Групу люмінального типу раку молочної залози склала 101пацієнтка, групу люмінального типу - 23 хворих, групу тричі негативного раку - 25 пацієнток і з гіперекспресією HER 2/ neu - 14 жінок (рис. 1).

У лімфатичних вузлах оцінювалася наявність метастатичного ураження, підраховувалася кількість лімфовузлів із метастазами. Відомості про частоту та терміни гематогенного метастазування отримували при аналізі історій хвороби або амбулаторних карток пацієнток.

Обробка отриманих даних виконувалася з використанням пакета програм "Statistica 6.0 for Windows". Застосовувався дисперсійний аналіз, критерій х2, метод логістичної регресії. Обговорювалися результати з достовірністю відмінностей при р

особливості

Мал. 1. Розподіл хворих, включених у дослідження, на групи.

РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕННЯ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ

Основні клінічні параметри хворих з різними молекулярно-генетичними типами раку молочної залози

У дослідженні аналізувалися різні клінічні параметри, що характеризують як організм загалом (вік, стан менструальної функції пацієнток), і пухлина зокрема.

Середній вік хворих з різними молекулярно-генетичними типами раку молочної залози не відрізнявся і становив при люмінальному типі А 55,9±10,5 років, при люмінальному 53,4±12,1 року, при тричі негативному 59,1±11, 7 років та при типі з гіперекспресією HER 2/neu 53,7±12,3 роки. У всіх групах, що вивчаються, у пацієнток частіше реєструвався стан менопаузи, порівняно з хворими, у яких менструальна функція була збережена (відповідно: люмінальний А - 66% і 34%, р=0,0000; люмінальний В - 65% і 35%, р = 0,02;тричі негативний - 76% і 24%, р = 0,0003; з гіперекспресією HER 2 / neu - 64% і 36%, р = 0,07).

У більшості спостережень виявлялося одностороннєураження молочної залози. Частота народження білатеральних пухлин достовірно не відрізнялася і відповідала 5% при люмінальному А, 9% при люмінальному, 4% при тричі негативному типі і 14% при раку з гіперекспресією HER 2/neu. При всіх молекулярно-генетичних типах, що вивчаються, частіше пухлини локалізовувалися в зовнішніх квадрантах (відповідно: люмінальний А - 54%, люмінальний В - 71%, тричі негативний - 63%, з гіперекспресією HER 2/ neu - 60%). Частота виявлення мультицентричного характеру росту пухлини також не відрізнялася в досліджуваних групах пацієнток (відповідно: люмінальний А – 21%, люмінальний – 22%, тричі негативний – 13%, з гіперекспресією HER 2/neu – 21%).

Пухлини невеликих розмірів, що не перевищують 2 см в діаметрі (T 1), частіше були присутні в групах пацієнток з люмінальними типами раку, тоді як більші новоутворення були характерними для хворих з тричі негативними пухлинами і з типом, що характеризуються гіперекспресією HER 2/neu (Рис. 2).

особливості

Мал. 2. Розмір пухлини у хворих із різними молекулярно-генетичними типами раку молочної залози.

Рак молочної залози І стадії в основному зустрічався при люмінальному А (33%) і люмінальному В (22%) раку молочної залози, в порівнянні з тричі негативними новоутвореннями (4%; р=0,002; р=0,03) і з пухлинами, характеризується гіперекспресією HER 2/ neu (0%; р=0,006; р=0,03). Отримані результати дещо відрізняються від загальновідомих, згідно з якими люмінальні пухлини мають великі розміри (Cheang M. C. U., 2009). IIIB стадія частіше діагностувалася у пацієнток з пухлинами, що характеризується гіперекспресією HER 2/neu у 21% спостережень, тоді як при люмінальному А та В раках у 4% (р=0,007 та р=0,05 відповідно). При тричі негативнихпухлинах частіше (68%) виявлялася IIA стадія процесу, порівняно з люмінальними А і В раками (р=0,002 та р=0,04, відповідно).

Особливості морфологічної будови первинної пухлини при різних молекулярно-генетичних типах раку молочної залози

У всіх хворих, включених у дослідження, гістологічний тип новоутворення відповідав інвазивній карциномі неспецифічного типу (інвазивному протоковому раку за попередньою класифікацією). При морфологічному дослідженні первинної пухлини в переважній більшості спостережень було виявлено другий ступінь злоякісності: у 90% випадків при люмінальному А, у 80% випадків при люмінальному В, у 95% випадків при тричі негативному та у 86% випадків у групі новоутворень з гіперекспресією /neu. Частота виявлення протокових структур не відрізнялася у досліджуваних групах.

Дослідження інфільтративного компонента первинного пухлинного вузла дозволило виявити низку ознак, характерніших для того чи іншого молекулярно-генетичного типу раку молочної залози. Виявилося, що інфільтративний компонент при люмінальному А і В молекулярно-генетичних типах виявився максимально різноманітним, в ньому частіше (у 13% і 22% випадків) виявлялися всі п'ять типів структур (альвеолярні, трабекулярні, тубулярні, солідні і дискретно розташовані). групи пухлинних клітин). У той час як при ТНР і в пухлинах, що характеризуються гіперекспресією HER 2/neu, частіше (у 16% і 14% випадків) виявлялися мономорфні за своєю гістологічною будовою новоутворення, в інфільтративному компоненті яких був лише один з варіантів структур. Отримані результати свідчать про виражену внутрішньопухлинну морфологічну гетерогенність у групах хворих з люмінальними.новоутворення (табл. 1).

Кількість різних типів структур в інфільтративному компоненті інвазивної карциноми неспецифічного типу в залежності від молекулярно-генетичного варіанта новоутворення

Кількість типів структур в інфільтративному компоненті