Методи лабораторної діагностики вветеринарії
На сьогоднішній день методи лабораторної діагностики у ветеринарії досить численні і продовжують розширюватися. Застосовують їх головним чином для підтвердження діагнозу або його уточнення, встановлення причини хвороби, для характеристики форми, тяжкості перебігу та визначення прогнозу хвороби, для вибору етіологічної та патогенетичної терапії, для оцінки та контролю результатів лікування, а також виявлення патології при скринінгових дослідженнях.
Завдяки новітньому високотехнологічному обладнанню та реактивам, лабораторна діагностика здатна забезпечити виконання як поширених, так і рідкісних аналізів, і отримати якісні та максимально інформативні дані про процеси, що відбуваються в організмі в найкоротші терміни.
Лабораторні аналізи виконуються практично у всіх хворих тварин та значно частіше, ніж інші додаткові методи обстеження.
Найбільш поширеною послугою лабораторної діагностики у ветеринарії є аналіз крові, який допомагає визначити зміни у загальному стані тварини та функціональні характеристики більшості органів та систем.
Загальний клінічний аналіз кровідозволяє діагностувати більшість захворювань крові (анемії, лейкози та ін), а також оцінити динаміку запального процесу, ефективність проведеного лікування, вчасно виявити побічні ефекти, що розвиваються, від застосовуваних препаратів.
Клінічний аналіз крові проводять на гематологічних аналізаторах (автоматичні лічильники, засновані на кондуктометричному методі) або ручним способом (камера Горяєва) з метою підрахунку клітин крові (лейкоцити, еритроцити, тромбоцити), а також оцінки їх розмірів, структури та цитохімічних характеристик клітин, концентрації гемоглобіну .Крім кількісних характеристик, загальний аналіз крові дає оцінку та якісному складу клітин за допомогою дослідження мазка периферичної крові при тисячоразовому збільшенні під мікроскопом. Основне завдання мікроскопії мазка крові – це підрахунок лейкоцитарної формули, тобто. поділ лейкоцитів на популяції (нейтрофіли, еозинофіли, базофіли, моноцити, лімфоцити), оцінка їхнього ступеня зрілості та стану клітин. Крім лейкоцитарної формули, оцінюється і стан еритроцитів (розміри, форма, наявність ядерних форм, насиченість гемоглобіном, наявність різних включень, зокрема паразитарного походження тощо), а також якість тромбоцитів.
Для оцінки регенераторної здатності кісткового мозку при анемії проводять аналіз ретикулоцити. Відсоток ретикулоцитів оцінюється за допомогою мікроскопії мазка, пофарбованого спеціальним барвником.
Коагулометрія за допомогою клоттингових тестів (визначення часу утворення згустку) дозволяє оцінити стан системи згортання крові. На спеціальному автоматичному коагулометрі вимірюють протромбіновий час (ПВ), тромбіновий час (ТВ), активований частковий тромбопластиновий час (АЧТВ), концентрацію фібриногену.
Біохімічний аналіз крові відображає функціональний стан різних органів та систем організму тварини. При біохімічному аналізі крові досліджуються ферменти (АСТ, АЛТ, лужна фосфатаза, ліпаза, амілаза та ін.), білки, небілкові азотисті компоненти (сечовина, креатинін), пігменти (білірубін), показники вуглеводного (глюкоза, фруктозамін) холестерин) та водно-сольового обмінів (натрій, калій, хлор, кальцій, магній, фосфор та ін.).
Для виконання біохімічного аналізу використовуються спеціальні автоматичні біохімічні аналізатори, принцип роботи якихзаснований на різних методах дослідження, головним чином оптичних (спектрофотомерія, флюорометрія та ін) Також широко застосовують електрофорез (для визначення білків), різні види хроматографії, іоно-специфічну потенціометрію (для дослідження рівня електролітів), імуноферментний аналіз та ін.
Визначення концентрації гормонів у крові є найважливішим способом оцінки стану ендокринних функцій організму. За допомогою імуноферментного аналізу (ІФА) у сироватці крові визначається рівень гормонів щитовидної залози (тироксин, трийодтиронін), статевих гормонів (тестостерон, прогестерон, естрадіол, ЛГ, ФСГ), кортикостероїдних гормонів (кортизол) та ін.
У ряді випадків визначення гормонів проводять в умовах специфічних навантажень на організм тварини, що дозволяє оцінити резервні можливості тієї чи іншої залози внутрішньої секреції або збереження механізмів зворотного зв'язку. Наприклад, для оцінки функції кори надниркових залоз використовують тест на стимуляцію АКТГ (адренокортикотропним гормоном), застосовний для діагностики недостатності кори надниркових залоз (гіпоадренокортіцизму) і гіперадренокортіцизму, заснований на вимірюванні концентрації кортизолу в сироватці АКТГ .
Крім досліджень крові, серед лабораторних методів у ветеринарії часто виконуєтьсяаналіз сечі. Загальний клінічний аналіз сечі дозволяє оцінити функцію нирок та інших внутрішніх органів, а також виявити запальний процес у сечових шляхах.
Дослідження сечі складається з фізико-хімічного аналізу, за допомогою якого визначають колір, прозорість, відносну щільність, білок, глюкозу та кетонові тіла, та мікроскопічного дослідження, що дозволяє виявити еритроцити талейкоцити, епітеліальні клітини, циліндри, слиз, кристали та деякі патологічні мікроорганізми. Визначення концентрації сечі (питома вага або відносна щільність сечі) проводиться рефрактометричним методом на спеціальному приладі.
Загальний клінічний аналіз калу або копрограма дозволяє оцінити роботу шлунково-кишкового тракту, виявити наявність запальних процесів, яєць гельмінтів або найпростіших.
За допомогою фізико-хімічних методів визначають колір, форму, запах, консистенцію, кислотність калу, наявність домішок (слиз, шерсть, членики гельмінтів та ін.), а також наявність крові, білірубіну, стеркобіліну, крохмалю, нейтрального жиру та ін. Дослідженні визначають перетравність корму, наявність клітинних елементів (лейкоцити, еритроцити, епітеліальні клітини) та паразитів (яйця та личинки гельмінтів, різні форми найпростіших).
Крім копрограми, яйця гельмінтів та найпростіших у калі можна виявити за допомогою такого методу, як овогельмінтоскопія, в основі якого лежить принцип флотації та мікроскопія.
Для виявлення ектопаразитів (саркоптоз, нотоедроз, хейлетієльоз, демодекоз, отодектоз та ін) і дерматофітів проводиться дослідження зіскрібків зі шкіри за допомогою світлової мікроскопії. Цей метод досить інформативний і виконується дуже швидко.
Для видового визначення дерматофітів (мікроспорія, трихофітія) та виявлення тварин-носіїв (без клінічного прояву захворювання) необхідно зробити посів на спеціальні середовища.
Для діагностики інфекційних захворювань часто використовують імунологічні методи дослідження, що ґрунтуються на утворенні специфічних імунних комплексів з антигенів та антитіл. Використовуючи специфічні реакції, часто визначають наявність та титри антитіл до лептоспірозу.(РМА), вірусного гепатиту (РДП), збудника токсоплазмозу та інших інфекцій, дозволяючи оцінити стійкість організму до різних інфекційних захворювань та прогнозувати розвиток цих захворювань, а також оцінити ефективність вакцинації.
В даний час широке застосування у ветеринарії отримали такі імунологічні методи як, імуноферментний аналіз (ELISA) та імунохроматографія (ЇХ), що дозволяють виявити антитіла до певних вірусів (наприклад, до вірусу імунодефіциту кішок) у сироватці крові, або антигени (такі, як, парво вірус чуми м'ясоїдних, вірус лейкемії котів) у досліджуваному зразку.
Незважаючи на різноманіття методів лабораторної діагностики інфекційних захворювань, найсучаснішим і найточнішим є полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) у реальному часі. ПЛР дуже чутлива у визначенні збудників таких інфекцій, як хламідіоз, мікоплазмоз, каліцівіроз, інфекційний ринотрахеїт, аденовіроз, короновірусний ентерит, інфекційний перитоніт кішок, вірусна лейкемія кішок, вірусний імунодефіцит кішок, парво імунодефіцит кішок, парво імунодефіцит кішок, парво імунодефіцит кішок, парво.
Метод ПЛР в реальному часі (PCR-real time) заснований на принципі природної реплікації нуклеїнових кислот, який дозволяє досягти значного збільшення малих концентрацій певних фрагментів ДНК у біологічній пробі. Процес ПЛР складається з серії реакцій, що циклічно повторюються: денатурації ДНК, відпалу зондів і синтезу ДНК (елонгації). Відсутність стадії електрофорезу дозволяє мінімізувати ризик контамінації продуктами ПЛР і, таким чином, різко зменшити кількість хибно-позитивних результатів, т.к. реєстрація результатів проводиться безпосередньо у процесі полімеразної ланцюгової реакції.
Бактеріоскопічні методи лабораторноїдіагностики проводять з метою дослідження мазків-відбитків зі шкіри, вмісту зовнішнього слухового проходу, пустул та інших зразків на наявність бактерій, грибів, паразитів та клітинного складу за допомогою мікроскопії. Це досить простий та швидкий спосіб лабораторної діагностики дерматологічних захворювань, але точнішим методом залишається бактеріологічний посів.
Бактеріологічний посів - це лабораторне дослідження, спрямоване на виявлення та ідентифікацію мікроорганізмів, що викликають захворювання, з визначенням їхньої чутливості до антибіотиків, для призначення правильного лікування або визначення ефективності проведеного лікування.
Бактеріологічний посів найчастіше проводять при підозрі на інфекційно-запальні процеси в тканинах та органах, які в нормі не містять бактерій, тому важливою умовою для дослідження є правильний забір досліджуваного біологічного матеріалу, що виключає контамінацію зразка.
Лабораторна діагностика у ветеринарії має широкий спектр затребуваних методів, що забезпечують отримання важливої додаткової інформації, яка дозволяє лікарю точно поставити діагноз та призначити лікування.
Меркітанова М.А. Ветеринарний лікар-лаборант лабораторії BIOVETLAB
Піроплазмоз – це сезонне захворювання, яке викликається найпростішими кровопаразитами з роду Babesia, переносниками яких є кліщі. Крім собак, на піроплазмоз хворіють лисиці, єнотовидні собаки, вовки та інші представники сімейства псових.
Лабораторний аналіз – це, перш за все, спосіб отримання об'єктивних та достовірних даних про стан здоров'я Вашої улюбленої тварини, це спосіб уникнути багатьох помилок, нерезультативного, а часом і непотрібного лікування.