Мобільна Токсоплазмоз котів 2013
До тканинних цистоутворюючих еймеріїдних кокцидій відносяться пологи: Cystoisospora, Toxoplasma, Besnoitia, Hammondia, Sarcocystis, Frenkelia, Neospora. Кокцидійний приод і гетероксенність життєвих циклів перелічених вище пологів було встановлено лише у 70-х роках ХХ століття. Виявилося, що цисти, відомі під родовими назвами Toxoplasma, Besnoitia, Sarcocystis, Frenkelia є тканинними стадіями розвитку кокцидій, що паразитують у кишковій стінці різних м'ясоїдних ссавців, хижих птахів, рептилій. Цисти, як правило, формуються в тканинах проміжних господарів (травоїдні, всеїдні, гризуни, птиці та ін.) Поїдання тканин з цистами цих збудників відповідними дефінітивними господарями веде до статевого розвитку паразита в кишковій стінці з подальшим формуванням. У життєвих циклах цих організмів (як і у класичних кокцидій пологів Eimeria і Isospora) обов'язкова тріада Sporozoa, що включає безстатеве розмноження-мерогонію, що відбувається за типом шизогонії, ендодіо- та ендополігенії, статевий процес (гаметогенез) і гаметогенез. Гаметогенез здійснюється за типом оогамії з роздільним розвитком гамонтів. У всіх них переважно схожа ультраструктура гомологічних безстатевих і статевих стадій життєвого циклу і, що слід особливо відзначити, ізоспороїдна структура ооцист. Останні не мають мікропилки, залишкового тіла, а спороцисти без штидевського та субштидевського тілець, але з залишковим тілом; механізм ексцистування вони аналогічний. Після споруляції в ооцисті цистоутворюючих кокцидій формуються дві спороцисти з чотирма спорозоїтами у кожній. На даний час у собак і кішок виявлено більше 40 видів кокцидіїд, що належать до родів Cystoisospora, Toxoplasma, Hammondia, Besnoitia, Sarcocystis і Neospora іОоцист, що має ізоспороїдну структуру (до 1970 року у кішок, собак і людини було відомо всього 7 видів кокцидій роду Isospora). За структурою ооцисти ідентифікація кокцидій можлива далеко не завжди. Наприклад, ооцисти Toxoplasma gondii та Hammondia hammondi, що виділяються кішкою, морфологічно і за розмірами ідентичні; ооцисти і спороцисти Sarcocystis cruzi від великої рогатої худоби, S. tenella, S. orieticanis від вівці та S. equicanis, що виділяються собакою, також ідентичні морфологічно і за величиною. А якщо врахувати, що собака може виділяти з фекаліями більше 20 видів спороцист Sarcocystis, а кішка більше 10) від домашніх і диких тварин, то найнадійнішим критерієм ідентифікації видів у Sarcocystis виявляється характер життєвого циклу, що виявляється при експериментальному зараженні, що дозволяє виявити як дефінітив. , і проміжних господарів, і навіть оцінити патогенність досліджуваного виду стосовно певному господареві (И.И. Вершинин, 1998). Враховуючи вищевикладене, для ідентифікації цистоутворюючих кокцидій до роду і виду потрібно обов'язково знати особливості життєвого циклу паразиту, органотканеву і господарську специфічність, патогенність збудника і характер патології, що викликається, симптоматику, з урахуванням результатів імунологічної, біологічної (зараження). Також аналізують епізоотологічні дані. Певне значення має локалізація паразиту. У цистній фазі у Sarcocystis виражена локалізація у м'язовій тканині, у Besnoitia – у сполучній, у Frenkelia – у нервовій, у Cystoisospora – у лімфатичних вузлах та різних внутрішніх органах, у Hammondia – у м'язовій, у Toxoplasma – у нервовій, та паренхіматозних органах. Слід мати на увазі також, що одна і та ж тварина може бути заражена не скількомавидами цистоутворюючих кокцидій. Дослідження ооцист
Морфологію незрілих ооцистів можна досліджувати в нативному мазку та розчавленій краплі з фекалій хворої тварини та у вмісті копрокультур. У цих випадках матеріал, що досліджується, розбавляють фізіологічним розчином. Ооцисти дуже стійкі і можуть зберігати життєздатність протягом декількох місяців навіть за наявності у фекаліях невеликої кількості формаліну, це дає можливість зберігати кокцидій в умовах лабораторії, а також пересилати для дослідження у 10% розчині формаліну. При слабко виражених інвазіях добре використовувати метод насичення запропонований Якимовим. Невелика кількість свіжих фекалій розтирають у ступці у насиченому розчині кухонної солі. Отриману суміш фільтрують через марлю в невелику конічну колбочку або склянку для копрологічних досліджень і залишають на 30-45 хвилин. За цей час ооцисти кокцидій, як легші за питомою вагою, спливають на поверхню розчину і звідси можуть перенести гельмінтологічну петлю на предметне скло для дослідження під мікроскопом. Якісний аналіз Метод Фюлеборна Досліджуваний матеріал як 5 грам поміщають у ступку заливають насиченим розчином кухонної солі і ретельно розтирають до отримання рівномірної суспензії, потім фільтрують через металеве сито або марлю, які поміщають у конічну колбу горлом. Посудину з суспензією до верху доливають насиченим розчином кухонної солі і відстоюють. Через 35-40 хвилин поверхневу плівку знімають дротяною петлею, наносять на предметне скло, накривають покривним склом і досліджують під мікроскопом (х 150). Склад флотаційного розчину Фюллеборна: 1) кухонна сіль 350-400 грам; 2) вода дистильована 1000 мл. Поварену сіль розчиняють у киплячій воді, кип'ятять 5 хвилин, потім охолоджують і фільтрують через ватно-марлевий фільтр. Метод Дарлінга У ступці суспензують 3-5 г фекалій з 15-20 мл води. Суспензію проціджують через металеве сито центрифужні пробірки і центрифугують протягом 2-5 хв при 2500 об/хв. Верхній шар зливають, до осаду додають рідину Дарлінга, Осад суспензують і повторно центрифугують 5 хв при1500-2000об/хв поверхневу плівку знімають дротяною петлею, наносять на предметне скло, закривають покривним склом і мікроскопують. Рідина Дарлінга: змішують рівні кількості насиченого розчину кухонної солі та гліцерину. Флотація в розчині цукру Використання для флотації розчинів цукрів має ряд переваг перед методами флотації з використанням гіпертонічних розчинів кухонної солі. Розчини цукрів не надають руйнівного впливу на оболонки ооцист, що дуже важливо щодо груп кокцидий. Крім того, розчини цукрів не кристалізуються при тривалій мікроскопії. Досліджуваний матеріал у кількості 3-5 г змішують з 15-20 мл води, потім суспенцію центрифугують протягом 3-5 хв при 2500 об/хв, надосадову рідину зливають і до осаду доливають розчин цукру до верхньої частини центрифужної пробірки. Осад ресуспензують скляною паличкою в розчині цукру і повторно центрифугують протягом 3-5 хв при 1500-2000 об/хв. Ооцисти та цисти концентруються на поверхні плівки центрифугату, з якої їх знімають петлею, наносять на предметне скло, накривають покривним та досліджують під мікроскопом. Розчин цукру: 1) сахароза 50 грам; 2) вода дистильована 320 мл; 3) фенол кристалічний 6,5 грам. Кількісний аналіз Для визначення інтенсивності інвазії виробляютьпідрахунок виявлених ооцист в 1г фекалій за такими методами: 1. Метод Столу В циліндричний посуд або колбу наливають 56 мл децинормального розчину NaOH, потім додають 4 мл досліджуваного матеріалу (загальний обсяг рідини становить 60 мл). Вміст ретельно перемішують скляною паличкою, поміщають у посуд десять скляних бусинок і, щільно закривши посудину, струшують протягом хвилини. Потім швидко, щоб суспензія не відстоювалася, набирають в градуйовану піпетку 0,075 мл суспензії, що містить 0,005 мл досліджуваного матеріалу, потім наносять на предметне скло, накривають покривним і підраховують під мікроскопом число ооцист. Для визначення числа ооцист в 1 г досліджуваного матеріалу, необхідно підраховану кількість ооцист помножити на 200. 2. Метод рекомендований комітетом ВООЗ у 1968 році. У флакон (10мл) з притертою пробкою наливають 4 мл води (перша відмітка по верхньому меніску), потім додають ще 1 мл води (друга відмітка по верхньому меніску). Воду зливають у флакон і додають 10% розчин формаліну до першої позначки, потім вносять фекалії з таким розрахунком, щоб рівень рідини у флаконі піднявся до другої позначки. Закривши флакон пробкою, вміст струшують до отримання рівномірної суспензії, після чого флакон до верху доливають 10%-ний розчин формаліну і перемішують. Для дослідження беруть краплю вмісту флакона, наносять на предметне скло, накривають покривним склом та під мікроскопом (х150) підраховують кількість ооцистів. Підрахунок здійснюють у два-три прийоми (при цьому щоразу матеріал наносять заново). Середній арифметичний показник кількісного вмісту ооцист (5 мг) необхідно помножити на 200, що відповідає вмісту ооцист в одному грамі фекалій. Стандартизація флотаційного методу Етіологія захворювання Токсоплазмоз (Toxoplasmosis) – природновогнищева антропозоонозна хвороба, що викликається найпростішим внутрішньоклітинним паразитом Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909). У кішок протікає зазвичай хронічно, безсимптомно, у проміжних господарів-часто гостро і характеризується комплексом нервових явищ, а також патологією вагітності та пологів. Збудник тоскоплазмозу був вперше виявлений французькими вченими мікробіологами Ніколем і Мансо в 1908 р. у північноафриканського гризуна гунді. Надалі токсоплазми було виділено і з інших видів тварин, птахів, рептилій переважають у всіх частинах світу. У 1939 році Себін виявив морфологічну та імунологічну ідентичність штамів токсоплазм, отриманих від різних видів тварин та людини. В Україні токсоплазмоз у собак вперше описаний В. Л. Якимовим та Н. Коль-Якімовою (1911). Роботи Мелло (1910) та Каріні (1911) з опису токсоплазмозу у собак послужили основою вивчення цього захворювання у свійських тварин. Широке та планомірне вивчення токсоплазмозу в нашій країні почалося після 1955 року, коли при Інституті епідеміології та мікробіології ім. Гаммалеї та при інституті зоології АН Казахської РСР були створені спеціалізовані лабораторії. Токсоплазмоз (Toxoplasmosis) – природновогнищева антропозоонозна хвороба, що викликається найпростішим внутрішньоклітинним паразитом Toxoplasma gondii (Nicolle et Manceaux, 1909). У основних господарів, котів, протікає зазвичай хронічно, безсимптомно, у проміжних господарів-іноді гостро і характеризується комплексом нервових явищ, а також патологією вагітності та пологів.