Оцінка здатності двох систем для транспортування в рідкому середовищі до підтримки життєздатності
C. Biggs; The Chester County Hospital, West Chester, PA
КОРОТКИЙ ОГЛЯД:
Мікробіологічні методи роботи зазнають значних змін, що створює попит на системи транспортування з тампонами, що дозволяють вирішувати й інші завдання, крім звичайного посіву культур. Ми порівняли дві нові системи для транспортування в рідкому середовищі: флок-тампон ESwab (ES; Copan, Murrieta, California) і пінополіуретановий аплікатор Sigma (SS; Medical Wire & Equipment) за їх здатністю підтримувати життєздатність низки найважливіших аеробів та анаеробів, перед тим як вибрати систему для широкомасштабного застосування. Життєздатність оцінювалася за допомогою модифікованого методу прокочування тампоном (CLSI M40-A) з використанням тампонів, що зберігалися при кімнатній температурі (RT – room temperature, 20-25°C) та в холодильнику (RF – refrigerated temperature) протягом 0, 24 та 48 ч. Серед тестових штамів мікроорганізмів були бактерії N. gonorrhoeae (NG) ATCC 43069, H. influenzae (HI) ATCC 10211, S. pyogenes (SP) ATCC 19615 та P. anaerobius (PA) ATCC 273 ATCC 25845. Тампони з кожної системи були засіяні аліквотою об'ємом 100 мкл, приготовленої із суспензії кожного мікроорганізму оптичною щільністю 0,5 МкФ і розрахованою на освіту 30-300 КоЕ на чашку в початковий момент часу. Тампони кожної системи засівалися у трьох повторностях. Для кожного розведення та терміну зберігання було проведено розрахунок кількості колоній для порівняння з початковим моментом часу для визначення коефіцієнта життєздатності. Система ES підтримувала життєздатність 4 із 5 штамів після 24 годзберігання при кімнатній температурі та всіх 5 штамів при зберіганні в холодильнику з вищим коефіцієнтом життєздатності, ніж у системи SS, у всіх випадках. Після 24 год при кімнатній температурі коефіцієнт життєздатності для NG становив 14% при використанні системи ES, 0% при використанні системи SS; HI 56% ES, 10% SS; SP 100% ES; 36% SS; PA 60% ES, 28% SS. При зберіганні у холодильнику коефіцієнт життєздатності NG становив 29% під час використання системи ES, 9% SS; HI 92% ES, 75% SS; SP 82% ES; 53% SS; PA 81% ES; 51% SS; PM 67% ES, 0% SS. Визначення життєздатності після 48 год зберігання для NG не проводилося, але з інших мікроорганізмів життєздатність при використанні системи ES зберігалася у 3 з 4 штамів при кімнатній температурі та у всіх 4 штамів при зберіганні в холодильнику, в той час при використанні системи SS у 1 з 4 штамів та у 2 з 4 штамів, відповідно. Система ES дозволяє підтримувати життєздатність деяких аеробів та анаеробів не менше 24 годин при зберіганні в холодильнику та демонструє більш високий коефіцієнт життєздатності порівняно із системою SS. Флок-тампон системи ES забезпечував більш надійну абсорбцію та транспорт мікроорганізмів, ніж пінополіуретановий аплікатор системи SS. Аплікатор системи SS нерідко ушкоджував агар і періодично випадав із кришки на чашку з агаром.
ВСТУП
Транспортне середовище Еймса та рідке середовище Стюарта з волокнистими тампонами десятиліттями використовувалися у повсякденній практиці клінічної мікробіології. Зміни у методах дослідження зразків та проблеми, пов'язані з організацією робочого процесу в мікробіології викликали до життя попит на новий тип тампона, за допомогою якого можна проводити відразу кілька тестів на одному зразку та автоматизувати обробкузразків. Волокнисті тампони звужують можливості тестування та виключають його автоматизацію, і на ринку з'явилося нове покоління тампонів для транспортування, що задовольняють обидва вимоги. Ми розглянули дві системи для транспортування, в яких весь зразок розлучається в рідкій фазі, утворюючи гомогенну суспензію: транспортна система Copan ESwab, що містить 1 мл рідкого середовища Еймса та укомплектована патентованим флок-тампоном (Copan Diagnostics, Murrieta, CA), та транспортна система Medical Wire Sigma Swab, що містить 1 мл рідкого середовища Еймса і пінополіуретановий аплікатор (MW&E, Corsham, UK). Ми порівняли здатність обох транспортних систем підтримувати життєздатність певних аеробів та анаеробів при кімнатній температурі та при зберіганні в холодильнику протягом 24 та 48 год.
МЕТОДИ
Наша методика тестування ґрунтувалася на методі прокочування тампоном (стандарт CLSI M40-A). Згідно з протоколом CLSI, були зроблені послідовні десятикратні розведення суспензій тестових мікроорганізмів для отримання розведення, з якого при посіві на чашку Петрі з кожного тампона у початковий момент часу зросте кількість колоній, яку можна підрахувати. Метою було засіяти тампони такою кількістю колонієутворюючих одиниць, зміну якого можна візуально і кількісно оцінити в ході зберігання зразка. Провівши в минулому велику кількість досліджень транспортних тампонів, ми дійшли висновку, що застосовувати загальні правила розрахунку кількості колонієутворюючих одиниць на основі оптичної щільності по МакФарланд до мікроорганізмів з різними колонієутворюючими характеристиками і розмірами клітини, очікуючи при цьому завжди отримувати 300 КоЕ на чашку, дуже важко . Часто кількість КЕ виходить занадто великою або занадтомаленьким. Виходячи з цього, ми розробили систему одноразових розведень із вихідної суспензії МакФарланда, яка дозволяє отримати число КоЕ, які легко можна підрахувати неозброєним оком. Це також скорочує кількість робочих операцій, похибки у розведенні, вплив кисню та загальний час роботи із зразками.
Всі тестові штами були отримані з нових ліофілізованих культур бактерій, взятих із ATCC (American Type Culture Collection – американська колекція типових культур), згідно з інструкціями, отриманими від постачальника. Всі культури посіяні одночасно з використанням відповідного неселективного середовища і потім стали джерелом для приготування суспензії оптичною щільністю 0,5 МкФ.
ОДНОКРАТНІ РОЗВЕДЕННЯ
Суспензії для засіву тампонів приготовані з вихідної суспензії щільністю 0,5 МкФ за допомогою наступних розведень: