Other (Лабораторні методи діагностики)
Ярославська Державна Медична Академія
Кафедра пропедевтики внутрішніх хвороб педіатричного факультету
Навчально-методичний посібник для студентів ІІІ курсу педіатричного факультету
Лабораторні методи діагностики
Опанування студентами методикою загального клінічного аналізу крові та клінічною оцінкою отриманих даних.
Морфологічне дослідження крові складається з:
- Визначення кількості гемоглобіну,
- визначення кількості еритроцитів та
- лейкоцитів в 1 ммЗ крові,
- підрахунку лейкоцитарної формули,
- колірного показника, а також
- Визначення швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ).
Рідше приєднують підрахунок ретикулоцитів, тромбоцитів.
Для морфологічного дослідження достатньо кількості крові, яку можна отримати з уколу в палець.
Техніка взяття крові
Дослідження крові слід завжди проводити одночасно за однакових умов, до прийому їжі. Кров беруть із IV пальця лівої руки. Перед уколом палець дезінфікують і знежирюють, протираючи його ватою, змоченою спиртом, а потім
ефіром або їх сумішшю. Прокол роблять або стерилізованим скарифікатором, або голкою Франка зі змінними лезами, що стерилізуються. Укол зазвичай виготовляється у верхівку м'якоті першої фаланги на глибину 2,5 - 3 мм. Отриману після уколу першу краплю знімають фільтрувальним папером або ватою, змоченою ефіром. Кров для дослідження беруть у визначеному порядку: для
визначення ШОЕ, гемоглобіну, потім - для підрахунку лейкоцитів та еритроцитів; роблять мазки. Після взяття крові, м'якоть пальця обертається змоченою ефіром або спиртом ватою тапритискається до долоні для того, щоб зупинити кровотечу.
Визначення швидкості осідання еритроцитів (ШОЕ)
Обладнання та реактиви:
1. Апарат Панченкова.
2. Капіляри Панченкова.
3. 5% розчин лимоннокислого натрію (свіжоприготовлений).
4. Годинникове скло.
5. Голка Франка або скарифікатор.
Апарат Панченкова складається зі штатива з капілярами (12 шт.) шириною 1 мм, на стінці яких нанесені поділки від 0 (згори) до 100 (знизу). На рівні 0 є буква К (кров), але в середині піпетки, близько мітки 50 - буква Р (реактив).
У капіляр Панченкова набирають 5% розчин лимоннокислого натрію до мітки 50 (літера Р) і видують на годинникове скло. З уколу пальця, тримаючи капіляр горизонтально, набирають кров до мітки 0 (Літера К). Потім видують кров на годинникове скло з лимоннокислим натрієм, після чого вдруге набирають кров до мітки 0 і випускають додатково до першої порції.
Отже, на годинниковому скельці є співвідношення цитрату і крові, що дорівнює 1:4, тобто чотири об'єми крові в один об'єм реактиву. Перемішують кров кінцем капіляра, набирають до мітки 0 і ставлять в апарат Панченкова строго вертикально. За годину відзначають число міліметрів стовпчика плазми.
Оцінка даних:
У нормі ШОЕ дорівнює для чоловіків 4-10 мм, для жінок 4-15 мм за годину.
Визначення вмісту гемоглобіну
Обладнання та реактиви:
1. Гемометр Салі.
2. Піпетка від гемометра Салі.
4. Дистильована вода.
6. Скляна паличка.
7. Голка Франка або скарифікатор.
Для кількісного визначення гемоглобіну зазвичай користуються колориметричним способом. Принцип визначення полягає у перетворенні гемоглобіну.крові в солянокислий гематин та порівнянні кольору отриманого з наявним у приладі стандартом. Приладом визначення служить гемометр Салі. Він складається з двох запаяних
пробірок зі стандартною кольоровою рідиною (1% розчин солянокислого гематину в гліцерині), що містить 16,67 г% гемоглобіну (16,67 г на 100 мл крові). Між ними розташована градуйована пробірка, що має дві шкали. Одна - з поділами від 0 до 23 служить визначення гемоглобіну в грамах на 100 мл крові, т. е. в грам відсотках; інша шкала з поділками від 0 до 140 показує одиниці гемоглобіну (відсоток гемоглобіну).
Оцінка даних:
Визначення кількості еритроцитів та лейкоцитів
Обладнання та реактиви:
1. змішувачі (меланжери) або пробірки для підрахунку еритроцитів та лейкоцитів.
2. 3% – розчин NaCl (для розведення еритроцитів) або рідина Гайєма.
3. 3% розчин оцтової кислоти.
4. Рахункова камера.
Змішувачі являють собою капілярну піпетку з розширенням-ампулою, що містить намистинку, що сприяє змішуванню крові з рідиною, що розводить. Змішувачі, призначені для підрахунку еритроцитів, мають капіляр більш тонкого калібру і більш об'ємною ампулою на них нанесені мітки одна - 0,5 інша - перед входом в ампулу - 1.0, третя - у виходу з ампули - 101.
При набиранні крові до мітки 0,5 вона виявиться розведеною у 200 разів, при набиранні до 1,0 – у 100 разів. Для розведення еритроцитів застосовують 3% розчин кухонної солі чи рідина Гайема, у якій краще зберігається форма еритроцитів. Змішувач для лейкоцитів має ширший просвіт капіляра та меншу за величиною ампулу. Нанесено три мітки: 0,5, 1,0 і 11. Це дозволяє розвести кров у 10, або у 20 разів (частіше розводять у 20)раз). Для розведення лейкоцитів використовують 3 – 50% розчин оцтової кислоти. Оцтова кислота розчиняє еритроцити, що дозволяє вести підрахунок лише лейкоцитів.
Для підрахунку формених елементів найбільше часто застосовується камера типу Бюркера з вигравіруваною на ній сіткою Горяєва. Рахункова камера складається з товстого предметного скла з особливим заглибленням. На дні поглиблення лічильної камери вигравірувано сітка, в клітинах якої і підраховуються формені елементи. По краях поглиблення є піднесення, куди накладається покривне скло. Між нижньою поверхнею цього скла і дном поглиблення утворюється замкнутий простір, який і є лічильною камерою. Глибина камери відповідає 0,1мм. Рахункова камера типу Бюркера розділена навпіл глибокою канавкою і має на кожній половині сітку Горяєва, що дозволяє одразу рахувати 2 краплі, не заповнюючи знову камери. Сітка Горяєва має 225 великих квадратів (15Х15), 25 з яких поділені на малі, по 16 у кожному; є також порожні квадрати, зібрані групи по 4 квадрата. Загалом у сітці 100 великих порожніх квадратів, зібраних у 25 груп (5X5). Кожна сторона маленького квадратика дорівнює 1/20 мм, оскільки висота камери становить 0,10 мм, то обсяг дорівнює 1/4000 ммЗ.
Для підрахунку еритроцитівберуть змішувач для еритроцитів, надягають гумову трубочку, легким насмоктуванням набирають кров з уколу до мітки 0,5. Надлишок крові видаляють фільтрувальним папером, після чого кінчик змішувача занурюють у приготовлений заздалегідь флакон з 3% розчином кухонної солі або розчином Гайєма і насмоктують розчин, заповнюючи всю ампулу до мітки 101. пальцем і струшують протягом 3 хвилин. Післяцього заповнюють лічильну камеру, зливають
1-2 краплі та випускають наступну краплю на сітку.
Для підрахунку лейкоцитівкров з місця уколу набирають до мітки 0,5, потім розводять 3% розчином оцтової кислоти до мітки 11. Енергійно струшують протягом 3 хвилин, після чого зливають
1-2 краплі та заповнюють лічильну камеру. Працюючи з пробірками
для підрахунку еритроцитів наливають 4 мл 3% розчину кухонної солі або рідини Гайєма і в неї випускають 0,02 мл. крові,
відміряною піпеткою від гемометра Салі. Для підрахунку білих кров'яних елементів у пробірку наливають 0,4 мл 3 - 5% розчину
оцтової кислоти та 0,02 мл крові. Енергійно струшують пробірки, потім рідину опускають піпетку з гемометра Салі і,
набравши вміст, заповнюють лічильну камеру.
Заповнення рахункових камер:
Добре вимите і витерте шліфоване покривне скло накладають на бічні краї, що виступають. М'якоттю великих пальців покривне скло притирають, рухаючи вгору і вниз, весь час щільно притискаючи, поки не з'являться так звані Ньютонові кільця. Перед заповненням камери знову енергійно струшують змішувачі. випускають 2 краплі на фільтрувальний папір, а третьої заповнюють клацання між камерою та покривним склом. Рідина капілярності засмоктується між ними і заповнює простір над сіткою. Рідина при заповненні камери не повинна затікати в жолобки, якщо це стукає, її видаляють фільтрувальним папером.