ПЕРШЕ в’язання
У собаківництві Санкт-Петербурга несміливі кроки щодо застосування методу вагінальних мазків робляться поки що лише в секторі українського мисливського спаніеля, але вони вже дали свої результати: завдяки точно визначеним термінам – спарювання молодих "не розв'язаних" собак (сук та кобелів) пройшли успішно. Під статевим циклом розуміють зазвичай весь комплекс процесів, що протікають у генеративній системі самки ссавців, у нашому випадку суки. Після настання статевої зрілості в яєчниках відбувається інтенсивний розвиток фолікулів, причому зростання і дозрівання їх іде як хвилями, що відповідає ритміці статевих циклів даної тварини. Статевий цикл можна умовно розділити на два періоди - спокою та статевої активності, другий у собаківництві отримав назву "пустовка". Вона триває 25 - 27 днів і розпадається три фази: предтечки, течки і послетечки. Усі вони характеризуються певними як морфофізіологічними змінами у генеративній системі (яєчниках, матці, піхві), так і особливостями поведінки. Для практичних завдань собаківництва найбільший інтерес становлять циклічні зміни, що відбуваються у піхві. Період пустування відрізняється посиленим розмноженням клітин піхвового епітелію, зроговінням і відторгненням його поверхневих шарів. Клітинні елементи, їх кількість та співвідношення дозволяють точно встановити фазу статевого циклу. На перший погляд, все сказане може здатися надмірно складним, тим більше, що існують традиційні методи визначення початку пустування, часу в'язки та ознак закінчення всього періоду статевої активності. Наявні в літературі рекомендації також дуже прості - в'язати суку слід після кров'янистих виділень, на 9 - 14-й день від початку пустування. У зв'язку з тим, що в'яжуть собаку найчастіше на 3-ту або 4-ту пустівку,перші дві чи три господар залишає поза увагою та активні дії його починаються лише тоді, коли вже є направлення до партнера. На жаль, далеко не завжди цей захід закінчується успішно, хоча за всіма зовнішніми показниками візит було завдано вчасно. Більше того, часто і в'язку вдається зробити, незважаючи на відчайдушний опір собаки. А потім події можуть розвиватися двояко: в одному випадку сука залишається порожньою, в іншому - на 20 - 22 день вона починає виявляти явну зацікавленість по відношенню до "дворових добровольців" і мені відомі випадки, коли суки, пов'язані вчасно, найчастіше за допомогою досвідченого "інструктора", що приносили послід у результаті випадкової в'язки на 20-й день пустування, причому породну приналежність щенят встановити було неможливо. Успішний результат в'язки має місце лише тоді, коли зустріч партнерів відбувається в період власне тічки, або, користуючись прийнятою термінологією, еструсу, тобто в момент овуляції - викидання яйцеклітин із зрілих фолікулів. У собак тривалість овуляції коливається (залежно від породи) від 4 до 9 днів, тобто в строки власне тічки. Дозрілі яйцеклітини в цей час знаходяться в яйцеводі, де і відбувається зустріч зі сперматозоїдами. Овуляція, тобто викид яйцеклітин, за термінами може відрізнятися помітною індивідуальністю. Причому, ці відхилення від загального правила можуть бути нормальним явищем для конкретної тварини і навіть для поколінь її нащадків по материнській лінії. Ймовірно, може мати місце і "породна" мінливість і географічна, тощо. Просто треба чітко уявляти характер течії статевого циклу свого собаки. Поряд з такими нешкідливими відхиленнями можуть бути і патологічні відхилення, наприклад, "хибна тічка", що не супроводжується розривомфолікулів та викидом яйцеклітин, тобто відсутність овуляції. Показово, що всі зовнішні прояви пустунки зберігаються, кров'янисті виділення змінюються майже безбарвними, свого часу сука стає грайливою і прихильною до собак, відводить хвіст при натисканні на круп, у деяких випадках вона навіть допускає садки. Природно, що щенят у цьому випадку чекати нема чого, оскільки ніякого запліднення відбутися не може. Нерідко вся вина за порожню в'язку лягає на кобеля, його починають остерігатися, не включати до плану племінного використання. Всіх цих неприємностей можна спробувати уникнути, якщо детально вивчити особливості статевих циклів маткового поголів'я породи. І починати треба з першої пустівки. Найперша течка може проходити нетипово, вона може бути "хибною" або "роздробленою". У цих випадках за короткою естральною кровотечею (2 - 5 днів) настає перерва тривалістю до двох тижнів, а потім кров'яні виділення відновлюються і цикл проходить нормально. Дослідити естральний цикл, вловити якісь відхилення, виявити патологічні зміни у характері перебігу статевого циклу суки та допоможе методика вагінальних мазків. Мені дуже хотілося б зацікавити нею як відповідальних за ведення племінної роботи з породою, так і заводчиків.Сама процедура отримання мазка піхви нескладна і доступна кожному власнику собаки. Для того, щоб отримати препарат піхвового мазка, необхідно мати: 1. Дистильовану воду 2 – 3 літри. 2. Декілька очних піпеток із закругленими кінцями. 3. Предметне скло (30 штук). 4. Чашки Петрі або чашки Коха (можна обійтися і невеликими блюдцями). 5. "Салазки" - 2 скляні трубочки діаметром 3 - 4 мм, довжиною 6 - 7 см, з'єднані між собою з обох кінців гумовимитрубками, діаметром, що дозволяє щільно надіти їх на скляні трубки, довжиною 4 - 6 см. Санки кладуться на дно чашок Петрі (або Коха) або блюдця. Санки можна успішно замінити двома сірниками, покладеними на дно чашок або блюдця паралельно один одному. На санки або сірники кладуться предметні шибки. 6. Папір фільтрувальний. 7. Склянка (заввишки з довжину предметного скла) для споліскування, пофарбованого препарату. 8. Барвник. a. Еозиновокислий метиленовий синій за Май-Грюнвальдом або Лейшманом (готовий розчин). b. Розчин Гімза (метиленовий синій та еозин). Готові розчини цих барвників бувають у лабораторіях: медичних чи біологічних, де фарбують мазки крові або вагінальні мазки. 9. Скляні судини (маленькі бюксики або склянки) для барвника та дистильованої води.
Техніка отримання та фарбування мазків.
1. У чашці Петрі (чи Коха) чи дні блюдця, на " санки " чи сірники покласти чисто вимите і знежирене сухе предметне скло. 2. У чисту піпетку набрати її обсягу дистильованої води. 3. Ввести піпетку у піхву суки (по можливості не торкаючись його зовнішнього краю), випустити воду і відразу набрати рідину з піхви в піпетку (промити піхву). 4. Вміст піпетки відразу нанести на середину приготовленого предметного скла. 5. Висушити мазок на повітрі, прикривши від пилу чашку Петрі (або Коха) або блюдце фільтрувальним папером. 6. Набравши в окрему піпетку барвник, нанести 5-6 крапель на висушений мазок і залишити на 3-5 хвилин. 7. Нанести на мазок 5 - 6 крапель дистильованої води так, щоб мазок вода покривала повністю, залишити ще на 5 - 10 хвилин, потім злити розчин і занурити скло з забарвленим мазком на дуже короткий термін (до 1 - 1,5 хв.)стаканчик, наповнений доверху дистильованою водою. Акуратно обсушити між листками фільтрувального паперу. 8. Маркувати мазок. На краю (будь-якому, тому що посередині розташовується мазок) предметного скла написати: № препарату, кличку собаки, дату і порядковий день пустування. Напис краще виконати тушшю та залити клеєм БФ. Забарвлення вдається краще на свіжих мазках, але цілком допустиме забарвлення мазків і 2-х - 4-х денної давності. Препарат готовий, розглядати його слід під мікроскопом при 10 - 40-кратному збільшенні. На забарвленому препараті (за Май-Грюнвальдом або Лейшманом) "лусочки" пофарбовані в червонуватий колір, цитоплазма епітеліальних клітин - у блакитний колір, а ядра - у синій. Лейкоцити забарвлюються у синій, майже фіолетовий колір. При забарвленні по Гімза: "лусочки" темно-синього кольору, цитоплазма - блакитна, ядра - сині. Лейкоцити – темно сині. Інтенсивність фарбування клітинних елементів може залежати від свіжості барвника.
Дозволю собі коротко зупинитися на відмінностях цитологічної картини різних стадіях статевого циклу. Як уже говорилося вище, весь цикл становить чотири стадії або фази, з яких нас цікавить лише три - предтечка, течка і післятечка (проетрус, ерус і метаерус), четверта стадія - спокій - складає проміжок між двома пустівками і характеризується повною інактивністю статевої системи. 1. Фаза предтечки, або підготовча фаза характеризується кров'янистими виділеннями, іноді рясним, в яєчниках собаки тим часом відбувається інтенсивний розвиток фолікулів. Собака грайлів, уважно досліджує всі сечові мітки собак, постійно сідає, залишаючи буквально крапельки сечі, що містять специфічний запах, що приваблює кабелів. У крові швидко росте і досягає піку за 1 – 2 дні докінця проетрусу концентрація естрогену. Картина піхвового мазка на початку фази характеризується великою кількістю округлої форми епітеліальних клітин із досить великими ядрами. Наприкінці фази (9 - 10 день від початку пустування при нормальному статевому циклі) - в мазку з'являються окремі ороговілі без'ядерні багатокутні клітини, так звані "лусочки". Загалом фаза триває від 9 до 11 днів. 2. Фаза власне тічки характеризується майже безбарвними чи блідо-рожевими виділеннями з піхви. У цій фазі відбувається розрив зрілих фолікулів і викидання яйцеклітин, які за кілька годин потрапляють у яйцеводи, де затримуються до 7 - 8 днів; тут же відбувається зустріч зі сперматозоїдами (у разі в'язки) та запліднення. Найбільш високою здатністю до запліднення яйцеклітини мають у перші 5 - 6 днів. У крові різко підвищується рівень гормону естрадіолу, що призводить до збільшення кількості піхви повністю ороговіли епітеліальних клітин - "лусочок". Оптимальним терміном для в'язки слід вважати той день, коли на препараті мазка піхви переважна більшість клітинних елементів представлена лусочками. Ця фаза триває від 2 до 10 днів. 3. Фаза післятечки або гальмування. Виділення з піхви ще можуть мати місце, вони, як правило, безбарвні, але можуть бути і блідо-рожевими, сука стає спокійною та агресивною по відношенню до собак. На місці фолікулів, що лопнули, утворюються жовті тіла, що виробляють гормон прогестерон, що пригнічує овуляцію. Непліднені яйцеклітини руйнуються і гинуть. Піхвовий мазок демонструє незначну кількість "лусочок", безліч молодих епітеліальних клітин, округлих з великими ядрами. Хорошим показником цієї фази є наростаюче число лейкоцитів. Ця фаза займає у статевому цикліблизько 10 - 14 днів і поступово перетворюється на стадію повного генеративного спокою.
Таким чином, картина вагінального мазка досить чітко характеризує та відображає фізіологічний стан суки та її готовність до спаровування. А також дозволяє оцінити за низкою характеристик особливості репродуктивних циклів сімейств, можливість виявити причини "хибної вагітності", малої плодючості тощо.
Фотографії вагінальних мазків (під мікроскопом при збільшенні 40), відповідні певній фазі статевого циклу суки (предтечка - prooestrus, течка - oestrus, післятечка - metaoestrus, спокій - dioestrus).
Всі фотографії можна побачити на нашому форумі на сторінці: