Роль медичного лабораторного техніка у приготуванні поживних середовищ у сучасній
Склад живильних середовищ для культивування мікроорганізмів. Фізіологічні функції елементів, що використовуються для їхнього приготування. Якісна перевага промислових поживних середовищ. Технологія та багатостадійний контроль якості їх виробництва.
Надіслати свою гарну роботу до бази знань просто. Використовуйте форму нижче
Студенти, аспіранти, молоді вчені, які використовують базу знань у своєму навчанні та роботі, будуть вам дуже вдячні.
Розміщено наhttp://www.allbest.ru/
Міністерство охорони здоров'я Хабаровського краю
Крайова державна бюджетна освітня установа
середньої професійної освіти
«Хабарівський державний медичний коледж»
ЦМК «Фармація та лабораторна діагностика»
Курсова робота
Роль медичного лабораторного техніка у приготуванні поживних середовищ у сучасній мікробіологічній лабораторії
Хабаровськ 2014
Зміст
1. Склад різних поживних середовищ
2. Приготування різних поживних середовищ
2.1 Джерела елементів, що використовуються для приготування живильних середовищ
2.2 Основні принципи виготовлення поживних середовищ
3. Якісна перевага промислових поживних середовищ
3.1 Значення промислового виробництва середовищ
3.2 Виробництво / Технології
3.3 Багатостадійний контроль якості
Список використаних джерел
Метою курсової роботи є розгляд факторів, що впливають на якість приготування поживних середовищ. Виходячи із зазначеної мети, можна виділити завдання,поставлені у курсовій роботі:
1. На основі аналізу літератури виявити особливості складу різних поживних середовищ.
2. Виявити особливості приготування різноманітних поживних середовищ.
3. Довести якісну перевагу промислових поживних середовищ.
Поживні середовища без перебільшення можуть вважатися одним із основних компонентів мікробіологічних досліджень. Сучасна мікробіологія без поживних середовищ існувати неспроможна, які якість багато чому визначає інформативність, точність мікробіологічного аналізу. Число включених до ряду посібників поживних середовищ (з урахуванням модифікацій) перевищило 5000 прописів, причому ця цифра навряд чи може вважатися повною.
З кожним роком проблема мікробіологічних поживних середовищ набула подальшого розвитку. Впровадження протимікробних лікарських препаратів, в першу чергу антибіотиків, зажадало широкої гами поживних середовищ для культивування продуцентів, визначення антибіотичних речовин у ферментаційних рідинах, субстанціях, лікарських формах та в біологічних субстратах (при вивченні фармакокінетики антибіотиків), а також для визначення чутливості засобам. З особливою гостротою було поставлено завдання стандартизації поживних середовищ, багато з яких містять недостатньо стандартні або просто компоненти, що погано стандартизуються. У цьому дедалі більше заявляють себе багатокомпонентні синтетичні поживні середовища, одним із родоначальників яких можна назвати Герберт (1961 р.). Їх широке застосування поки що стримують технологічні та економічні питання, але перелік середовищ, що містять частково або повністю стандартні компоненти, неухильно збільшується. Тим не менш, проблема мікробіологічнихпоживних середовищ, у тому числі для клінічної практики, залишається актуальною, а ситуація, що склалася, має ряд негативних моментів. Якість серійних зразків у деяких випадках залишає бажати кращого, а внутрішньолабораторний контроль поживних середовищ, як система, поки що не впроваджено. Викликає жаль вузьке коло номенклатури середовищ, про деякі з них, ефективні, з високою вибірковістю ростових властивостей, неправомірно забувають. Безперечно, це найчастіше пов'язано з економічними причинами. Але, у ряді випадків, негативну роль відіграє інформаційний вакуум.
1. Склад різних поживних середовищ
Поживні середовища для культивування мікроорганізмів повинні містити всі елементи, необхідні для їх зростання, у певних концентраціях, певній хімічній формі та в тому кількісному співвідношенні, в якому вони знаходяться у клітинах.
М'ясо віджимають, екстракт проціджують через марлю з шаром вати, кип'ятять протягом 30 хв для згортання колоїдних білків і фільтрують двічі (вперше через марлю з ватою, другий - через паперовий фільтр). Фільтр доливають водою до 1 л, розливають у колби, закривають ватяними пробками і стерилізують при 120°С 20 хв (корки колб закривають зверху ковпачками з паперу). Ватні пробки повинні бути щільними, оскільки вони є фільтром, що перешкоджає проникненню бактерій із повітря після стерилізації. М'ясний бульйон може бути використаний у будь-який час для приготування відповідних середовищ. Якщо їх готують одразу, то попередня стерилізація зайва. Нерідко в лабораторних умовах м'ясний настій кип'ятять разом з м'ясом, а потім віджимають м'ясо. Бульйон виходить гарної якості. Якщо бажано мати м'ясний бульйон особливо високої поживності, під час наполягання м'яса з водою додають трохи пепсину тапідкислюють бульйон соляною кислотою.
Пепсин додатково гідролізує білкові сполуки м'яса, і кількість поживних речовин, що засвоюються бактеріями, зростає. М'ясо можна замінити м'ясним екстрактом, беручи по 5 г на 1 л середовища. Для приготування м'ясопептонного бульйону до 1 л м'ясного бульйону додають 5-10 г пептону (пептон - перший продукт гідролізу білка з високою молекулярною масою) для підвищення калорійності середовища та 5 г кухонної солі з метою створення осмотичної активності. Середовище нагрівають до розчинення пептону, постійно помішуючи. Потім встановлюють нейтральну або слаболужну реакцію середовища, приливаючи 20%-ний розчин Na2CO3 (до посиніння вологого червоного лакмусового папірця; при цьому фенолфталеїн ще не показує лужну реакцію - при додаванні його до середовища у фарфоровій чашці рожеве забарвлення не виявляється). Зручно використовувати індикатор бромтімолблау. 1-2 краплі його вносять скляною паличкою у порцелянову чашку і додають краплю бульйону.
У нейтральному середовищі бромтимолблау пляшково-зелений, у кислому – жовтий, у лужному – синій. Після встановлення реакції середовище знову кип'ятять 5-10 хв і білки, що згорнулися від зміни реакції, відфільтровують через паперовий фільтр без освітлення бульйону або освітлення його білком. М'ясо-пептонний прозорий бульйон розливають у пробірки, закривають ватними пробками і стерилізують при 120°С протягом 20 хв. М'ясо-пептонний агар (МПА). До 1 л м'ясо-пептонного бульйону додають 15-20 г дрібно нарізаного агар-агару.
Середовище нагрівають до розчинення агару (температура плавлення його 100°С, застигання -40°С), встановлюють слаболужну реакцію середовища 20% розчином Na2CO3 і через воронки розливають у пробірки (але 10 мл для розливок в чашки - агар стовпчиком і по 5 мл для отримання скошеного, похилого агару).При розливі агару необхідно стежити, щоб краї пробірки були сухими, інакше пробки прилипають до скла. Пробірки з середовищем стерилізують автоклаві при 120°С протягом 20 хв. М'ясо-пептонна желатину (МПЗ). В 1 л м'ясопептонного бульйону перешкодять 100-150 г желатини. Температура плавлення залежить від відсоткового вмісту у середовищі. 10%-ва желатину плавиться при 24 ° С, 15%-паю - при 25 °. У літню пору середовища готують, додаючи 15% желатини. Після розчинення желатини при обережному нагріванні в середовищі встановлюють слаболужну реакцію (як і для МПБ і МПА), кип'ятять протягом 5хв, потім охолоджують до 40-50°С. Одночасно яєчний білок збивають з невеликою кількістю води, вливають його в охолоджене середовище желатину, добре збовтують і знову нагрівають. Середовище після випадання білків стає прозорим. Її фільтрують через гарячу вирву, розливають у пробірки і стерилізують у кип'ятильнику Коха текучим паром, прогріваючи середу по 30 хв через 24 год 3 рази.
Картопляний агар. 200 г очищеної та промитої водою картоплі нарізають скибочками, заливають 1 л водопровідної води, варять 30 хв. Відвар фільтрують через вату та доводять до початкового обсягу. До отриманої рідини додають 2% агару, кип'ятять до розчинення і встановлюють нейтральну реакцію середовища (рп 7,0). Середовище стерилізують при 1 атм протягом 20 хв. Пивне сусло. Зерна ячменю замочують у холодній воді та пророщують при 35°С. Після того як паростки будуть вдвічі більшими за довжину зерна, останнє висушують до повітряно-сухого стану (можна при слабкому підігріванні) і отримують солод. Для приготування сусла солод розмелюють і 250 г його беруть на 1 л води. Суміш підігрівають при 57 С (для кращого виділення ферменту амілази) до зникнення реакції на крохмаль (синє фарбування з йодом).
Зворотодержують сепаруванням молока, нагрітого до 34°С. Жир можна видаляти і за відстоювання молока. При стерилізації молока слід враховувати, що його не можна тривалий час витримувати в автоклаві, оскільки лактоза (молочний цукор), що міститься в молоці, може карамелізуватися. Знежирене молоко розливають у стерильні пробірки та витримують при 115°С (тиск 0,5 атм) 15 хв. Перед стерилізацією кислотність обрата не повинна перевищувати 22 ° Тернера, інакше молоко згорнеться. Після стерилізації його витримують три доби в термостаті при 30°З, щоб спровокувати розвиток спороутворюючих та інших стійких до нагрівання форм. Через 3 дні кожну пробірку з молоком проглядають і пробірки, в яких розвинулися мікроорганізми, вибраковують. При стерилізації в автоклаві іноді спостерігається побуріння молока внаслідок карамелізації молочного цукру та пептонізації казеїну. За тривалої стерилізації на дно пробірки випадає осад казеїну, який може частково пептонізуватися. Перегріте побуріле молоко як середовище використовувати не можна.
Дріжджові середовища. Дріжджова вода. 50-100 г сухих дріжджів розмішують в 1 л води, кип'ятять 10 хв, фільтрують через паперовий фільтр і стерилізують текучим паром по півгодини протягом трьох днів щодня. Дріжджовий автолізат. 200 г пресованих дріжджів розводять у 1 л води, додають 2 г Na2HPO4, 1 н. розчин NaOH (до рН 6,1) та 5 мл хлороформу, витримують при 37°С дві доби, доводять до рН 7,4, кип'ятять 30 хв, фільтрують через паперовий фільтр, розливають у посуд і стерилізують при 115°З півгодини. Дріжджовий екстракт. 1 кг пресованих дріжджів розводять в 1 л води, суміш кип'ятять 1 год, тричі відфільтровують через паперовий фільтр і стерилізують при 115 С 30 хв.
2. Приготування різних поживних середовищ