Сельскохозяйственная биология 6-2010 Глазко
Сільськогосподарська біологія, 2010 № 6, с. 30-34.
ГЕНОТИПІЧНІ ТА ПАРАТИПІЧНІ ФАКТОРИ, що впливають на результати мікроядерного тесту
Т.Т. ГЛАЗКО 1, Ю.А. СТОЛПІВСЬКИЙ 2, В.І. ОКО 1
Виконували порівняльний аналіз частоти еритроцитів з мікроядрами в периферичній крові у монгольської місцевої великої рогатої худоби і яків, що розводяться в різних еколого-географічних районах Монголії, а також у їх міжвидових гібридів. Показано, що на частоту цитогенетичних аномалій суттєво впливає вік тварини, умови довкілля, видова приналежність. Виявлено, що у міжвидових гібридів частка еритроцитів з мікроядрами у 2-3 рази вища, ніж у тварин батьківських видів у тих самих вікових групах та умовах середовища. Робиться висновок про необхідність урахування розглянутих ендо- та екзогенних факторів, що впливають на результати мікроядерного тесту, при його використанні для біоіндикації екотоксичного забруднення довкілля сільськогосподарських видів тварин і джерел продовольства тваринного походження.
Ключові слова: цитогенетичні аномалії, мікроядерний тест, міжвидові гібриди, еколого-гографічні фактори.
Зростання забрудненості навколишнього середовища генотоксикантами призводить до необхідності пошуку методів контролю, оскільки отримані в таких умовах продукти харчування можуть бути небезпечними для людини. Традиційніметоди на основі визначення вмісту забруднюючих речовин розроблені тільки для обмеженої кількості токсикантів і не враховують можливість їхньої кумулятивної дії на біологічні об'єкти. Отже, потрібно розробляти методи індикації загальних екотоксичних ефектів з використанням біоіндикаторних видів ссавців, що є особливо важливим для тестування безпеки умов виробництва продовольства. Як такі біоіндикатори служать сільськогосподарські види тварин (1, 2), оскільки вони контактують з тими ж факторами середовища, що і людина, одночасно будучи джерелом продовольчих ресурсів.
При оцінці екотоксичних ефектів зазвичай розраховують частоту народження різних типів цитогенетичних аномалій у клітинах крові — показника, найбільш доступного і придатного для аналізу біологічного матеріалу.
Як правило, при визначенні генотоксичних ефектів у клітинах периферичної крові аналізують частоту цитогенетичних аномалій у метафазних пластинках (поліплоїдні, анеуплоїдні клітини, метафази з різними типами хромосомних аберацій). Однак при подібному підході необхідне культивування в поживному середовищі з додаванням стимуляторів клітинного поділу та антибіотиків, оскільки клітини периферичної крові спонтанно діляться дуже рідко. Така попередня обробка може спотворювати результати оцінки вихідних мутаційних спектрів, потенційно індукуючи додаткові мутації, крім того, потребує більше часу та ресурсів. Тому використання з подібною метою різних варіантів мікроядерного тесту перспективніше.
Ми порівняли вплив віку, видової приналежності, міжвидової гібридизації та умов проживання на показники мікроядерного тесту у великої рогатої худоби, яків та їх міжвидових.гібридів.
Методика. У 2009-2010 роках виконували дослідження мазків периферичної крові місцевої монгольської великої рогатої худоби (13 гол.) та яків (14 гол.) у віці 3-6 років з різних еколого-географічних регіонів Монголії (північний захід Монголії, район Хубсугул, біосферний заповідник, південь Монголії, район, що примикає до пустелі Гобі, зона ризикованої тваринництва), а також 2-місячних телят місцевої мон-гольської великої рогатої худоби (4 гол.) та міжвидових гібридів (хай-накі - нащадки схрещування корів і яків, 7 гол.), що вирощуються фермерами в районі Хубсугул (матеріал зібраний в експедиції 2008 року).
При приготуванні мазків на предметному склі краплю периферичної крові змішували з краплею фізіологічного розчину, рівномірно розподіляли, висушували, фіксували метиловим спиртом протягом 30 хв і фарбували барвником Гімза («Merk», Німеччина). Число еритроцитів з мікроядрами визначали для 3000 клітин і виражали з розрахунку на 1000 клітин (‰). Препарати досліджували під бінокулярним мікроскопом (Motik, Китай) з вбудованим цифровим фотоапаратом (збільшення x1000).
Статистичну достовірність міжгрупових відмінностей оцінювали за t-критерієм Стьюдента (tS).
Результати. Найменшу частоту еритроцитів з мікроядрами (табл.) виявили у яків та місцевої монгольської великої рогатої худоби із зони ризикованої тваринництва, що примикає до пустелі Гобі (відповідно 0,3±0,2 та 1,8±0,6 ‰). У великої рогатої худоби порівняно з якими виявляються дещо знижені частоти народження еритроцитів з мікроядрами, і ці частоти істотно нижчі, ніж у раніше досліджених нами порід великої рогатої худоби різних напрямків продуктивності (9, 10).
Частота еритроцитів з мікроядрами була достовірно вищою (P 1 , Yu.A.Столповський 2 , В.І. Глазко 1
Проведено порівняльний аналіз частот еритроцитів з мікроядрами в периферичній крові монгольської аборигенної породи великої рогатої худоби та яків, що розмножуються в різних еколого-географічних районах Монголії, а також міжвидових гібридів між ними. Показано, що на частоти еритроцитів з мікроядрами суттєвий вплив справляли вік тварин, стан середовища та видова приналежність. Виявлено, що у міжвидових гібридів частота еритроцитів з мікроядрами в 2-3 рази вища, ніж у тварин батьківського виду в тих же вікових групах і умовах середовища. При використанні еритроцитарних частот з мікроядрами для біоіндикації екотоксичного забруднення середовища проживання видів сільськогосподарських тварин та джерел харчових продуктів тваринного походження зроблено висновок про необхідність врахування в результатах мікроядерних досліджень впливу зовнішніх і внутрішніх факторів. .
Ключові слова: цитогенетичні тварини, мікронуклеусний тест, міжвидові гібриди, еколого-географічні фактори.
1 ФГОУ ВПО український державний аграрний університет РГАУ-МСХА ім. К.А. Тимірязєва, 127550 г. Москва, ул. Тимірязєва, 49, e-mail: [email protected]; 2 Учреждение украинской академии наук Інститут загальної генетики ім. Н.И. Вавілова РАН, 119991 р. Москва, ул. Губкіна, 3, e-mail: [email protected]