Штам бактерій proteus vulgaris № 25, що використовується для виготовлення імунних препаратів, Банк
Винахід відноситься до галузі ветеринарної біотехнології. Штам бактерій Proteus vulgaris 25 має морфологічні та культуральні властивості, властиві роду Proteus. Ферментує з утворенням кислоти та газу глюкозу, рамнозу, мальтозу, сахарозу, не ферментує сорбіт, інозит, маніт, гідролізує сечовину, утворює індол та сірководень, реакція Фогес-Проскауера – негативна. За серологічними властивостями штам аглютинується з адсорбованими протейними Про і Н сироватками як Proteus vulgaris О16 та Н6. ЛД50 для білих мишей внутрішньочеревно 5,8 • 10 8 живих мікробних клітин. При пероральному введенні новонародженим телятам у концентрації 10 млрд. мікро. клітин на 2-3 добу викликає ознаки діареї, але в 4 добу настає загибель 40% інфікованих тварин. Лізується колібактерійним бактеріофагом. Штам Proteus vulgaris 25 стійкий до тетрацикліну, пеніциліну, стрептоміцину, поліміксину, левоміцетину, гентаміцину, еритроміцину, пефлоксацину. Чутливий до сизоміцину, офлоксацину, піперациліну, рокситроміцину. Вихід мікробної маси становить 25-30 млрд. мікро. тіл на 1 мл. Штам придатний для виготовлення імунних препаратів проти протейних інфекцій сільськогосподарських тварин.
Пропоноване винахід відноситься до ветеринарної біотехнології і може бути використане для отримання імунних препаратів проти збудників гострих кишкових інфекцій сільськогосподарських тварин.
Серед умовно-патогенних ентеробактерій найчастішими збудниками ГКІ (гострих кишкових інфекцій) є Proteus mirabilis та Proteus vulgaris.
Умовно-патогенні ентеробактерії є природними мешканцями кишечника людини та багатьох тварин, у тому числісільськогосподарських.
Умовно-патогенні ентеробактерії поширені в природі: доведено їх постійне перебування у воді відкритих водойм, особливо протеїв.
За сприйнятливістю можна виділити – групу ризику – це новонароджені, ослаблені діти, особи з хронічними недугами, пацієнти, які зазнавали антибактеріальної терапії чи хірургічних втручань. Зі сказаного вище очевидною проблема боротьби з ентеробактеріями роду Proteus (1).
Відомий штам бактерій Proteus vulgaris 154, який використовується як тест-об'єкт для визначення токсиноутворюючої здатності бактерій роду Proteus.
Штам бактерій Proteus vulgaris 154 характеризується такими властивостями.
Культурально-морфологічні ознаки. На середовищі Плоскірєва утворюються ізольовані, напівпрозорі колонії жовтуватого відтінку, з рівними краями, кремоподібної консистенції. Діаметр колоній 2-3 мм.
На середовищах Левіна, Ендо, Вільсон-Блера, кров'яному агарі, слаболужному МПА росте у вигляді ніжного напівпрозорого нальоту (феномен роїння).
На рідких середовищах дає гомогенне помутніння середовища.
Поліморфна грамнегативна рухлива паличка. Суперечка та капсул не утворює.
Фізико-біохімічні властивості. Оптимум зростання 37 o C, оптимум рН 72-74.
Ферментативні властивості. Окислює та ферментує глюкозу, розщеплює сечовину, утворює індол та сірководень, не ферментує лактозу та дульцит, не розщеплює малонат натрію, розщеплює мальтозу та сахарозу, не декарбоксилює орнітин, не має цитохромоксидазної активності. Дає позитивну реакцію з метиловим червоним та негативну реакцію Фогес-Проскауера, дезамінує фенілаланін, не утворює аргінінгідролазу та лізиндекарбоксилазу.
Антигенна формула 047: Н1 (схема Кауфмана-Перч).
Здатний викликати ранню (через 6 годин) загибель білих мишей при інтраназальному зараженні внаслідок серозно-геморагічного набряку легень.
ЛД50 при внутрішньочеревному введенні білим мишам у напіврідкому агарі становить 625 тис. мікро. тел.
Штам викликає гемоліз баранячих еритроцитів в агарі з діаметром зони гемолізу до 10 мм.
Зберігання культури - в товщі 1% голодного агару під шаром стерильного вазелінового масла або на середовищі Дорсе.
Біологічні властивості повністю втрачаються після прогрівання протягом 30 хв. при 56-60 o С.
Продукує термолабільні речовини типу холероподібного ентеротоксину (2).
У завдання наших досліджень входило отримати штам Proteus vulgaris, призначений для отримання імунних препаратів.
Запропоновано штам бактерій Proteus vulgaris 25, збудник протейної інфекції, віднесений до сімейства Enterobacteriaceae, до роду Proteus, виділений у НДЛ інфекційної патології та біотехнології МГАВМіБ ім. К.І. Скрябіна з органів новонародженого теляти у 1987 році.
Місцем зберігання виробничого штаму Proteus vulgaris 25 збудника протейної інфекції визначено колекцію НДЛ інфекційної патології та біотехнології МГАВМіБ ім. К.І. Скрябіна (109472, Москва, Скрябіна, 23), дублююче зберігання НДІ мікробіології МО Україна (610024, Україна, м. Кіров, Жовтневий пр-т, 121. в/ч 23527).
Запропонований виробничий штам бактерій Proteus vulgaris 25 має такі властивості.
Морфологічні ознаки Грамнегативні палички, розташовані поодиноко. Рухливі.
Культуральні характеристики. На щільних живильних середовищах утворює характерне зростання. На МПА має властивість "роїння", на Плоскірєва - напівпрозорі колонії рожевого кольору з перламутровим.відтінком. На МПБ рівномірне помутніння з утворенням надосадової плівки. На 5%-ном кров'яному агарі утворює зони гемолізу. Ферментативні властивості. Ферментує з утворенням кислоти та газу глюкозу, рамнозу, мальтозу, сахарозу, не ферментує сорбіт, інозит, маніт, гідролізує сечовину, утворює індол та сірководень, реакція Фогес-Проскауера – негативна.
Серологічні властивості. Аглютинується з адсорбованими протейними Про і Н сироватками виробництва НДІВС ім. Мечникова як Proteus vulgaris O16 та Н6.
Патогенні властивості. ЛД50 для білих мишей внутрішньочеревно 5,8 • 10 8 живих мікробних клітин.
Штам Proteus vulgaris 25, патогенний для телят, при пероральному зараженні 10 млрд. суспензії мікробних клітин через 8-10 годин після інфікування відзначали пригнічення загального стану, підвищення температури тіла і на 2-3 добу у тварини спостерігали діарею різного ступеня, а в деяких - профузний пронос і на 4 добу 40% інфікованих тварин упало.
Лізується колібактерійним бактеріофагом.
Стійкий: до тетрацикліну, пеніциліну, стрептоміцину, поліміксину, левоміцетину, гентаміцину, еритроміцину, пефлоксацину.
Чутливий: до сізоміцину, офлоксацину, піперациліну, рокситроміцину.
Застосовується спосіб зберігання та підтримки штаму. У ліофілізованому стані під вакуумом у герметично запаяних ампулах при мінус 18. мінус 20 o З після пасажу через організм білих мишей.
Періодичність пересіву на живильних середовищах 15-20 діб.
Умови транспортування. У ліофілізованому стані під вакуумом у герметично запаяних ампулах.
Термін зберігання 10 років.
приклад. Приготування посівної субкультури проводять у два етапи. Спочатку проводять вирощування на МПА протягом 48 годин за температури 36. 38 oПотім пересівають на рідке живильне середовище на основі ферментативного гідролізату м'яса в бутлі і культивують при температурі 36. 38 o З аерацією стерильним повітрям з розрахунку 4-6 обсягів на об'єм живильного середовища протягом 24-48 год.
Вихід біомаси у своїй становить 20. 30 млрд. мікробних клітин.
Вакцина, виготовлена з використанням штаму Proteus vulgaris 25, забезпечує захисний ефект від зараження вірулентними епізоотичними штамами на 5-7 добу.
Вакцина апробована з позитивним результатом з 1995-2001 р. на території України: Ставропольський, Краснодарський краї, Московська та Тульська області та країнах СНД: Білорусь, Киргизстан, Узбекистан.
Збереження поголів'я становить 95-99%.
Запропонований штам Proteus vulgaris 25 має високу імуногенну активність і може бути використаний як один з антигенних компонентів в асоційованій вакцині проти гострих кишкових інфекцій молодняку сільськогосподарських тварин.
Джерела інформації 1. Кн. "Посібник з епідеміології інфекційних хвороб", вид. "Медицина", т. 2, 1993, стор 78-80.
2. МКІ 4 А.С. Україна 1497210, З 12 N 1/20; З 12 R 1/37, 1989.
формула винаходу
Штам бактерій Proteus vulgaris ВГНКИ № 25 МГАВМ та Б-ДЕП, що використовується для виготовлення імунних препаратів.
MM4A Дострокове припинення дії патенту України на винахід через несплату у встановлений термін мита за підтримку патенту в силі