Спосіб діагностики початкової стадії хронічної ниркової недостатності
Власники патенту UA 2492481:
Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема лабораторної діагностики захворювань нирок, і може бути використане при обстеженні хворих для діагностики початкової стадії хронічної ниркової недостатності.
Перші симптоми, пов'язані з нирковою недостатністю, можуть виникнути порівняно пізно. У початковій стадії хронічної ниркової недостатності клінічні прояви зводяться в основному до симптоматики основного захворювання.
Діагностика хронічної ниркової недостатності, особливо у пізні стадії захворювання, труднощів не викликає. Важливо своєчасно виявити початкові ознаки хронічної ниркової недостатності та правильно розпізнати її при латентній, атиповій течії – при прояві екстремальних порушень очей, шкіри, суглобів та інших систем організму.
Алгоритм діагностики хронічної ниркової недостатності виявляється у показниках швидкості клубочкової фільтрації та відносної щільності сечі. Так, їх порівняльна характеристика (тобто зниження швидкості клубочкової фільтрації до 70 мл/хв та максимальної величини відносної щільності сечі до 1,018) протягом 3 місяців може говорити про хронічну ниркову недостатність І ступеня, при цьому креатинемія не повинна перевищувати 0,35 ммоль/ л. Найбільш достовірним маркером наступних стадій хронічної ниркової недостатності є концентрація креатиніну в крові: при хронічній нирковій недостатності II ступеня - 0,35-0,65 ммоль/л, при хронічній нирковій недостатності III ступеня - понад 0,65 ммоль/л. Для виключення помилок у постановці діагнозу слід орієнтуватися на величини клубочкової фільтрації, яка при хронічній нирковій недостатності II ступеня становить 35-15 мл/хв, при хронічній нирковій недостатності III ступеня - нижче 15 мл/хв. Також важливо визначити рівень сечовини вкрові, гемоглобіну, еритроцитів для оцінки екскреторної функції нирок (http://www.stomed.ru/directions/articles.php?article_>
Але концентрація креатиніну у крові може служити ідеальним маркером патології нирок, оскільки рівень креатиніну варіює залежно від багатьох неренальних чинників.
Це пов'язано з тим, що синтез креатиніну многоцепочный, тобто. відбувається у різних органах (печінка, м'язи, міокард та клітини мозку), і залежить від їх функціонального стану і не може бути точним маркером ниркової дисфункції.
Крім того, підвищення креатиніну починається лише після зниження швидкості клубочкової фільтрації на 50% і нижче. Ранніх стадій зниження швидкості клубочкової фільтрації креатинін «не бачить».
Недоліком відомого способу є невисока точність діагностики початкових стадій хронічної ниркової недостатності, обумовлена малою інформативністю показників нирок, що осморегулюють, під впливом велоергометрії і складність її інтерпретації. До того ж, спосіб може вважатися небезпечним для пацієнта, оскільки на тлі 18-годинного обмеження рідини відбувається згущення крові, що погіршує функціональний стан нирок.
Недолік цього способу полягає в тому, що функціональний стан серцево-судинної системи є непрямою ознакою раннього порушення роботи нирок. Вміст альфа-токоферолу в мембранах нейтрофілів не може повністю відбивати стан антиоксидантного захисту ліпідного біошару клітинних мембран і, отже, ранні ренальні порушення, що знижує точність діагностики початкових стадій хронічної ниркової недостатності.
До того ж синтез церулоплазміну в печінці здійснюють гепатоцити, швидкість цього процесу регулюється гормонами, тому данийпоказник може лише побічно вказувати на ренальну дисфункцію. Необхідно відзначити і високу вартість цього методу.
Завданням цього винаходу є підвищення точності дослідження, а також здешевлення та скорочення часу дослідження.
Технічним результатом, що досягається в результаті досягнення поставленого завдання, є діагностування початкової стадії хронічної ниркової недостатності шляхом визначення концентрації еритропоетину в плазмі та визначення закономірності синтезу еритропоетину перитубулярними канальцями нирок.
Заявляється сукупність ознак дозволяє підвищити точність і скоротити час дослідження шляхом визначення концентрації еритропоетину в плазмі крові та залежно від її зміни діагностувати ступінь ішемії нирок.
Це пов'язано з тим, що синтез і секреція еритропоетину в нирках визначаються рівнем забезпечення киснем тканин цих органів. До рівня кисню в нирковій тканині чутливий гемсодержащий білок - цитохром b, що входить складовою частиною НАДФ-залежну оксидазу пери-і тубулярних клітин. При нормальному рівні парціального тиску O2 у тканині нирки радикали кисню, що продукуються оксидазою, насамперед перекис водню, перешкоджають формуванню в нирковій тканині «індукованого гіпоксією фактора-1 (ІГФ-1)», що стимулює транскрипцію еритропоетинової іРНК і синтез. При зниженні кисневого забезпечення тканини нирок (pO2 до 20-40 мм рт.ст.) продукція оксидазою перекису водню зменшується. Наростає активація ІГФ-1 у цитозолі та його переміщення в ядро клітини, де ІГФ-1 специфічно зв'язується з ДНК, викликаючи експресію гена еритропоетину.
Таким чином, за кількісним вмістом еритропоетину в плазмі з високою точністю можнадіагностувати початкову стадію хронічної ниркової недостатності
Спосіб здійснюють наступним чином: пунктують ліктьову вену за допомогою закритої системи для взяття крові, виробляють забір венозної крові (система дозволяє брати кров безпосередньо в пробірку), отриману кров центрифугують протягом 10 хвилин. Автоматичний аналізатор Іммулайт - прилад, що використовує "закриту" імунолюмінесцентну запатентовану технологію - антитіла мічені люмінофором, має високу чутливість і точність. Тест-одиниця обробляється автоматично (додавання реагентів, високошвидкісне обертання тест-одиниці, вимірювання інтенсивності світіння). Турбо-режим дозволяє одержати результати протягом 15 хвилин. Метод дослідження: ферментативно посилена хемілюмінесценція.
За результатами вмісту еритропоетину в плазмі діагностують наявність або відсутність початкової стадії хронічної ниркової недостатності, при цьому початкова стадія діагностується при значенні еритропоетину вище 17,6 МО/л.
Було обстежено 76 пацієнтів із хронічною нирковою недостатністю та виявлено, що середні значення еритропоетину у хворих з 1-2 стадіями ХНН збільшені вдвічі порівняно з групою контролю. На 3 стадії хронічної ниркової недостатності рівень еритропоетину утримується на високому рівні. На 4 стадії ХНН відбувається різке падіння рівня показника, що вивчається, що, очевидно, свідчить про настання стадії «декомпенсації» вироблення еритропоетину.
Результати обстеження представлені у таблиці.
| Стадія ХНН | Середнє значення еритропоетину, МЕ/л | Квартальні інтервали |
| Здоровий пацієнт | 10,4 | М-7,76 [6,58; 9,47] |
| 1 стадія | 17,6 | М-13,7 [9,08; 16,4] |
| 2 стадія | 17,2 | М-12,8 [9,15; 24,8] |
| 3 стадія | 16.6 | М-12,9 [9,3; 16,5] |
| 4 стадія | 6,7 | М-6,83 [5,52; 8,7 |
Таким чином, можна простежити закономірність синтезу еритропоетину перитубулярними канальцями нирок при ішемії, що наростає, у хворих з хронічною нирковою недостатністю.
Стадія «наростаючої» компенсації відповідає початковим ішемічним ураженням інтерстиціальних клітин, що виробляють еритропоетин. За рахунок активації ІГФ-1 у цитозолі та його переміщення в ядро клітини стимулюється експресія гена еритропоетину. Стадія «стабілізованої» компенсації (стадія «плато») також підтримує рівень еритропоетину на досить високому рівні, що забезпечує процеси гемопоезу. Нарешті, стадія «декомпенсації» за рахунок виснаження компенсаторних механізмів дає змогу чітко простежити падіння рівня еритропоетину через порушення взаємодії між канальцями, перитубулярними фібробластами та ендотелією, необхідного для здійснення нормального гемопоезу.
Посилення ішемії негативно впливає як на функціональний стан, а й у життєздатність епітелію перитубулярных капілярів. На цьому фоні в мозковій речовині нирки збільшується концентрація лактату з паралельним зсувом pH в кислу сторону та подальшим посиленням гіпоксії інтерстицію. Це зумовлює порушення функціонального стану перитубулярних фібробластів, які продукують еритропоетин. Не виключена роль оксидативного стресу у розвитку захворювання. Реактивні форми кисню, взаємодіючи з окисом азоту в ендотелії, утворюють проміжні продукти, наприклад пероксинитрит, через що знижується загальна доступність оксиду азоту (NO). В результаті зростає судинний тонус при паралельномузбільшення споживання кисню, а посилюється тим самим гіпоксія на тлі нестачі окису азоту посилює пошкодження ниркового інтерстицію вільними радикалами. Страждає функція та виживання перитубулярних фібробластів та продукція еритропоетину різко падає. Можна припустити, що пошкодження інтерстиціальних клітин, що виробляють еритропоетин, або порушення взаємодії між канальцями, перитубулярними фібробластами та ендотелієм, необхідного для нормального гемопоезу, сприяють погіршенню секреції еритропоетину. Очевидно, що ці процеси відповідають стадії декомпенсації. За результатами наших досліджень, стадія «декомпенсації» з вироблення еритропоетину відповідає 4 стадії ХХН, розрахованої за формулою MDRD.
Формула MDRD, що дозволяє оцінити швидкість клубочкової фільтрації (СКФ), виведена на підставі визначення ниркового кліренсу 125йод-іоталамату у великої групи пацієнтів із широким діапазоном захворювань нирок. Основним недоліком цієї формули є недостатня точність розрахунку СКФ у пацієнтів із нормальною або незначною мірою зниженою функцією нирок. При скринінгу використання формули MDRD суттєво завищує кількість пацієнтів із ХХН.
Встановлення початкової стадії хронічної ниркової недостатності має важливе значення в урологічній практиці, оскільки дозволяє прогнозувати перебіг захворювання та визначати групу ризику розвитку важкої уремії.