Спосіб лікування та профілактики захворювань риб
Винахід відноситься до галузі біотехнології та ветеринарії. Запропоновано високоефективний спосіб лікування та профілактики захворювань у риб з використанням пробіотичного препарату нового покоління субаліну (ветосубаліну). На тонну корму для риб додають не менше 100 доз (700 млрд живих бактерій Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 у споровій формі) пробіотика субаліну (ветосубаліну) та згодовують щодня протягом п'яти днів. Спосіб дозволяє покращити шкірний покрив і стан зябрового апарату риб, стабілізувати функції кишечника та відновити природний баланс між нормальною та потенційно патогенною мікрофлорою кишечника. 2 табл.
Винахід відноситься до галузі біотехнології та ветеринарії і може бути використане в рибництві для лікування та профілактики захворювань риб, зокрема таких, як аеромоноз.
Аеромонади - збудники бактеріальної геморрагічної септицемії у риб, які можуть викликати геморрагії у теплокровних, у тому числі у людини. Іноді при спалаху аеромонозу виділяються вірулентні штами, що викликають 100% загибель риби протягом першої доби. Відомо також, що спалахам захворюваності сприяє зниження імунітету, спричинене стресовими екологічними факторами.
Для лікування та профілактики цих захворювань найбільш широко використовуються антибіотики: левоміцетин, біоміцин, окситетрациклін, фуразолідон, а також комбікорми з кормогризином, біоміцином, фуразолідоном. Загальнопоширеним є застосування препаратів нітрофуранів. Курс лікування антибіотиками становить не менше 10 днів і часто призводить до імунодепресивних станів у риб, погіршення епізоотичної ситуації, а також погіршення споживчих якостей промислової риби через наявність у ній антибіотиків [1].
Альтернативою застосування антибіотиківє використання пробіотичних препаратів з живих бактерій, які мають антагоністичну дію щодо збудників захворювання [2].
Найбільш близьким до заявляється способу є спосіб лікування та профілактики захворювань риб, що полягає в згодовуванні риб лікувального корму, що містить пробіотичний препарат азогідін на основі Azomonas agilis і Lactobacterium acidophilus. Застосування цього препарату дозволило отримати позитивний результат на лососевому рибозаводі та тепловодному ставковому господарстві [3, прототип].
Однак недоліком способу-прототипу є обмеженість застосування, тому що бактерії, що входять до складу азогіліну, здійснюють свою життєдіяльність, проявляючи антибактеріальну активність лише в тепловодних умовах, що обмежує сферу його застосування. Крім того, препарат не має виражених антивірусних та імуномодулюючих властивостей.
Технічним завданням винаходу є розробка способу лікування та профілактики захворювань риб, що дозволяє розширити сферу застосування.
Поставлене завдання вирішується шляхом використання для лікування та профілактики захворювань риб пробіотика субаліну.
Субалін (ветосубалін) є препаратом нового покоління, одержаним генно-інженерними методами для цілеспрямованого поліпшення лікувально-профілактичних властивостей пробіотика [4]. Бактерії Bacillus subtilis ВКПМ В-4759, що входять до складу зазначеного пробіотичного препарату, крім природних антагоністичних властивостей щодо патогенної мікрофлори, мають здатність синтезувати інтерферон-альфа, що володіє антивірусною та імуномоделюючим дією [5]. Субалін показав високу ефективність у тваринництві [6].
Підставою для використання субаліну в рибництві є такідані: - бацили можуть здійснювати свою життєдіяльність і за нижчих температур в організмі пойкілотермних тварин, до яких відносять і риб; - інтерферони, хоч і є видоспецифічними білками, проте часткова гомологія дозволяє виявляти, хоч і знижену, специфічну активність у еволюційно далеко віддалених видів тварин.
Пропонований спосіб лікування та профілактики захворюваності серед риб, зокрема аеромонозом, полягає у використанні лікувальних кормів з додаванням субаліну в кількості не менше 100 доз (700 млрд живих бактерій Bacillus subtilis ВКПМ В-4759 у споровій формі) на 1 тонну корму з розрахунку 5% лікувального корму до маси риб. Корм дається щодня протягом щонайменше 5 днів.
Винахід ілюструється наведеними нижче прикладами.
Приклад 1. Пригнічення субаліном росту бактерій-збудників аеромонозів риб при сумісному культивуванні in vitro.
Оскільки антагоністичні властивості сінної палички (Bacillus subtilis) виявляються на незбагаченому поживному середовищі, випробування проводять на пептонній воді. У пробірки з пептонною водою вносять субалін по 0,04 дози до кінцевої концентрації 0,008 спор дози. Після добового культивування відзначається помутніння пептонної води. У всі 8 пробірок вносять суспензії культур аеромонад, патогенних для риб штамів, вирощених протягом доби на м'ясопептонному агарі та змитих фізіологічним розчином, і розведених до концентрації 1 млн кл./мл (загалом близько 100 тис.кл.). Для контролю культури аеромонад висівають у пептонну воду без субаліну. Культивування проводять при 20 o З, щодобово проводять висіви на чашки з середовищем Ендо для підрахунку життєздатних аеромонад. Результати представлені у табл.1.
Результати, подані в табл.1, свідчать про те,що бактерії субаліну в дозі 0,008/мл активно пригнічують зростання аеромонад – збудників аеромонозу.
Приклад 2. Профілактична дія субаліну під час експериментального зараження риб в акваріальних умовах.
Матеріалом для дослідження є сеголетки коропа середньою штучною масою 22 грами, доставлені в акваріальну лабораторну установку з ТХР "Шатурське". Риб містять у непроточних акваріумах (при працюючих аераторах) з температурою води 19-20 o C; годують стандартним раціоном. Після адаптації (протягом 14 днів) риб ділять на 4 групи: три досвідчені та одну контрольну, по 20 особин у кожній групі. У дослідних групах випробовують дію субаліну у різних дозах. Риби контрольної групи препарат не одержують. Лікувальний корм із субаліном готують перед вживанням так: інгредієнти корму зволожують теплою кип'яченою водою, ретельно перемішують і додають по краплях водний розчин субаліну в розведенні 1:5. Після перемішування вологу мішанку згодовують коропам, що знаходилися в акваріумах. Норму добового годівлі визначають із розрахунку 5% корму до маси риб. Карпів годують лікувальним кормом два дні поспіль, потім переходять на звичайний раціон. Через добу після дворазового згодовування субаліну в суміші з кормом, сеголетков коропа піддають внутрішньочеревному зараженню дводобовою бульйонною культурою A. hidrophila в дозі 0,2 мл на 1 рибу, що відповідає 0,2 млрд мікробних клітин. За піддослідними рибами спостерігають упродовж 12 днів. Враховують поведінкові реакції риб, клінічні ознаки хвороби. Після закінчення досвіду проводять анатомічне розтин риб. Поїдання кормів з добавкою субаліну була задовільною; через 5 годин лікувальний корм з'їдався рибами повністю і не було помічено жодних відхилень у поведінці риб чи порушеньфізіологічного статусу
У контрольній групі перший випадок загибелі коропів констатували на третю добу після зараження. У двох дослідних групах перші випадки загибелі риб відмічені на 4-5 день після зараження аеромонадами. У хворих риб (контрольна група) відзначали екзофтальмію, загальне та локальне ерошення луски, випинання анусу, асцит, точкові крововиливи на поверхні тіла та в основі грудних плавців. У дослідних групах ознаки хвороби були менш виражено. У третій дослідній групі, де риби отримували найбільшу дозу субаліну, загибель коропів відзначена на 9-10 день після зараження. Результати дослідів представлені у табл.2.
Приклад 3. Лікувальний ефект субаліну при аеромоноз риб.
Експерименти проводили у нагульних ставках Бісерівського рибокомбінату під час спалаху аеромонозу. Перед виробничими випробуваннями було проведено клінічний огляд та іхтіопатологічне дослідження 100 екземплярів коропа з нагульного ставка. У всіх оглянутих риб відзначена сухість шкірного покриву (у дзеркальних і лускатих коропів), анемія зябер, гіперемія черевця, точкові та плямисті крововиливи, поодинокі виразки на поверхні тіла (більш ніж у 60% оглянутих риб), запалення ануса (20% риб). При анатомічному розтині відзначені анемія печінки, збільшення об'єму та в'ялість нирок, на слизовій оболонці кишечника у всіх підданих розтині риб вогнища точкових і плямистих крововиливів (передній і середній відділи), ознаки запалення плавального міхура (у 41% риб), гіперемія маги печінки, нирок, зовнішніх капілярів кишківника). На підставі клінічного огляду та аналізу результатів анатомічного розтину було поставлено діагноз: аеромоноз коропів.
Таким чином, запропоновано високоефективний спосіб лікування та профілактикизахворювання риб із використанням пробіотичного препарату субаліну.
2. Смирнов В.В., Резнік С.Р., Сорокулова І.Б. та ін Сучасні уявлення про механізми лікувально-профілактичної дії пробіотиків та бактерій роду Bacillus// Мікробіол. журн. – 1993. – 55, 4. – С. 92-112.
3. Карасьова Т. А. Ефективність застосування біостимуляторів та бактеріальних препаратів для боротьби з хворобами заводської молоді сьомги: Зб. наук. праць "Заполярна марікультура". Мурманськ, 1994 р.
4. Сорокулова І.Б., Білявська В.А., Масичева В.І., Смирнов В.В. Рекомбінантні пробіотики: проблеми та перспективи використання для медицини та ветеринарії// Вісник РАМН, 1997, 3, с. 46-49.
5. Патент України 1839459, кл. 5 C 12 N 1/21, 1994
6. Патент Україна 2035185, кл. 5 А 61 До 35/66, 1995
Спосіб лікування та профілактики захворювань риб, що полягає в згодовуванні рибам лікувального корму, що містить пробіотичний препарат, який відрізняється тим, що як пробіотик використовують субалін (ветосубалін) з розрахунку не менше 100 доз (700 млрд живих бактерій Bacillus subtilis ВКПМ В-475 ) на тонну корму протягом п'яти днів.